雞屎藤(Paederia scandens)活性物質(zhì)和鎮(zhèn)痛藥理活性研究

雞屎藤Paederia scandens(Lour．)Merri．是茜草科Rubiaceae雞屎藤屬Paederia的一種攀援性藤本植物，又名“雞矢藤”，廣泛分布于中國(guó)、日本、印度、菲律賓以及美國(guó)西海岸等國(guó)家。在東南亞一些國(guó)家，雞屎藤作為民間傳統(tǒng)草藥和食物已有數(shù)千年的悠久歷史。雞屎藤的葉子在越南曾一度作為各種食物的調(diào)味品。 近年來(lái)，曾有許多報(bào)道，從植物雞屎藤根、莖的甲醇提取物中陸續(xù)分離出雞屎藤苷，車(chē)葉草苷，雞屎藤苷酸，去乙酰車(chē)葉草苷，雞屎藤次苷等環(huán)烯醚萜苷類(lèi)和環(huán)烯醚萜苷二聚體類(lèi)化合物。這些化學(xué)成分具有多種生物活性：如抗病毒、抗腫瘤、抗炎和抗微生物等。在中國(guó)、日本、越南和其他的一些東南亞國(guó)家，植物雞屎藤的根、莖、藤皮、果實(shí)作為民間草藥使用已有數(shù)千年的歷史，尤其在治療牙痛、胸痛、痔瘡引發(fā)的疼痛，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脾臟炎癥、桿菌性痢疾等方面具有顯著的療效。雖然植物雞屎藤具有顯著的鎮(zhèn)痛療效而在民間廣為使用，但是目前關(guān)于該植物的鎮(zhèn)痛藥理活性物質(zhì)基礎(chǔ)以及鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的研究文獻(xiàn)尚未報(bào)道。 基于以上調(diào)研，我們對(duì)植物雞屎藤全株進(jìn)行了甲醇提取，并對(duì)其醇提物應(yīng)用石油醚、氯仿、正丁醇進(jìn)行了分步驟萃取；同時(shí)首次應(yīng)用鎮(zhèn)痛藥理方法學(xué)對(duì)其總提物以及各個(gè)萃取部位進(jìn)行了鎮(zhèn)痛藥理活性研究。 植物雞屎藤的甲醇提取物以口服的方式給受試小鼠給藥，應(yīng)用化學(xué)刺激和熱刺激引發(fā)疼痛的動(dòng)物模型對(duì)其鎮(zhèn)痛藥理活性進(jìn)行研究。結(jié)果表明，口服給藥劑量為600mg/kg和900 mg/kg植物雞屎藤甲醇提取物的受試小鼠在小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)、小鼠福爾馬林實(shí)驗(yàn)和小鼠熱水甩尾實(shí)驗(yàn)中對(duì)化學(xué)和熱刺激引發(fā)的疼痛具有顯著的耐受。另外，在小鼠福爾馬林實(shí)驗(yàn)中植物雞屎藤甲醇提取物表現(xiàn)出了中樞和外周雙重鎮(zhèn)痛機(jī)制。 應(yīng)用化學(xué)刺激和熱刺激引發(fā)小鼠疼痛的整體動(dòng)物模型對(duì)植物雞屎藤甲醇提取物正丁醇部位浸膏的鎮(zhèn)痛藥理活性進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：口服給藥劑量為150mg/kg，300 mg/kg和600 mg/kg植物雞屎藤甲醇提取物正丁醇部位浸膏的受試小鼠對(duì)腹腔注射醋酸溶液、足底皮下注射福爾馬林溶液和辣椒素溶液引發(fā)的疼痛以及在小鼠熱水甩尾實(shí)驗(yàn)和小鼠熱板實(shí)驗(yàn)中對(duì)熱刺激引發(fā)的疼痛均具有耐受性。其中劑量為600 mg/kg的正丁醇部位浸膏對(duì)化學(xué)和熱刺激引發(fā)的疼痛具有極其顯著的抑制作用。在小鼠戊巴比妥鈉延長(zhǎng)睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)和小鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)中，正丁醇部位浸膏未能延長(zhǎng)小鼠戊巴比妥鈉引發(fā)的睡眠時(shí)間和影響受試小鼠的自主活動(dòng)行為，這些結(jié)果表明正丁醇部位浸膏的鎮(zhèn)痛活性與催眠作用和破壞腦部運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的毒性作用無(wú)關(guān)，具有特異性。另外，在小鼠福爾馬林鎮(zhèn)痛藥理拮抗實(shí)驗(yàn)和小鼠辣椒素鎮(zhèn)痛藥理拮抗實(shí)驗(yàn)中，此鎮(zhèn)痛藥理活性對(duì)藥理拮抗工具藥納絡(luò)酮和格林本脲的拮抗作用不敏感，而完全被尼莫地平的拮抗作用拮抗；表明了正丁醇部位浸膏的鎮(zhèn)痛藥理活性與L-type Ca2+ channels有關(guān)。另外，從植物雞屎藤正丁醇部位分離出多個(gè)環(huán)烯醚萜苷類(lèi)和環(huán)烯醚萜苷二聚體類(lèi)化合物，正丁醇部位的鎮(zhèn)痛藥理活性可能與這些化合物的協(xié)同作用有關(guān)；至于，在這些化合物中某個(gè)化合物是否具有強(qiáng)烈的鎮(zhèn)痛藥理活性還需進(jìn)一步深入研究。 應(yīng)用化學(xué)刺激和熱刺激引發(fā)小鼠疼痛的整體動(dòng)物模型對(duì)植物雞屎藤甲醇提取物石油醚部位浸膏的鎮(zhèn)痛藥理活性進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：口服給藥劑量為20 mg/kg，40 mp/kg和80 mg/kg植物雞屎藤甲醇提取物石油醚部位浸膏的受試小鼠對(duì)腹腔注射醋酸溶液、足底皮下注射福爾馬林溶液和辣椒素溶液引發(fā)的疼痛以及在小鼠熱水甩尾實(shí)驗(yàn)和小鼠熱板實(shí)驗(yàn)中對(duì)熱刺激引發(fā)的疼痛均具有良好的耐受性。其中劑量為80mg/kg的石油醚部位浸膏對(duì)化學(xué)和熱刺激引發(fā)的疼痛具有極其顯著的抑制作用。在小鼠戊巴比妥鈉延長(zhǎng)睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)和小鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)中，石油醚部位浸膏未能延長(zhǎng)小鼠戊巴比妥鈉引發(fā)的睡眠時(shí)間和影響受試小鼠的自主活動(dòng)行為，這些結(jié)果表明石油醚部位浸膏的鎮(zhèn)痛活性與催眠作用和破壞腦部運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的毒性作用無(wú)關(guān)，具有特異性。另外，在小鼠福爾馬林鎮(zhèn)痛藥理拮抗實(shí)驗(yàn)和小鼠辣椒素鎮(zhèn)痛藥理拮抗實(shí)驗(yàn)中，此鎮(zhèn)痛藥理活性對(duì)藥理拮抗工具藥納絡(luò)酮的拮抗作用不敏感，而完全被格林本脲的拮抗作用拮抗；表明了石油醚部位浸膏的鎮(zhèn)痛藥理活性與K+-ATP channels有關(guān)。另外，通過(guò)應(yīng)用GC-MS技術(shù)對(duì)石油醚部位化學(xué)成分進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)其主要化合物為linoleic acid，thesterols和vitamin E。因此，我們推斷石油醚部位鎮(zhèn)痛藥理活性與這些化合物的協(xié)同作用有關(guān)。 對(duì)從植物雞屎藤醇提物正丁醇部位浸膏中分離出的環(huán)烯醚萜苷類(lèi)和環(huán)烯醚萜苷二聚體類(lèi)化合物，進(jìn)行了鎮(zhèn)痛藥理動(dòng)物模型篩選。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化合物雞屎藤苷酸甲酯具有潛在的鎮(zhèn)痛藥理活性。應(yīng)用化學(xué)刺激和熱刺激引發(fā)小鼠疼痛的整體動(dòng)物模型對(duì)該單體化合物的鎮(zhèn)痛藥理活性進(jìn)行了深入研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：腹腔注射給藥劑量為20 mg/kg，40 mg/kg和60 mg/kg雞屎藤苷酸甲酯的受試小鼠對(duì)腹腔注射醋酸溶液，足底皮下注射福爾馬林溶液和辣椒素溶液引發(fā)的疼痛以及在小鼠熱水甩尾實(shí)驗(yàn)和小鼠熱板實(shí)驗(yàn)中對(duì)熱刺激引發(fā)的疼痛均具有良好的耐受性。其中劑量為60 mg/kg的雞屎藤苷酸甲酯對(duì)化學(xué)和熱刺激引發(fā)的疼痛具有極其顯著的抑制作用。在小鼠戊巴比妥鈉延長(zhǎng)睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)和小鼠體內(nèi)溫度測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，該化合物未能延長(zhǎng)小鼠戊巴比妥鈉引發(fā)的睡眠時(shí)間和影響受試小鼠的體溫改變，這些結(jié)果表明雞屎藤苷酸甲酯的鎮(zhèn)痛活性與催眠作用和藥物毒性作用無(wú)關(guān)，具有特異性。另外，在小鼠熱板鎮(zhèn)痛藥理拮抗實(shí)驗(yàn)中，此鎮(zhèn)痛藥理活性對(duì)藥理拮抗工具藥納絡(luò)酮和尼莫地平的拮抗作用不敏感，而完全被亞甲基藍(lán)、L-NAME、格林本脲的拮抗作用拮抗；表明了雞屎藤苷酸甲酯的鎮(zhèn)痛藥理活性可能與NO-cGMP-K+-ATP channels途徑有關(guān)。