微生物學(xué)基礎(chǔ)知識

第一章  微生物概述

一. 什么是微生物

微生物是一類肉眼不能直接看見，必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大幾百倍、幾千倍甚至幾萬倍才能觀察到的微小生物的總稱。

微生物具有形體微小、結(jié)構(gòu)簡單；繁殖迅速、容易變異；種類繁多、分布廣泛等特點(diǎn)。 

二. 微生物的分類：

根據(jù)微生物有無細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)、分化程度、化學(xué)組成等特點(diǎn)，可分為三大類。

1. 非細(xì)胞型微生物  無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，由單一核酸（DNA/RNA）和蛋白質(zhì)衣殼組成，必須在活細(xì)胞內(nèi)增殖。病毒屬于此類微生物。

2. 原核細(xì)胞型微生物  細(xì)胞核分化程度低，只有DNA盤繞而成的擬核，無核仁和核膜。這類微生物包括細(xì)菌、衣原體、支原體、立克次體、螺旋體和放線菌。

3. 真核細(xì)胞型微生物  細(xì)胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色體，能進(jìn)行有絲分裂。如真菌、藻類等。

三. 微生物的作用及危害

1. 微生物的作用

絕大多數(shù)微生物對人和動物是有益的，已廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥、釀造、化工、制革、石油等行業(yè)，發(fā)揮了越來越重要的作用。例如與我們?nèi)粘Ｉ蠲芮邢嚓P(guān)的如酸奶、酒類、抗生素、疫苗等。

2. 微生物的危害

微生物中也有一部分能引起人及動、植物發(fā)生病害，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物。如人類的許多傳染?。ǜ忻?、傷寒、痢疾、結(jié)核、脊髄灰質(zhì)炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。 

從藥品生產(chǎn)的衛(wèi)生學(xué)而言，微生物對藥品的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格的重要因素。 

第二章  微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)

一. 細(xì)菌

細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡單、細(xì)胞壁堅韌，以二分裂方式無性繁殖的原核微生物，分布廣泛。

1. 細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

    觀察細(xì)菌最常用的儀器是光學(xué)顯微鏡，其大小可以用測微尺在顯微鏡下測量，一般以微米為單位。細(xì)菌按其形態(tài)不同，主要分為球菌、桿菌和螺形菌三類。

   （1） 球菌  多數(shù)球菌直徑在1微米左右，外觀呈球形或近似球形。由于繁殖時分裂平面不同可形成不同的排列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。

   （2） 桿菌  形態(tài)多數(shù)呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多數(shù)呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈狀桿菌、球桿菌等。

   （3） 螺形菌  菌體彎曲，呈弧形或螺旋形。如幽門螺桿菌。

    細(xì)菌雖小，仍具有一定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)等各種細(xì)菌都有，是細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)。

2. 細(xì)菌的繁殖

    二分裂繁殖是細(xì)菌最普遍、最主要的繁殖方式。在分裂前先延長菌體，染色體復(fù)制為二，然后垂直于長軸分裂，細(xì)胞赤道附近的細(xì)胞質(zhì)膜凹陷生長，直至形成橫隔膜，同時形成橫隔壁，這樣便產(chǎn)生兩個子細(xì)胞?！?/SPAN> 

細(xì)菌生長速度很快，一般約20min分裂一次。若按此速度計算，細(xì)菌群體將龐大到難以想象的程度。但事實(shí)上由于細(xì)菌繁殖中營養(yǎng)物質(zhì)的逐漸消耗，有害代謝產(chǎn)物的逐漸積累，細(xì)菌不可能始終保持高速度的無限繁殖。經(jīng)過一段時間后，細(xì)菌繁殖速度逐漸減慢，死亡菌數(shù)增多，活菌增長率隨之下降并趨于停滯。

3. 細(xì)菌的菌落

單個或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長繁殖后，會形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)，這就是菌落。細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。

二. 真菌

真菌是一類有細(xì)胞壁，無葉綠素，以寄生或腐生方式生存，少數(shù)為單細(xì)胞，多數(shù)為多細(xì)胞，能進(jìn)行無性或有性繁殖的一類真核細(xì)胞型微生物。

真菌包括單細(xì)胞與多細(xì)胞兩類。單細(xì)胞真菌呈圓形或卵圓形，稱為酵母菌；多細(xì)胞真菌由菌絲和孢子組成，并交織成團(tuán)，稱絲狀菌或霉菌。

真菌生長的最適的溫度為22～28℃，最適的pH值為4～6。其繁殖能力強(qiáng)，但生長速度比細(xì)菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌對熱的抵抗力不強(qiáng)，一般加熱60~70℃ 1小時即被殺死，但對干燥、日光、紫外線和一些化學(xué)消毒劑有抵抗力，但對2.5％碘酒、10％甲醛則較敏感。

1. 霉菌

霉菌是絲狀真菌的俗稱，意即"發(fā)霉的真菌"，它們往往能形成分枝繁茂的菌絲體，但又不象蘑菇那樣產(chǎn)生大型的子實(shí)體。

（1）霉菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)

構(gòu)成霉菌營養(yǎng)體的基本單位是菌絲。菌絲是一種管狀的細(xì)絲，把它放在顯微鏡下觀察，很像一根透明膠管，它的直徑一般為3-10微米，比細(xì)菌的細(xì)胞約粗幾倍到幾十倍。菌絲可伸長并產(chǎn)生分枝，許多分枝的菌絲相互交織在一起，就叫菌絲體。

   （2）霉菌的繁殖

霉菌有著極強(qiáng)的繁殖能力，而且繁殖方式也是多種多樣的。在自然界中，霉菌主要依靠產(chǎn)生形形色色的孢子進(jìn)行繁殖。孢子有點(diǎn)像植物的種子，不過數(shù)量特別多，特別小。

霉菌的孢子具有小、輕、干、多，以及形態(tài)色澤各異、休眠期長和抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn)，每個個體所產(chǎn)生的孢子數(shù)，經(jīng)常是成千上萬的，有時竟達(dá)幾百億、幾千億甚至更多。這些特點(diǎn)有助于霉菌在自然界中隨處散播和繁殖。對人類的實(shí)踐來說，孢子的這些特點(diǎn)有利于接種、擴(kuò)大培養(yǎng)、菌種選育、保藏和鑒定等工作，對人類的不利之處則是易于造成污染、霉變和易于傳播動植物的霉菌病害。 

（3）霉菌的菌落

由于霉菌的菌絲較粗而長，因而霉菌的菌落較大，有的霉菌的菌絲蔓延，沒有局限性。菌落質(zhì)地一般比較疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與附著物的連接緊密，不易挑取；菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致。 

2. 酵母菌

酵母菌在自然界中分布很廣，尤其喜歡在偏酸性且含糖較多的環(huán)境中生長，例如，在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果園土壤中最為常見。 

（1）酵母菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)

酵母菌是單細(xì)胞真核微生物。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)通常有球形、卵圓形、臘腸形、橢圓形、檸檬形或藕節(jié)形等。比細(xì)菌的單細(xì)胞個體要大得多，一般為1-5微米×5-30微米。

酵母菌具有典型的真核細(xì)胞結(jié)構(gòu),有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、液泡、線粒體等。

（2）酵母菌的繁殖

酵母菌有多種繁殖方式，包括無性繁殖和有性繁殖。有人把只進(jìn)行無性繁殖的酵母菌稱作"假酵母"，而把進(jìn)行有性繁殖的酵母菌稱作"真酵母"。

（3）酵母菌的菌落

大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個別為黑色。 

三. 病毒

病毒屬非細(xì)胞型微生物，在自然界分布非常廣泛，可在人、動物、植物、真菌和細(xì)菌中寄居并引起感染。病毒是體積最小、結(jié)構(gòu)最簡單的微生物，它僅有一種核酸（DNA或RNA）作其遺傳物質(zhì)。病毒必須在宿主活細(xì)胞內(nèi)寄生，依靠細(xì)胞提供的能量、營養(yǎng)物質(zhì)及生物大分子合成機(jī)制，完成病毒的復(fù)制過程。

病毒與人類的關(guān)系極為密切，人類的傳染病約75％是由病毒引起的。有些病毒傳染性強(qiáng)，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。

1. 病毒的大小、形態(tài)和結(jié)構(gòu)　

病毒體積微小，大多數(shù)病毒只有采用電子顯微鏡將其放大數(shù)千、數(shù)萬倍才能看見。病毒的形態(tài)不一，基本可歸納為三種：桿狀、球狀和這兩種形態(tài)結(jié)合的復(fù)合型。

病毒沒有細(xì)胞構(gòu)造，病毒粒子的主要成分是核酸和蛋白質(zhì)，在宿主細(xì)胞協(xié)助下，通過核酸的復(fù)制和核酸蛋白裝配的形式進(jìn)行增殖。病毒的結(jié)構(gòu)通常有螺旋對稱型、20面體立體對稱型和復(fù)合對稱型。

2. 病毒的增殖

病毒只有在宿主的活細(xì)胞里才能進(jìn)行增殖。病毒的增殖不是二分裂方式，而是以其基因組為模板，藉DNA多聚酶或RNA多聚酶以及其它必要因素，經(jīng)過復(fù)雜的生化合成過程，復(fù)制出病毒的基因組。此時宿主細(xì)胞的生化合成受到抑制，病毒基因則經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等過程，產(chǎn)生大量病毒蛋白質(zhì)，再經(jīng)過裝配，最終釋放出子代病毒。病毒這種以核酸分子為模板進(jìn)行增殖的方式稱為自我復(fù)制。

3. 理化因素對病毒的影響

   （1）物理因素

①溫度  多數(shù)病毒耐冷不耐熱。在干冰溫度（-70℃）和液氮溫度（-196℃）下，病毒感染性可保持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。在50～60℃ 30分鐘，100℃幾秒鐘即可滅活。

②pH  多數(shù)病毒在pH5~9范圍內(nèi)穩(wěn)定，強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下可被滅活。

③射線  X射線、γ射線和紫外線都能滅活病毒。

（2）化學(xué)因素

主要有化學(xué)消毒劑、抗生素及中草藥等。除強(qiáng)酸、強(qiáng)堿消毒劑外，酚類、氧化劑、鹵素類、醇類等對病毒均有滅活作用。例如2003年非典時期，大家都用84、過氧乙酸等來消毒，84的主要成分就是次氯酸鈉，就是剛才所說的鹵素類消毒劑，而過氧乙酸的就是冰醋酸和過氧化氫按一定比例混合制成的，屬于強(qiáng)酸加氧化。

第三章  微生物的營養(yǎng)

一. 微生物的營養(yǎng)要求

微生物生長繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽和生長因子等。

1. 水

水是各種生物細(xì)胞必需的。水是良好的溶劑，微生物的新陳代謝過程中的一切生化反應(yīng)都離不開水的作用。

2. 碳源

碳源是合成菌體成分的原料，也是微生物獲取能量的主要來源。整體上看來，微生物可以利用的碳源范圍極廣，分為有機(jī)碳源和無機(jī)碳源兩大類。凡必須利用有機(jī)碳源的微生物就是異養(yǎng)微生物，凡能利用無機(jī)碳源的微生物就是自養(yǎng)微生物。糖類是最廣泛利用的碳源。

3. 氮源

氮源主要是供給合成菌體結(jié)構(gòu)的原料，很少作為能源利用。與碳源相似，微生物作為一個整體來說，能利用的碳源種類十分廣泛。某些微生物（如固氮菌）能利用空氣中分子態(tài)的氮或利用無機(jī)氮化物如銨鹽、硝酸鹽合成有機(jī)氮化物。

4. 無機(jī)鹽類

無機(jī)鹽主要可為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素。微生物需要的無機(jī)鹽類很多，主要有P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等，其主要功能為構(gòu)成菌體成分；調(diào)節(jié)滲透壓；作為某些酶的成分，并能激活酶的活性等。

5. 生長因子

有些微生物雖然供給它適合的碳源氮源和無機(jī)鹽類，仍不能生長，還要供給一定量的所謂“生長因子”。其種類很多，主要是B族維生素的化合物等。生長因子可以從酵母浸出液、血液或血清中獲得。

二. 微生物的營養(yǎng)類型

根據(jù)微生物對碳源的要求不同，可將其分為自養(yǎng)菌和異養(yǎng)菌兩大營養(yǎng)類型。

凡能利用無機(jī)碳合成菌體內(nèi)有機(jī)碳化物的，叫自養(yǎng)菌；不能利用無機(jī)碳而需要有機(jī)碳才能合成菌體內(nèi)有機(jī)碳化物的，為異養(yǎng)菌。

根據(jù)其生命活動所需能量的來源不同，可分為光能營養(yǎng)菌和化能營養(yǎng)菌。前者是從光線中獲得能量，后者則從化學(xué)物質(zhì)氧化中取得能量。

因此，根據(jù)微生物所需的碳源和能源不同，可將微生物分為光能自養(yǎng)菌、光能異養(yǎng)菌、化能自養(yǎng)菌、化能異養(yǎng)菌等四類。

第四章  消毒與滅菌

下列術(shù)語常用于表示物理或化學(xué)方法對微生物的殺滅程度。

消毒：殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含細(xì)菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。

滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細(xì)菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。

抑菌：抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細(xì)菌的繁殖。

    防腐：防止或抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。同一種化學(xué)藥品在高濃度時為消毒劑，低濃度時常為防腐劑。

消毒與滅菌的方法一般可分為物理學(xué)方法和化學(xué)方法兩大類。

一. 物理消毒滅菌法

用于消毒滅菌的物理因素有熱力、輻射、過濾等。

1. 熱力滅菌法

高溫對細(xì)菌具有明顯的致死作用，因此最常用于消毒與滅菌。多數(shù)無芽孢的細(xì)菌經(jīng)55～60℃作用30～60分鐘后死亡。經(jīng)80℃濕熱5～10分鐘可殺死所有細(xì)菌繁殖體、真菌和酵母菌。細(xì)菌芽孢對高溫有很強(qiáng)的抵抗力，例如炭疽芽孢桿菌的芽孢，耐受5～15分鐘的煮沸，而肉毒梭菌的芽孢則需煮沸3～5小時才死亡。

熱力滅菌法分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類，相同溫度下，后者的滅菌效力比前者大。

2. 輻射滅菌法

   （1）紫外線  作用于DNA，使細(xì)菌DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄受到干擾，導(dǎo)致細(xì)菌變異或死亡。常用于室內(nèi)的空氣消毒。

（2）電離輻射  對各種細(xì)菌均有致死作用。常用于大量一次性醫(yī)用塑料制品的消毒和食品的消毒。

（3）微波  是一種波長為1mm～1m的電磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜及陶瓷等物質(zhì)，但不能穿透金屬表面。多用于檢驗(yàn)室用品、無菌室的用具的消毒。

3. 濾過除菌法

用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去,以達(dá)到除菌目的。

濾菌器含有微細(xì)小孔＜0.22微米,只允許液體或氣體通過,而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過 。

適用范圍：血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。

二. 化學(xué)消毒滅菌法

許多化學(xué)藥物能影響微生物的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活性，從而發(fā)揮防腐、消毒及滅菌的作用。

潔凈室(區(qū))應(yīng)定期消毒，使用的消毒劑不得對設(shè)備、物料和成品產(chǎn)生污染。消毒劑品種應(yīng)定期更換，防止產(chǎn)生耐藥菌株。

常用消毒劑的種類和用途

第五章  GMP與微生物

一. 藥品生產(chǎn)中微生物的生態(tài)學(xué)分布

在藥品生產(chǎn)中，由于受到各種要素（制藥廠房環(huán)境的空氣、制藥用水、操作人員、物料、設(shè)備等）的影響，都可能導(dǎo)致藥品的微生物污染。因此，GMP對各種要素都提出了防止污染的基本要求。中國藥典微生物限度檢查法規(guī)定的檢查項目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)和控制菌檢查。

1. 空氣中的微生物

空氣本身并不產(chǎn)生污染，因?yàn)榭諝獠缓匾乃趾蜖I養(yǎng)，不是適合微生物生長繁殖的天然環(huán)境，但是一般的大氣環(huán)境仍含有不少的細(xì)菌、霉菌和酵母菌。

空氣中的微生物來自灰塵微粒（自然因素如風(fēng)，人為因素如車），來自人的皮膚與衣服，以及談話、咳嗽、打噴嚏等造成的飛沫。空氣中微生物數(shù)量取決于灰塵量和活動狀況，例如，有活躍人群的地方微生物多，不清潔的房間比清潔的房間多，潮濕的地方比干燥的地方多。因此，空氣是侵襲我們產(chǎn)品的污染物的主要媒介。因此保持空氣潔凈是極為重要的。

在藥品生產(chǎn)中，減少空氣中微生物數(shù)量的方法有多種，常用的有以下3種方法：

① 空氣潔凈技術(shù)采用的過濾方法  

過濾是最常用的方法。過濾介質(zhì)種類很多，例如：纖維素、玻璃棉或人造纖維等?？諝鈨艋b置可用于整個房間如無菌操作室，也可只限于操作區(qū)域局部如超凈工作臺。

② 化學(xué)消毒方法  采用消毒劑作用于室內(nèi)空氣和物體表面。

③ 紫外線照射方法  采用紫外線對室內(nèi)空氣進(jìn)行照射。

2. 制藥用水中的微生物

在生產(chǎn)過程中，水是應(yīng)用最廣泛的原料之一。從理論上來講，微生物在純水中是不能生長的。但是，所有的各類水不管怎樣仔細(xì)蒸溜或過濾，總會含有一定量的可溶性有機(jī)物和鹽類。正是這些可溶性的物質(zhì)被微生物利用作為它們生長的養(yǎng)料源泉。

工藝用水在制藥企業(yè)防止污染及作為制藥用水方面至關(guān)重要。因?yàn)樗粌H直接用于產(chǎn)品的生產(chǎn)，而且也用于清洗設(shè)備和用于冷卻。藥品微生物污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于工藝用水，因?yàn)樗俏⑸锷L代謝的一個必要成分。中國藥典收載了純化水和注射用水的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

常用的對水消毒的方法，與空氣消毒的方法一樣，也是化學(xué)消毒劑、過濾與紫外線照射3種。

① 化學(xué)消毒劑方法  對水的消毒以化學(xué)消毒劑方法較常用，效果也最好。常使用次氯酸鈉或通氯氣。在使用中，應(yīng)注意到水系統(tǒng)中不能留有消毒不到的“死角”。

② 膜過濾法  適用于水系統(tǒng)的連續(xù)循環(huán)處理。

③ 紫外線照射法  在水系統(tǒng)中應(yīng)用紫外線照射消毒，適用于需要特殊處理的水（如光學(xué)透明度要求高），一般在末端之前。這種方法因處理過的水無臭無味，而優(yōu)于化學(xué)消毒劑方法；因不產(chǎn)生微生物移居濾器的現(xiàn)象，而優(yōu)于膜濾器。

在水系統(tǒng)中，這3種方法綜合應(yīng)用，設(shè)計安裝在適當(dāng)?shù)奈恢谩?/SPAN>

3. 廠房建筑與設(shè)備表面的微生物

廠房建筑物的內(nèi)表面，以及設(shè)備表面、容器內(nèi)外表面等，都可以是微生物寄生存的地方。由于空氣中的濕度，所有表面都包上一層含水的薄膜。這層薄膜由于靜電吸引而飽含塵埃微粒，有很多時候，表面還覆蓋一層油狀物質(zhì)，此層油膜易受到塵粒污染。表面因塵埃微粒和微生物由空氣傳播的回降而受到污染。 

請記?。阂粋€表面看起來很干凈，而實(shí)際上已經(jīng)被千百萬個微生物所污染，除非已經(jīng)做了正確的消毒滅菌。

制藥企業(yè)生產(chǎn)車間的廠房，庫房及實(shí)驗(yàn)室都必須清潔整齊。建筑物表面不透水，光滑平整、無裂縫、接口嚴(yán)密、無顆粒物脫落，并能耐受清洗和消毒。設(shè)備、管道應(yīng)易于拆卸、結(jié)構(gòu)簡單，便于清潔消毒。特別是藥品生產(chǎn)過程中使用的容器，包括內(nèi)包裝容器，都應(yīng)進(jìn)行清洗和消毒。

4. 人體的微生物

微生物廣泛分布于自然界，人體與自然環(huán)境接觸，當(dāng)然也不能例外。凡是人體體表皮膚與外界相通的腔道如口腔、鼻腔、腸道、眼結(jié)膜、泌尿生殖道等均存在不同種類的微生物，其中有些微生物可以長期寄居在人的體表、皮膚和黏膜上。

以下舉出一些人員污染的途徑和方式：

ü 人的頭發(fā)和皮膚

ü 水滴

ü 衣著

ü 化妝品和珠寶手飾

ü 生產(chǎn)過程中人們所引起的混雜和誤差

(1) 人的頭發(fā)和皮膚 

每分鐘從人類皮膚中要散發(fā)出約10,000個微生物。我們的手上，也擁有大量的微生物。此外，在人們正常的日?；顒又卸冀佑|大量微生物。皮膚上經(jīng)常存在白色葡萄球菌、枯草桿菌、類白喉桿菌、大腸桿菌等，有時還有非致病性的抗酸菌、真菌等。

(2) 水滴

呼吸和咳嗽將產(chǎn)生出大量水滴，這種水滴既含有塵粒污染也含有微生物污染。

口腔是對污染最為敏感的地區(qū)，常見的微生物有白色葡萄球菌、類白喉桿菌、乳酸桿菌、放線菌、真菌、螺旋體等。呼吸道常存在空氣中的細(xì)菌，如葡萄球菌、類白喉桿菌；在鼻咽部還有鏈球菌、奈氏菌屬。一次咳嗽或噴嚏將把千百萬個微生物引入工作環(huán)境內(nèi)。 

(3) 衣著

從可洗滌的紡織物中，可能散發(fā)出棉絨和淀粉粒。而從羊毛、開士米和其它松軟的針紡織物中也可能散落出纖維和磨損下的微粒。污染也可能通過我們的鞋子進(jìn)入工作場所。 

(4) 化妝品和珠寶手飾 

發(fā)膠、香水、睫毛膏、香粉等，為微生物污染提供了極好的源泉。耳環(huán)、戒指、項鏈、手鏈能傳播微生物污染。如果，一小片珠寶碎片落入一批產(chǎn)品中，則可能引起嚴(yán)重的塵粒污染。 

(5) 生產(chǎn)過程中人們所引起的混雜和誤差

由人引起的污染也可能來自于生產(chǎn)過程中出現(xiàn)的混雜和誤差。例如，當(dāng)員工沒有按照SOP進(jìn)行工作時，車間的污染程度增加。讓裝產(chǎn)品的容器不加蓋存放，將導(dǎo)致產(chǎn)品污染。

    由于人體攜帶有不同種類的微生物，因此在藥品生產(chǎn)的全過程中，每個工序都有可能發(fā)生由人體攜帶的微生物導(dǎo)致藥品污染的危險。例如，用未經(jīng)清潔消毒的手直接接觸藥品使其污染，通過談話、咳嗽等方式引起藥品的污染。

人體不同部位所帶細(xì)菌數(shù)量

5. 物料的微生物

物料系指原料、輔料和包裝材料等。

原輔料可能將大量的微生物帶入到藥物制劑中。因此，選用符合標(biāo)準(zhǔn)的原輔料，將有利于控制藥品和環(huán)境的污染水平。

來源于動物的原料藥或輔料（如明膠），有可能被動物病原體所污染；來源于植物的原料藥或輔料（如淀粉）則可能被多種細(xì)菌、霉菌、酵母菌所污染。

原輔料的處理方法因藥物類型而異，許多原輔料需進(jìn)行消毒或滅菌處理。植物藥材可用晾曬、烘烤方法使之充分干燥，以減少微生物繁殖。

原輔料在儲藏過程中必須注意環(huán)境條件。

包裝材料，特別是內(nèi)包裝材料，一方面包裝藥品，另一方面防止外界微生物進(jìn)入藥中。若處理不當(dāng)，在藥品儲藏和運(yùn)輸過程中，極易引起污染，造成嚴(yán)重后果。總之，包裝材料應(yīng)考慮不同需要加以清潔或消毒處理進(jìn)行合理封裝。

原則是盡量減少微生物數(shù)量，預(yù)防發(fā)生污染。

二. 微生物污染導(dǎo)致藥物變質(zhì)的因素

藥品的生產(chǎn)、儲存、使用的全過程，都有因微生物污染而導(dǎo)致藥物變質(zhì)的因素。而藥物變質(zhì)，一般需要很高的微生物污染程度。也就是說，微生物面廣、量大的繁殖才出現(xiàn)顯著的易被覺察的損壞現(xiàn)象。

微生物污染導(dǎo)致藥物變質(zhì)的因素有以下幾個方面：

1. 微生物污染數(shù)量

在藥品生產(chǎn)中應(yīng)將微生物污染數(shù)量控制在最低限度，這就需要采取綜合措施。

2. 微生物生長的營養(yǎng)因素

許多藥物成分，都有微生物生長所需的碳源、氮源或無機(jī)鹽類。生產(chǎn)用水（純化水、注射用水）亦能支持微生物生長。

3. pH值

pH值為中性時最適合微生物生長。某些微生物在pH3.5或pH8.0～9.5仍能生長。

4. 溫度

對于微生物污染引起藥物變質(zhì)的溫度，不同的微生物有不同的最適溫度。根據(jù)微生物生長的最適溫度不同，可以將微生物分為嗜冷、兼性嗜冷、嗜溫、嗜熱和超嗜熱等五種不同的類型。對嗜溫微生物來說，可將藥物儲藏在陰冷、干燥處。

三. 防止微生物污染的原則

1. 了解污染源

對藥品生產(chǎn)全過程可能造成污染的來源，進(jìn)行深入的了解研究，從而設(shè)計一個完好的生產(chǎn)工藝，制定規(guī)章制度和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，從各個環(huán)節(jié)采取消毒和衛(wèi)生措施來防止微生物污染，使產(chǎn)品達(dá)到所要求的衛(wèi)生學(xué)質(zhì)量，包括穩(wěn)定性及各種微生物參數(shù)。

2. 進(jìn)行微生物監(jiān)測

在藥品生產(chǎn)過程中，應(yīng)按GMP要求不斷進(jìn)行各項微生物衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測。例如：對潔凈室空氣中的浮游菌、沉降菌的監(jiān)測；對無菌設(shè)備清潔滅菌的驗(yàn)證；對非無菌藥品進(jìn)行細(xì)菌和活菌數(shù)測定和病原菌的限制性檢查等。

四. 藥品生產(chǎn)人員衛(wèi)生注意事項

1. 新進(jìn)人員的健康檢查

藥品生產(chǎn)企業(yè)在招收新職工時，一定要對新職工進(jìn)行全面的健康檢查，要確保新進(jìn)廠的職工不患有急性或慢性傳染病。另外還要根據(jù)新進(jìn)職工安排的具體崗位性質(zhì)再確定其它具體檢查的項目。 

2. 建立生產(chǎn)人員健康檔案

藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立職工個人健康檔案，以便于檢查、了解、追蹤個人健康狀況。 

3. 培養(yǎng)藥品生產(chǎn)人員良好的個人衛(wèi)生習(xí)慣 

勤洗手、勤剪指甲；定期洗澡、勤理發(fā)；勤換衣服、勤洗工作服；

在生產(chǎn)區(qū)內(nèi)做到三個禁止：禁止吃東西、禁止吸煙、禁止大聲喧嘩。

4. 潔凈區(qū)生產(chǎn)人員要求

潔凈區(qū)工作人員要盡可能少而精，只有工作需要時才能進(jìn)入；操作人員在潔凈區(qū)動作要避免劇烈運(yùn)動，以減少人的發(fā)塵量；潔凈區(qū)的門應(yīng)關(guān)緊，避免不必要的移動，以保持潔凈區(qū)的風(fēng)速、風(fēng)量、風(fēng)型和風(fēng)壓；如果是無菌區(qū)的話，操作人員的自我約束就更多，要嚴(yán)格按無菌操作規(guī)程執(zhí)行。 

5. 藥品生產(chǎn)防污染控制措施

ü 劃分潔凈級別：100級、10000級、100000級、300000級

ü 嚴(yán)格更衣程序：一更、二更、三更

ü 消毒和滅菌

藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級別

 消毒和滅菌

 消毒：殺滅有害微生物

 常用消毒劑：新潔爾滅、石炭酸、酒精

 滅菌：殺滅所有微生物

 常用滅菌方法：物理法（干熱、濕熱、紫外）、化學(xué)法（甲醛熏蒸等）

常用消毒劑濃度及用途

6. 日常工作

 生產(chǎn)結(jié)束后崗位人員的工作：徹底清潔生產(chǎn)現(xiàn)場和設(shè)備表面；

 生產(chǎn)結(jié)束后滅菌人員的工作：用消毒劑擦拭房頂（包括高效送風(fēng)口）、墻壁、地面等，并開啟紫外燈；

 每月定期進(jìn)行一次大消毒。