| 瑞氏（ Wright ' s stain ；美藍－伊紅Y）染色： 1 ．瑞氏染料是由堿性染料美藍（ Methvlem blue ）和酸性染料黃色伊紅（ Eostm Y ）合稱伊紅美藍 染料即瑞氏 （美藍－伊紅Y）染料。 伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是堿性的，美藍的中間產(chǎn)物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。 2 ．用 甲醇作瑞氏 染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用： （ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質(zhì)而著色。 甲 醇 ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E - 在配制的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多余 美藍就可以 使胞漿染成藍色，染色主要是化學(xué)作用，是離子彼此結(jié)合的反應(yīng)。 （ 2 ）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態(tài)及增加細胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)。 3. 瑞氏染液配制： (1) 瑞氏染液配制： 瑞氏染料 830gm 或 1g 甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml 先稱干燥（事先放入溫箱干燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內(nèi)， 用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲 即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入 一 清潔儲存瓶內(nèi)（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復(fù)數(shù)次，直至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存 3 個月以上為佳。 (2) 緩沖液： 1) 緩沖液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察 pH 值的改變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解。 緩沖液須保持 一定的 pH 使染色穩(wěn)定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏堿性染料可與緩沖液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使 pH 恒定。 2) 緩沖液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）： 配方 1 ： 配方 2 ： 1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml 1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml 置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染則應(yīng)報廢。 |
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