動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)主要包括：細(xì)胞組織培養(yǎng)、細(xì)胞融合、單克隆抗體技術(shù)、胚胎移植、核移植等。

　　一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
　　㈠動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程

　?、湃〔模簭娜嘶騽?dòng)物體組織上分離小塊樣品（胚胎細(xì)胞或幼體細(xì)胞）
　?、齐x散細(xì)胞：用胰蛋白酶等處理組織塊樣品，水解細(xì)胞和細(xì)胞之間的蛋白質(zhì)，使其細(xì)胞分散；
　　⑶將細(xì)胞放入盛有一定濃度的細(xì)胞懸浮液的培養(yǎng)瓶中（液體培養(yǎng)基：水、無機(jī)鹽、氨基酸和葡萄糖、維生素和動(dòng)物血清），再將其置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，這個(gè)過程稱為原代培養(yǎng)；
　?、燃?xì)胞在培養(yǎng)瓶中貼壁培養(yǎng)，隨著細(xì)胞生長和增殖，要定期地用胰蛋白酶使細(xì)胞脫離瓶壁，分裝到多個(gè)培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，這個(gè)過程稱為傳代培養(yǎng)。

　　㈡細(xì)胞株和細(xì)胞系的概念：

　　㈢動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：
　　1、生產(chǎn)一些蛋白質(zhì)生物制品—病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體
　　2、檢測有毒物質(zhì)
　　3、燒傷病人的植皮

　　二、動(dòng)物細(xì)胞融合
　　㈠動(dòng)物細(xì)胞融合的過程
　　細(xì)胞融合是研究細(xì)胞間遺傳信息轉(zhuǎn)移、基因在染色體上定位，以及創(chuàng)造新細(xì)胞株的有效途徑。用病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合是最早采用的一種方法。

　　滅活病毒的作用：凝集蛋白質(zhì)，使膜分子重新排布。

　　㈡植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較

　　㈢應(yīng)用

　　三、單克隆抗體的制備
　　㈠傳統(tǒng)獲得抗體—血清抗體的特殊性：
　　產(chǎn)量低、特異性差、純度低、反應(yīng)不靈敏

　　㈡單克隆抗體是指通過克隆，形成遺傳物質(zhì)完全相同的細(xì)胞群，由該細(xì)胞群產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。
　　單克隆抗體技術(shù)尚處于研究階段，這項(xiàng)技術(shù)包含著細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞雜交技術(shù)等，是細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞雜交技術(shù)的綜合應(yīng)用。

　　㈢單克隆抗體技術(shù)的過程
　　1、將某抗原注入小鼠體內(nèi)，從其脾臟獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞；
　　2、用仙臺(tái)病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出雜交瘤細(xì)胞
　　3、在選擇性培養(yǎng)基中對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，從雜交瘤細(xì)胞中挑選產(chǎn)生某種抗體的細(xì)胞；
　　4、將選擇細(xì)胞進(jìn)行規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖（活體培養(yǎng)基）；
　　5、從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取大量的單克隆抗體。

　　流程圖如下：

　　㈣制備單克隆抗體的意義
　　1、在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義
　　2、在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。（早早孕試紙—抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體）
　　3、實(shí)驗(yàn)在單克隆抗體上連接抗癌藥物，制成“生物導(dǎo)彈”，定向地將藥物帶到癌細(xì)胞，消除癌細(xì)胞但不傷害健康細(xì)胞。

　　四、核移植
　　⑴核移植技術(shù)—鯉鯽魚的培養(yǎng)過程：
　　20世紀(jì)70年代，我國科學(xué)家用核移植技術(shù)成功地培育出將鯉魚和鯽魚優(yōu)點(diǎn)集于一身的、可正常繁殖的鯉鯽移核魚。具體方法是：用極細(xì)的玻璃管，從鯽魚未受精的卵細(xì)胞中吸出細(xì)胞核，再用同樣的方法，從鯉魚的囊胚細(xì)胞中吸出細(xì)胞核，然后把鯉魚囊胚細(xì)胞的核移植入去核的鯽魚未受精卵中，形成一個(gè)重組卵細(xì)胞，經(jīng)過精心培育長成鯉鯽移核魚。

　　⑵克隆羊多莉—Dolly的誕生過程

　　五、胚胎移植和胚胎分割移植
　　1、試管嬰兒
　　⑴概念：“試管嬰兒” 是指分別將卵子、精子取出后，在體外使其受精，并發(fā)育成胚胎后，再植回母體子宮內(nèi)發(fā)育。

　　⑵試管嬰兒進(jìn)行的步驟
　　藥物誘發(fā)超排卵→監(jiān)測卵泡→取卵→取精→體外受精→胚胎體外培養(yǎng)→胚胎移植→胚胎移植后補(bǔ)充激素（黃體酮）→胚胎移植后14天驗(yàn)晨尿確定是否妊娠→妊娠后14天，B超檢查胎兒數(shù)及胚胎著床部位。

　　2、哺乳動(dòng)物的胚胎移植：
　　由于哺乳動(dòng)物如牛、羊等，妊娠時(shí)間長，每胎產(chǎn)子數(shù)少，繁殖速度比較慢。為解決這一問題，科學(xué)家們采用了胚胎移植技術(shù)。以優(yōu)良種牛的繁殖為例：首先用激素促進(jìn)良種母牛多排卵，然后把卵細(xì)胞從母牛體內(nèi)取出，在試管內(nèi)與人工采集的精子進(jìn)行體外受精，培育成胚胎，再把胚胎送入經(jīng)過激素處理、可以接受胚胎植入的母牛子宮內(nèi)，孕育成小牛產(chǎn)出。用這種方法得到的小牛叫做試管牛，一頭良種母牛一年可繁殖這樣的試管牛上百頭。除了牛之外，羊、兔、豬、馬、貓等動(dòng)物的胚胎移植也獲得了成功。

　　【重點(diǎn)、難點(diǎn)、拓展知識(shí)解析】
　　1、克隆的概念
　　“克隆”從英文“clone”音譯而來，其定義是無性繁殖系，在生物學(xué)領(lǐng)域有3個(gè)不同層次的含義?，F(xiàn)在引申出的概念：遺傳背景完全相同的一個(gè)群體。
　　1）DNA水平，特定DNA片段通過重組DNA技術(shù)插入到一個(gè)載體（如質(zhì)粒和病毒等）中，然后在宿主細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制所得到的大量完全相同的該DNA片段的“群體”。

　　2）在細(xì)胞水平，克隆是指由一個(gè)單一的共同祖先細(xì)胞分裂所形成的一個(gè)細(xì)胞群體。比如：使一個(gè)單一細(xì)胞在體外的培養(yǎng)液中分裂若干代所形成的一個(gè)遺傳背景完全相同的細(xì)胞集體即為一個(gè)細(xì)胞克隆。又如，在脊椎動(dòng)物體內(nèi)，當(dāng)有外源物（如細(xì)菌或病毒）侵入時(shí)，會(huì)通過免疫反應(yīng)產(chǎn)生特異的識(shí)別抗體。產(chǎn)生某一特定抗體的所有漿細(xì)胞都是由同一個(gè)B細(xì)胞分裂而成，這樣一個(gè)漿細(xì)胞群體也是一個(gè)細(xì)胞克隆。

　　3）在個(gè)體水平，克隆是指基因型完全相同的兩個(gè)或更多的個(gè)體組成的一個(gè)群體。比如：兩個(gè)同卵雙胞胎即為一個(gè)克隆。因?yàn)樗ㄋ﹤儊碜酝粋€(gè)受精卵細(xì)胞，所以遺傳背景完全一樣。生物個(gè)體的克隆可分為植物個(gè)體的克隆、動(dòng)物個(gè)體的克隆。

　　2、克隆動(dòng)物的早衰：2003年2月14日晚間，世界上第一頭體細(xì)胞克隆動(dòng)物多利因肺部感染而被實(shí)施安樂死，與普通綿羊十一二年的壽命相比，早夭的多利只活了6年零5個(gè)月，肺部感染是綿羊常見的一種“老年病”，而年僅6歲、剛剛步入中年的多利出現(xiàn)早衰的現(xiàn)象，使人們對于克隆動(dòng)物的壽命產(chǎn)生了疑問。專家對此的解釋是；一般而言，細(xì)胞中的染色體每分裂一次，其端部的端粒就縮短一點(diǎn)，縮短到一定程度，染色體就無法分裂，細(xì)胞就開始凋亡，生命開始衰老。因此，生命的長短主要取決于染色體分裂的次數(shù)，多利羊之所以出現(xiàn)早衰的現(xiàn)象，那是因?yàn)樗倪z傳物質(zhì)取自于一頭6歲綿羊，按照普通綿羊十一二歲的壽命。這頭綿羊體細(xì)胞中的染色體已經(jīng)分裂了六七年，因此，它在多利的體內(nèi)也只能再持續(xù)分裂六七年，所以說，克隆技術(shù)無法讓細(xì)胞“返老還童”。

　　3、克隆動(dòng)物的負(fù)面影響：科學(xué)研究證明，用克隆技術(shù)復(fù)制出兩個(gè)外貌一模一樣的動(dòng)物是不可能的。羅斯林研究所繁育的四只利用基因完全相同的綿羊胚胎細(xì)胞培育的道賽特公羊長大后，體貌特征出現(xiàn)了明顯的差異。引起這些差別的原因尚未清楚，但很可能是因?yàn)椋河脕砜寺∵@4只公羊的4個(gè)細(xì)胞核被放入了從不同的母羊體內(nèi)提取的卵細(xì)胞中。每個(gè)卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)與植入的核物質(zhì)發(fā)生相互作用的方式會(huì)略有不同；特別是細(xì)胞質(zhì)中的線粒體中包含的獨(dú)立DNA，它與核物質(zhì)相互作用的差異也許足以改變正在發(fā)育的胚胎。此外，基因突變和環(huán)境對生長發(fā)育的影響也可能導(dǎo)致克隆動(dòng)物之間的差異。

　　4、試管嬰兒技術(shù)的發(fā)展
　　試管嬰兒如今已發(fā)展到第四代。
　　第一代是指常規(guī)體外受精—胚胎移植及衍生技術(shù)，該技術(shù)適應(yīng)于女性不孕問題，如輸卵管性不育、排卵障礙、子宮內(nèi)膜異位癥、宮腔內(nèi)人工授精失敗、抗精子抗體的免疫因素、原因不明的女性不孕癥等；

　　第二代是指單精子卵細(xì)胞漿內(nèi)顯微注射受精技術(shù)，這種技術(shù)是幫助少、弱、畸精子的受孕，解決的是男性不育問題；

　　第三代試管嬰兒是指胚胎植入前遺傳學(xué)診斷技術(shù)，此技術(shù)主要針對單基因遺傳?。喝绲刂泻Ｘ氀Y、血友病以及染色體異常等疾病，其胚胎在分裂為8個(gè)細(xì)胞時(shí)做遺傳缺陷診斷，其基本理論為：從多個(gè)受精卵中選擇出基因型最好的移植。如伴Y染色體遺傳病 ，只要通過PGD技術(shù)選擇生女兒便可以避免遺傳病遺傳給新生兒。該技術(shù)在優(yōu)生方面有所進(jìn)步，在不育人群中，需要作第三種試管嬰兒的不育患者，相對是比較少的。

　　第四代試管嬰兒技術(shù)是指卵漿置換，該技術(shù)適用于那些排卵功能正常，但因?yàn)樯眢w不好或者年齡偏大，致使卵子的質(zhì)量不高，活力差的女性。具體方法是將妻子的卵細(xì)胞的細(xì)胞核取出，移植到一位年輕的、身體健康的女性卵子的細(xì)胞漿中，形成一個(gè)新的、優(yōu)質(zhì)的重組卵細(xì)胞。

　　【例題解析】
　　1、表現(xiàn)型不同的母牛生育出基因型完全相同的小牛，產(chǎn)生這一結(jié)果的最可能的技術(shù)是：
　　A 試管動(dòng)物培養(yǎng)　　　　　 B 胚胎移植　
　　C 胚胎分割移植 　　　　　D 受精卵移植

　　解析：胚胎分割是指利用早期胚胎克隆多個(gè)個(gè)體，比如，將一個(gè)八細(xì)胞的胚胎的細(xì)胞分離，每一個(gè)細(xì)胞都獨(dú)立發(fā)育為一個(gè)新的胚胎進(jìn)行移植，這樣獲得的個(gè)體遺傳物質(zhì)完全相同，答案為C。

　　2、下列關(guān)于細(xì)胞工程的敘述中，錯(cuò)誤的是：
　　A 植物細(xì)胞融合必須先制備原生質(zhì)體
　　B 試管嬰兒技術(shù)包括人工授精和胚胎移植兩方面
　　C 經(jīng)細(xì)胞核移植培育出的新個(gè)體只具有一個(gè)親本的遺傳性狀
　　D 用于培養(yǎng)的植物器官或組織叫做外植體

　　解析：細(xì)胞核移植獲得的新個(gè)體遺傳物質(zhì)主要來自供核的親本，但還需另加一個(gè)親本提供卵細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)中也含有一些遺傳物質(zhì)，由細(xì)胞質(zhì)基因控制的遺傳性狀可以通過細(xì)胞質(zhì)傳遞。答案為C。

　　3．用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是
　　A 將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞
　　B　用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞
　　C 用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合
　　D 篩選雜交瘤細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體

　　解析：答案為B。

　　4．關(guān)于單克隆抗體，下列敘述不正確的是
　　A 可以制成診斷盒．用于疾病的診斷　　
　　B 可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療
　　C 可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)　　　　　
　　D 可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn)

　　解析：單克隆抗體的生產(chǎn)可以利用體外培養(yǎng)的方法。答案為D。

　　5． 細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn),容易在體積較大的兩棲類動(dòng)物中獲得成功,科學(xué)家們用兩棲動(dòng)物卵所進(jìn)行的蛙的克隆過程如下:

　　⑴該過程發(fā)育而成的青蛙遺傳物質(zhì)主要來自于_____________，該過程屬于___________生殖（無性/有性）。
　?、七@個(gè)實(shí)驗(yàn)說明___________________。

　　解析：參考答案
　?、殴w青蛙腸上皮細(xì)胞核　　 無性
　　⑵動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性