【百家講堂第13期】瘦肉精與肉品質量安全及檢測

指動石 2012-08-09

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瘦肉精與肉品質量安全及檢測摘要：受雙匯“瘦肉精”事件的影響，大量含瘦肉精的肉品浮出水面，“食品安全”經歷兩會后再次成為焦點話題。本文僅對瘦肉精與肉品質量安全及檢測相關知識做一個簡單介紹。關鍵詞：瘦肉精；肉品；質量安全；檢測 Abstract: The subject Shuanghui "lean" events, a lot of meat containing Clenbuterol surfaced, "food security" experience once again become a hot topic after the two sessions. This article only lean meat quality and safety and testing and knowledge to make a brief introduction. Key words: lean;meat;quality and safety;testing wuyun 最后編輯于 2011-03-22 11:33:25 2 獎勵次數獲得獎勵： icetrob 獎勵了你 12財富值本帖被weidaiman設為精華，獲得 30財富值、5經驗值、2威望值本主題由管理員 weidaiman 于 2011/4/26 11:58:19 執(zhí)行主題置頂/取消操作
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1.引言
1.1背景
有這么一類藥物，從1987年開始，由國內多名動物營養(yǎng)專家不斷報道、引進、研究，并開始應用在畜牧業(yè)生產上。該類物質被添加到飼料中后，能夠改善養(yǎng)分的代謝途徑，促進動物肌肉，特別是骨骼肌蛋白質的合成，抑制脂肪合成的積累，從而加速動物生長速度，增加肌體瘦肉。不但可提高動物蛋白質含量約15%，減少脂肪含量約18%，而且還可以提高動物生長速度、飼料利用率、胴體瘦肉率10%以上。然而其毒副作用遠沒有引起重視。隨著中毒事件的不斷凸現和社會各界對食品安全問題重視程度的不斷提升，該類物質終于由倡導推廣的“香餑餑”，變成人人喊打“害人精”，這類物質就是最近“大名鼎鼎”的“瘦肉精”。
原先的“瘦肉精”特指克倫特羅(Clenbuterol)，商品名為氨哮素、克喘素，化學名稱為α-[（叔丁氨基）甲基]-4-氨基-3，5二氯苯甲醇鹽酸鹽，分子式為：C12H18Cl2N20·HCl，是一種β2-腎上腺素受體激動劑（簡稱β-興奮劑）。目前大家講所有能夠起到促進動物瘦肉生長的違禁添加藥物統(tǒng)稱為“瘦肉精”。因此不僅有克倫特羅，還有沙丁胺醇、溴布特羅、萊克多巴胺（Ractopamine）等。
-興奮劑類物質是自然產生的兒茶酚胺類藥物的人工合成衍生物。在畜牧業(yè)生產中常用于促進家畜的生產性能，特別是改進脂肪型動物的肉與脂肪的比例或加速動物生長。然而直到現在，這些化合物并沒有被批準作為合法的加速生長調節(jié)劑。除了水解脂肪及合成代謝的作用外，-興奮劑還有對非條紋肌肉組織的松弛作用，因此它們可以被用來作為平喘劑和宮縮抑制劑。-興奮劑非常有可能殘留在動物體內，不合法的使用會給消費者帶來危害。因此，禁止在食品生產中試用-興奮劑。

1.2毒副作用及治療
“瘦肉精”進入人體后，分布快、消除慢。此類藥主要蓄積于內臟、毛發(fā)、視網膜等組織中，長期食用會引起心血管和神經系統(tǒng)的疾病。其毒性反應劑量因人而異，一般食用15min-6h出現癥狀，癥狀可持續(xù)90min-6h，通常表現為面色潮紅、頭痛、胸悶、心悸、心慌、骨骼肌震顫、四肢麻木等一系列不良反應。對心律失常、高血壓、青光眼、糖尿病、甲狀腺機能亢進、前列腺肥大等疾病的患者有較大危害甚至危及生命。
中毒治療是以對癥治療為主，可采取催吐，補充維生素C、B1等和護肝、利尿等，對于心律失常的病人可采用心得安等抗心律失常藥。在心電圖監(jiān)測及電解質測定下，使用保護心臟藥物如6-二磷酸果糖(FDP)及β1-受體阻滯劑倍他樂克。

1.3中毒事件
資料表明，第一例“瘦肉精”中毒事件發(fā)生在西班牙，有43個家庭的成員在一次吃了牛肝后，發(fā)生了集體食物中毒，而這牛正是用添加了“瘦肉精”的飼料喂養(yǎng)的。在我國，最早披露的中毒事件發(fā)生在香港，1998年5月，17名香港居民因食用內陸供應的豬內臟中毒。同時，廣東省高明市人民醫(yī)院也在一周內接診了7例因喝豬肺湯而中毒的患者，其元兇也是鹽酸克倫特羅。2006年上海瘦肉精中毒事件，數百人到醫(yī)院接受治療。2009年廣州發(fā)生的瘦肉精中毒事件，受害者70多人。以及最近發(fā)生的雙匯“瘦肉精”事件。

1.4相關規(guī)定
基于食用動物內臟而導致的中毒事件的不斷發(fā)生，歐盟很快做出了反映：嚴禁在飼料中添加鹽酸克倫特羅類藥物。美國食品與藥品管理局（FDA）也將肉品中的鹽酸克倫特羅殘留作為必檢項目。FDA和世界衛(wèi)生組織（WHO）還制定了畜產品中鹽酸克倫特羅的最高殘留限量：肉、肝臟、腎臟、脂肪和奶中分別為0.2μg/㎏、0.6μg/㎏、0.6μg/㎏、0.2μg/㎏、0.05μg/㎏。至此，以高科技面目出現的“瘦肉精”最終被確認為地地道道的“害人精”。
我國食品藥品監(jiān)督管理局2001年下發(fā)了《關于嚴厲打擊非法生產經營和使用鹽酸克倫特羅等藥品違法行為的通知》，開展了大規(guī)模的禁用“瘦肉精”的行動。按照上級要求，我市將“瘦肉精”的監(jiān)測作為肉品安全的重要內容，每年對全市范圍內的規(guī)模養(yǎng)殖場、生豬屠宰場和超市進行隨機抽樣監(jiān)測，進一步治理了我市的肉食品市場，維護了人們的食肉安全。
我國明令禁止使用“瘦肉精”作為飼料添加劑，并且規(guī)定所有動物所有可食用組織中均不得檢出“瘦肉精”。

wuyun 最后編輯于 2011-03-22 11:36:51

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2.肉品質量安全
隨著“瘦肉精”事件的不斷出現，給人民群眾的飲食安全帶來了極大的威脅，甚至出現了談“精”色變的情況。世界各有關組織及大部分國家均明確了瘦肉精在肉品中的限量，以確保肉品的質量安全。

2.1聯合國糧食及農業(yè)組織（FAO）&世界衛(wèi)生組織（WHO）國際食品法典委員會（CAC）

2.2 中國

相關法規(guī)及標準：《農業(yè)部第235號公告》；GB 18406.3-2001《農產品安全質量無公害畜禽肉安全要求》

2.3 中國香港

相關法規(guī)：《公眾衞生(動物及禽鳥)(化學物殘余)規(guī)例》、《2001年食物內有害物質(修訂)規(guī)例》

2 .4 歐盟

相關法規(guī)：96/22/EC《關于禁止在畜牧業(yè)中使用某些具有激素或甲狀腺拮抗作用的物質及興奮劑并廢除指令81/602/EEC、88/146/EEC和88/299/EEC》

2.5 美國

相關法規(guī)：21 CFR 556《新型動物藥在食物中的殘余允許量》

2.6 日本

以上數據來《日本肯定列表》

wuyun 最后編輯于 2011-03-22 11:59:05

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2.7 加拿大

3.檢測手段及方法
衛(wèi)生檢驗及市場監(jiān)管部門主要檢測市場上肉品及內臟組織中的殘留情況。雖然肌肉、肝臟、肺臟、腎臟、眼球的殘留量多，殘留維持時間較長，但是這些樣品預處理過程復雜，難于操作。鹽酸克倫特羅在血漿中濃度較低，維持時間短，不是檢測鹽酸克倫特羅殘留的理想樣品。鹽酸克倫特羅在體內代謝后大量以原形從尿液中排出，而且尿液中鹽酸克倫特羅的濃度比血漿中高40倍，可實現宰前檢測，所以尿液是檢測鹽酸克倫特羅的較好的樣品。鹽酸克倫特羅能特異地與毛發(fā)、羽毛中的色素牢固結合，而且殘留量大、維持時間長、采集方便，也適合宰前檢測，因此有人認為毛發(fā)、羽毛是檢測鹽酸克倫特羅最好的樣品。
目前，“瘦肉精”的檢測技術主要有色譜檢測技術、免疫分析技術、金標免疫檢測技術(DIGFA)等。色譜檢測技術又分為高效液相色譜技術（HPLC）、高效液相色譜/熒光技術（HPLC/FLR）、液譜-質譜聯用（HPLC-MS）、氣譜-質譜聯用（GC-MS）等。免疫分析技術又分為酶聯免疫吸附（ELISA）法、放射免疫（RIA）法、膠體金免疫層析法等。

3.1樣品的選擇

在目前鹽酸克倫特羅的檢測體系中，樣品的選擇具有多樣性，內臟、肌肉、尿液、毛發(fā)都能作為樣品進行檢測，但都存在著殘留濃度的問題。克倫特羅的殘留量與性別無關。研究發(fā)現，添加于飼料中的1mg/kg鹽酸克倫特羅（7d），零休藥期，肝和肺中克倫特羅的殘留量最大，超過腎中殘留的2倍，大約是脂肪和肌肉的15倍。休藥3d后，肝中克倫特羅的總殘留量最大，肺、腎、脂肪組織中的殘留濃度幾乎相等，肌肉的總殘留量仍大約是肝中的1/15。休藥7d后，脂肪中的克倫特羅總殘留量大約是零休藥期25％，腎、肝、肺、肌肉中的克倫特羅總殘留量分別大約是零休藥期的4％、5％、2％及6％。

由于采樣方便，檢出率高，因此尿液作為檢測樣本最為普遍，但尿液中鹽酸克倫特羅的殘留時間及殘留量還少見報道。部分試驗結果表明：飼喂不同濃度的克倫特羅，其在豬尿液中的排出量在第3d達到一個高峰，第20d再次出現一個高峰，此過程呈波浪形，而且隨添加劑量的增大而升高。但停藥后，尿液中的鹽酸克倫特羅含量大量下降，飼喂5mg/kg的鹽酸克倫特羅試驗組，零休藥期的排出量為338.6×10－9，在第7d降到19.7×10－9，14d降到15.1×10－9。研究發(fā)現，在1t飼料中添加100g鹽酸克倫特羅，采取混飼給藥的方式飼喂60kg左右的生長肥育豬1周，鹽酸克倫特羅在豬尿中的殘留時間為1個月左右。停藥36d后，不能檢測出尿液中的鹽酸克倫特羅。因此，尿液作為檢測樣本也具有一定的局限性。

眼睛中克倫特羅的殘留量最大且持續(xù)時間最長。測定添加于飼料中的1mg/kg鹽酸克倫特羅（7d），休藥7d后，眼睛中鹽酸克倫特羅總殘留量仍保持在200μg/kg以上，表明眼睛是監(jiān)測克倫特羅的最佳靶組織。同時研究發(fā)現，以1mg/kg克倫特羅喂21d停藥，在視網膜和頭發(fā)絲的含量分別為1779ng/g和424ng/g。

有報道說，因瘦肉精在血液和尿液中可迅速被清除，故此檢驗的意義有限，用毛發(fā)作為活家畜的檢測標本較血液和尿液更可靠，但待進一步研究。

wuyun 最后編輯于 2011-03-22 12:03:24

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3.2主要檢測方法概述
3.2.1氣相色譜-質譜法（GC-MS） GC-MS法優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質譜高靈敏度的定性分析有機合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。Fente C. A等用GC-MS法檢測牛毛中CLB的殘留，最低檢測限為5ng/g；Pteer Batioens應用氣相色譜－串聯質譜法(GC-MS-MS)對牛、羊、豬組織中的CLB含量進行檢測，最低檢測限為2ng/g；劉琪等用GC-MS法（EI離子源）檢測豬尿中的CLB，檢測限為0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基嗎啉衍生物檢測尿提取物中的CLB，衍生物用電脈沖方式或化學離子化方式掃描，會產生更高的靈敏度。另外，GC-MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低。因此，我國將GC-MS法定為檢測CLB的確證性方法（NY/T468-2001）。

3.2.2高效液相色譜法（HPLC） HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強極性的β-激動劑及其代謝產物，而且，HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應和質譜(MS)等系統(tǒng)聯用，容易實現分析過程的自動化。黃士新等(1995)應用紫外檢測器，在λ=243nm，色譜柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱溫：室溫30℃的條件下檢測豬肝臟和豬肉中的CLB殘留，最低檢測限可達2ng/g。國外有人應用HPLC (二極管陣列檢測器)測定動物性食品中CLB殘留，測得最低檢測限為1.26ng/g，回收率達98.9%。目前，我國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1～15ng/g，其優(yōu)點是專屬性好、選擇性強、檢測精確度較高，而且假陽性率低；缺點是樣品處理時間長，檢測過程煩瑣、難于操作，需貴重儀器，在實際應用中受到一定的限制。

3.2.3酶聯免疫吸附法（ELISA）利用免疫學抗原抗體特異性結合和酶的高效催化作用，通過化學方法將植物辣根過氧化物酶（HRP）與克倫特羅（CL）結合，形成酶偶聯克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體（羊抗兔IgG抗體）與特異性的抗克倫特羅抗體結合，然后加入待測克倫特羅和酶偶聯克倫特羅，它們競爭性與克倫特羅抗體結合，洗滌后加底物，根據有色物的變化計量待測克倫特羅量。若待測克倫特羅多，則被結合的酶偶聯克倫特羅少，有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克倫特羅含量，比色的最佳波長為450 nm，參比波長應大于600 nm。

3.2.4膠體金免疫層析法（Colloidal gold immunochromatography）利用競爭法膠體金免疫層析技術，檢測液中的Clen與金標墊上的金標抗體結合形成復合物，若Clen在檢測液中濃度低于靈敏度值，未結合的金標抗體流到T區(qū)時，被固定在膜上的Clen-BSA偶聯物結合，逐漸凝集成一條可見的T線；若Clen濃度高于靈敏度值，金標抗體全部形成復合物，不會再與T線處Clen-BSA偶聯物結合形成可見T線。未固定的復合物流過T區(qū)被C（Quality Control 區(qū)域）區(qū)的二抗捕獲并形成可見的C線。C線出現則表明免疫層析發(fā)生，即試紙有效。
膠體金免疫層析檢測方法是最有效的控制瘦肉精的手段，基本上不受場地和人員的限制，隨時隨地可以進行篩選檢測，特別適宜屠宰場動物檢疫員進行現場檢測，其特點是成本低、速度快、門檻低，能現場檢測，能大批量檢測，缺點是無法定性定量、只能初篩，有一定的假陽性率，遇到可疑樣品仍需進一步確認。

3.3 相關標準/方法

a) GB/T 5009.192-2003動物性食品中克倫特羅殘留量的測定（沙丁胺醇參照此標準執(zhí)行）
b) 農業(yè)部1025號公告-6-2008動物性食品中萊克多巴胺殘留檢測 ELISA法
c) 農業(yè)部1025號公告-18-2008動物性食品中β-受體激動素殘留檢測 LC-MS法
d) 農牧發(fā)[2001]38號豬尿中克倫特羅檢測方法 ELISA法（沙丁胺醇參照此標準執(zhí)行）
e) 農業(yè)部1025號公告-11-2008動物性食品中β-受體激動素殘留檢測 LC-MS法
f) NY/T 468-2006動物組織中鹽酸克倫特羅的測定氣相色譜質譜法
g) SN/T 1116-2002進出口飼料中克倫特羅、沙丁胺醇殘留量的檢驗方法液相色譜法
h) SN/T 1924-2007進出口動物源性食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法液相色譜－質譜/質譜法
i) GB/T 22944-2008蜂蜜中克倫特羅殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法
j) DB32/T 1166-2007動物尿液中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、西馬特羅和萊克多巴胺及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質譜法
k) DB34/T 818-2008飼料中鹽酸克倫特羅的測定-膠體金免疫層析法
l) DB33/T 537-2005動物組織中萊克多巴胺的測定
m) DB33/T 539-2005飼料中萊克多巴胺的測定
n) DB34/T 820-2008飼料中萊克多巴胺的測定——氣相色譜質譜法
o) DB/T 819-2008飼料中萊克多巴胺的測定——酶聯免疫吸附法
p) GB/T 20189-2006飼料中萊克多巴胺的測定高效液相色譜法
q) GB/T 22147-2008飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測定液相色譜質譜聯用法

wuyun 最后編輯于 2011-03-22 12:12:06

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4. 致謝
感謝管理員wisdom提供的相關資料。

5. 參考資料/文獻
[1] 易展儀表展覽網http://www./
[2] 我的儀家http://bbs./
[3] 技術壁壘資源網http://www./
[4] 中國技術性貿易措施網http://www./
[5] 食品伙伴網http://www.foodmate.net/
[6] 互動百科http://www.hudong.com/
[7] 維基百科http://zh./zh/
[8] 百度百科http://baike.baidu.com/
[9] 歐洲議會和理事會.96/22/EC關于禁止在畜牧業(yè)中使用某些具有激素或甲狀腺拮抗作用的物質及興奮劑并廢除指令81/602/EEC、88/146/EEC和88/299/EEC.歐洲.1996.
[10] 歐洲議會和理事會.禁止在畜牧業(yè)中使用某些含有激素或甲狀腺抑制反應的物質以及長肉劑指令草案 {SEC(2007)733}.歐洲.2007.
[11] 歐洲議會和理事會. 2008/97/EC關于禁止在畜牧業(yè)中使用某些具有激素或甲狀腺拮抗作用的物質指令.歐洲.2008.
[12] 美國聯邦.21 CFR 556 Tolerances for residues of new animal drugs in food. 美國.2003.
[13] 香港特區(qū)政府律政司.公眾衛(wèi)生(動物及禽鳥)(化學物殘余)規(guī)例.香港.2003.
[14] 香港特區(qū)政府律政司.2001年食物內有害物質(修訂)規(guī)例.香港.2001.
[15] 葉雪珠等.我國與CAC、日本雞肉獸藥殘留限量標準比較分析［A］. 中國畜牧雜志，2009,45（16）：28-32.
[16] 馬兵等.各國藥物殘留限量標準比對分析及對中國水產品出口貿易的影響［A］. 中國農學通報，2010,26（17）:398-402.
[17] 馬愛進等.食品中獸藥殘留限量標準的差異［A］.肉類研究，2007，（10）:40-43.
[18] 王靜等.“瘦肉精”快速檢測技術在肉品安全中的應用［J］.山東畜牧獸醫(yī).2005.12ZK：38-40.