滋陰瀉火中藥合劑對青春期大鼠垂體生長激素和長骨干骺端胰島素樣生長因子1基因表達(dá)的調(diào)節(jié)

及金寶  李嬪  

【摘要】：目的:觀察滋陰瀉火中藥合劑對青春期大鼠垂體生長激素、長骨干骺端胰島素樣生長因子1基因表達(dá)的影響,探討中藥對垂體、長骨干骺端促生長機(jī)能的調(diào)節(jié)作用。方法:實驗于2002-09/2003-03在上海瑞金醫(yī)院完成。將青春期SD雌性大白鼠共22只分為對照組和實驗組,每組11只。對照組:喂飼生理鹽水1個月,5mL/次,1次/d;實驗組:喂飼滋陰瀉火中藥合劑(由生地12g,炙龜板12g,黃柏9g,知母9g等組成;均由上海復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院中藥制劑室煎制成濃縮合劑,每毫升約含生藥3g。)1個月,5mL/次,1次/d。療程結(jié)束后,動物處死,取出垂體及左后肢骨干骺端,提取總mRNA。采用實時熒光RT-PCR定量檢測技術(shù),檢測垂體生長激素mRNA,長骨干骺端胰島素樣生長因子1mRNA表達(dá)水平。實時熒光RT-PCR定量檢測方法:①垂體、長骨干骺端總RNA提取采用一步法。并逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)15g/L瓊脂糖電泳后,純化,制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,并擴(kuò)增。②垂體生長激素擴(kuò)增條件:先94℃2min,然后94℃變性10s,58℃退火30s,72℃延長20s,3個步驟作為1個循環(huán),共擴(kuò)增40個循環(huán)。長骨干骺端胰島素樣生長因子1擴(kuò)增條件:先94℃3min,然后94℃變性10s,60℃退火20s,72℃延長20s,3個步驟作為1個循環(huán),共擴(kuò)增40個循環(huán)。經(jīng)過t檢驗處理,比較兩組間垂體生長激素及長骨干骺端胰島素樣生長因子1基因表達(dá)水平的變化,觀察滋陰瀉火中藥合劑對上述指標(biāo)基因表達(dá)的影響。結(jié)果:實驗動物22只,生理鹽水和中藥灌胃時誤灌入氣管窒息而死,各1只,進(jìn)入結(jié)果分析20只。①實驗組生長激素cDNA的復(fù)制數(shù)明顯低于對照組犤(7.08±1.20)×107,(19.38±6.69)×107;t=5.728,P0.05犦,且擴(kuò)增片段為1條長度為533bp的條帶,未見其他非特異性條帶。②實驗組干骺端胰島素樣生長因子1cDNA復(fù)制數(shù)明顯低于對照組犤(2.28±0.65×102),(21.41±5.85×102);t=10.268,P0.05犦;電泳圖顯示干骺端胰島素樣生長因子1cDNA擴(kuò)增片段為一條長度為202bp的條帶,未見其他非特異性條帶。結(jié)論:滋陰瀉火中藥合劑可在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)腺垂體生長激素及長骨干骺端軟骨細(xì)胞胰島素樣生長因子1的基因表達(dá),從而調(diào)整生長激素-胰島素樣生長因子1軸的功能活動。

【作者單位】： 上海市嘉定區(qū)安亭醫(yī)院骨科 上海市交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院內(nèi)分泌科
【關(guān)鍵詞】： 中藥學(xué) 青春期 早熟/藥物療法 動物實驗替代試驗 中藥療法 促生長素/代謝 胰島素樣生長因子Ⅰ/藥理學(xué) 基因表達(dá)
【分類號】：R285.5
【正文快照】：