菌種生產(chǎn)中的注意事項(xiàng)及常見問題的解決方法

一、  一級(jí)種制作過程中的注意事項(xiàng)

（1）制作或盛裝培養(yǎng)基的器皿，不能使用鐵鍋或銅鍋，以免鐵銹或銅銹混入培養(yǎng)基中，使鐵或銅含量過高。一般使用搪瓷缸或鋁鍋。

（2）制成的培養(yǎng)基，在使用前應(yīng)做無菌檢查，方法是將其置于27°左右的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，證明無菌后方可使用。

（3）制備好的培養(yǎng)基，應(yīng)及時(shí)用完，不宜久存，以免降低其營養(yǎng)價(jià)值或成分上發(fā)生變化。

（4）制備過程中，一定要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，并標(biāo)好標(biāo)簽，注明菌種名稱。接種日期和轉(zhuǎn)管次數(shù)，尤其在同一時(shí)間幾種不同的菌種接種時(shí)，一定要嚴(yán)防混雜。

（5）一級(jí)種轉(zhuǎn)管的次數(shù)不能過多，一般以5-6次為好，不能超過10次，否則，由于移植時(shí)所造成的機(jī)械損失，以及培養(yǎng)條件的變化，會(huì)削弱菌絲活力，導(dǎo)致遺傳性狀變異，降低出菇率。因此，引進(jìn)或育成的菌種在第一次轉(zhuǎn)管時(shí)，可較多數(shù)量擴(kuò)轉(zhuǎn)，并以不同方法保藏，按計(jì)劃使用。

（6）切勿使用無標(biāo)記或判斷不準(zhǔn)的菌種，以免使用后造成損失。

（7）不要使用培養(yǎng)基已干縮或老化的一級(jí)種，以免影響菌種成活率或?qū)е律a(chǎn)性狀的退化。長期保藏的菌種，用前應(yīng)放在恒溫箱中活化培養(yǎng)，并逐步提高培養(yǎng)溫度，活化培養(yǎng)時(shí)間一般為1-3天。如在冰箱中保存時(shí)間超過3個(gè)月，最好轉(zhuǎn)管培養(yǎng)一次再用，以提高接種成功率和萌發(fā)速度。

（8）啟用保藏的一級(jí)種，應(yīng)認(rèn)真檢查是否有污染現(xiàn)象。如試管斜面上呈現(xiàn)明顯的黑色、綠色、黃色等菌落，則説明已遭受霉菌的污染；將試管迎亮光觀察，如果在氣生菌絲下面有黃褐色圓點(diǎn)或不規(guī)則斑塊，説明已遭細(xì)菌污染；被污染的菌種絕對不能用于擴(kuò)大生長。

（9）接種塊不萌發(fā)或不吃料的原因：菌種在0°甚至以下溫度保藏，菌絲已凍死或失去活力；菌齡過老，生活力衰弱；接種操作時(shí)，母種塊被接種鏟或酒精燈火焰燙死；母種塊沒有貼緊原種培養(yǎng)基；菌種萌發(fā)后缺乏營養(yǎng)死亡；接種塊太薄太小干燥而死；母種培養(yǎng)基過干，菌絲無法活化或原種培養(yǎng)料偏干，菌絲無法吃料生長；培養(yǎng)料配比不當(dāng)，或菌袋內(nèi)有氨氣或其它不良?xì)怏w，致使酸堿度不宜；菌袋接種前冷卻不徹底，或培養(yǎng)溫度過高等。

二、   二、三級(jí)菌種制作中的注意事項(xiàng)

（1）培養(yǎng)基含水量  食用菌菌絲體的生長發(fā)育與培養(yǎng)基含水量有關(guān)，只有含水量適宜，菌絲生長才旺盛健壯，通常要求培養(yǎng)基含水量在60%-65%之間，即手握緊培養(yǎng)料，以手指縫中有水外滲往下滴1-2滴為宜，沒有水滲為過干，有水滴連續(xù)淌下為過濕，過干或過濕均會(huì)對菌絲生長不利。

（2）培養(yǎng)基的PH值  一般食用菌正常生長發(fā)育需要一定范圍的PH值，木生菌要求偏酸性，即PH值為4-6，糞草菌要求中性或偏堿性，即PH值為7.0-7.2。由于我們滅菌時(shí)常使培養(yǎng)基的PH值下降0.2-0.4。因此，滅菌前的PH值應(yīng)比指定的略高一些。

（3）裝好袋的培養(yǎng)料應(yīng)及時(shí)滅菌  培養(yǎng)料裝完袋后應(yīng)立即上鍋滅菌，特別是在高溫季節(jié)，嚴(yán)禁把培養(yǎng)料放置過夜，以免由于微生物的作用而導(dǎo)致培養(yǎng)基酸敗，造成雜菌的滋生，危害菌絲生長。

（4）菌種長滿菌袋（瓶）后，應(yīng)及時(shí)使用  一般來説，二級(jí)菌種滿瓶后7-8天，最適合擴(kuò)轉(zhuǎn)三級(jí)種，三級(jí)種滿袋后7-15天最適宜播種。如果不及時(shí)使用，就很容易老化而影響菌絲的生長。

 三、菌種萌發(fā)不正常及發(fā)菌不良的原因與解決方法

（一）菌種萌發(fā)不正常  主要表現(xiàn)為兩種情況：一是不萌發(fā)或萌發(fā)緩慢；二是萌發(fā)出的菌絲纖細(xì)無力，擴(kuò)展緩慢。我們分析的思路應(yīng)為：培養(yǎng)溫度---培養(yǎng)基含水量---培養(yǎng)基原料質(zhì)量---滅菌規(guī)程及效果---母種。對于菌種不萌發(fā)，或萌發(fā)緩慢，或擴(kuò)展緩慢來説，這幾個(gè)方面的因素必有其一，甚至可能是多種因素在共同影響。

   1：培養(yǎng)溫度過高：   造成菌種不萌發(fā)、萌發(fā)遲緩、生長遲緩。

   2：含水量過低：  盡管拌料時(shí)加水量充足，但由于拌料不均勻，造成培養(yǎng)基含水量的差異，含水量過低的菌種常干枯而死，發(fā)生這種情況，及早補(bǔ)水尚可挽救。

   3：培養(yǎng)料原料霉變：  正處霉變期的原料中有大量的有害物質(zhì)，這些物質(zhì)耐熱性極強(qiáng)，在高溫下不易分解變性，甚至在高溫高壓下仍保持其毒性，接種后菌種不萌發(fā)。

  4：滅菌不徹底： 培養(yǎng)基內(nèi)留有大量細(xì)菌，而不是真菌。培養(yǎng)基中殘留和繼續(xù)繁殖增加的細(xì)菌，多數(shù)情況下無肉眼可見的菌落，有時(shí)在含水量過大的袋壁上，在培養(yǎng)基的顆粒間可見到灰白色的菌膜。這一原因可通過培養(yǎng)基的分離培養(yǎng)得到證實(shí)。

 5：菌種菌齡過長：菌種生產(chǎn)者應(yīng)使用菌齡適當(dāng)?shù)哪阜N，多種食用菌母種使用最佳菌齡都在長滿斜面后1-5天。在計(jì)劃周密的情況下，母種和原種生產(chǎn)的緊密銜接是完全可行的。如母種長滿斜面后一周內(nèi)不能使用，要及早置于4-6°下保存。

（二）發(fā)菌不良   發(fā)菌不良的表現(xiàn)多種多樣，常見的有生長緩慢；生長過快但菌絲纖細(xì)稀疏，生長不均勻，菌絲不飽滿，色澤灰暗等。造成發(fā)菌不良的原因主要有：

  1：培養(yǎng)基酸堿度不適  可將發(fā)菌不良的菌袋的培養(yǎng)基挖出，用PH試紙測試。

  2：原料中混有毒害物質(zhì)  如松、杉、柏、樟、桉等樹種的木屑，原料有過霉變，有霉菌毒素。

  3：滅菌不徹底  培養(yǎng)基中生長有肉眼看不見的細(xì)菌等。

  4： 裝料松緊不妥當(dāng)  裝料過緊，水分過少、透氣性過差。

  5：溫度和濕度過高  培養(yǎng)室溫度和濕度過高，空氣流通交換不夠。

  6：培養(yǎng)基含水量過大，裝得過緊 這種情況下，往往菌絲長至菌袋中下部后，菌絲生長開始變緩，甚至不再生長。

四、雜菌污染的原因及其綜合防治

   在正常情況下，原種、栽培種或栽培袋的污染率在10%以下，各個(gè)環(huán)節(jié)和操作規(guī)范者，其污染率只有1%-5%。如果超出這個(gè)范圍，則應(yīng)該認(rèn)真查找原因并施以控制措施。

（一）滅菌不徹底  這一原因?qū)е挛廴景l(fā)生的特點(diǎn)是污染率高，發(fā)生的早，污染出現(xiàn)的部位不規(guī)則，培養(yǎng)料的上中下各部均出現(xiàn)雜菌。這種污染常在培養(yǎng)3-5天后即可出現(xiàn)。影響滅菌效果的主要因素有：

1：培養(yǎng)料的原料性質(zhì)  不同材料導(dǎo)熱性不同，微生物基數(shù)不同，滅菌所需時(shí)間也不同。因此，滅菌時(shí)要根據(jù)培養(yǎng)料的不同來掌握滅菌的時(shí)間。

  從培養(yǎng)料原料的營養(yǎng)成分來講，糖、脂肪、和蛋白質(zhì)含量越高，傳熱性越差，對微生物有一定的保護(hù)作用，滅菌時(shí)間就相對要長一些。

  從培養(yǎng)料的自然微生物基數(shù)上看，微生物基數(shù)越高，滅菌需要的時(shí)間越長。

2：培養(yǎng)料的含水量和均勻度  水的傳熱導(dǎo)性能較木屑、糞草、谷粒等的固體培養(yǎng)基要強(qiáng)得多，如果培養(yǎng)料配制時(shí)預(yù)濕均勻，吸透水分，含水量適宜，滅菌過程中達(dá)到滅菌溫度需時(shí)短，滅菌就容易徹底。

3：容器  菌種玻璃瓶較塑料袋熱傳導(dǎo)要慢一些，在使用相同的培養(yǎng)料、相同的滅菌方法時(shí)瓶裝菌種要比袋裝菌種滅菌時(shí)間長一些。

4：滅菌方法 相比較而言，高壓滅菌可用于各種培養(yǎng)料的滅菌，而常壓滅菌對于滅菌難度較大的糞草種和谷粒種或麥粒種要達(dá)到完全滅菌效果就很不容易。目前國外的專業(yè)菌種廠已采用超高溫瞬時(shí)滅菌技術(shù)。高壓滅菌的關(guān)鍵是要排放干凈冷空氣。而常壓滅菌時(shí)如鍋小、鍋口小、水少、蒸汽不足、火力不足、常是常壓滅菌不徹底的主要原因。

5：滅菌容量和堆放方式  以蒸汽鍋爐送入蒸汽的高壓滅菌鍋，要注意鍋爐汽化量與鍋體容積相匹配，自帶蒸汽發(fā)生器的高壓滅菌鍋，以每次容量200-500瓶（每瓶750毫升）為宜。這樣，可使培養(yǎng)料升溫快而均勻，培養(yǎng)料中自帶微生物繁殖時(shí)間短，滅菌效果更好。滅菌時(shí)應(yīng)隨容量的增大而延長滅菌時(shí)間。

  滅菌鍋內(nèi)菌袋的堆放方式對滅菌效果影響顯著，如袋料菌種，受熱后會(huì)變軟，如裝料不緊，疊壓堆放，極易把升溫前留有的間隙充滿，不利于水蒸氣的流通和升溫，就會(huì)影響滅菌效果。袋料菌種擺放時(shí)，應(yīng)以疊放3-4層為度，不可無限疊壓，鍋大時(shí)要使用鐵筐。

（二）封蓋不嚴(yán)  主要出現(xiàn)在用罐頭瓶做容器的菌種中，在用塑料袋作容器的折角處也時(shí)有發(fā)生，聚丙烯菌袋經(jīng)過高溫滅菌后比較脆，在搬運(yùn)過程中遇到摩擦，緊貼袋口處或折角處極易磨破，形成肉眼不易看見的沙眼。

（三）接種物帶有雜菌  如果接種物本身就已被污染，再擴(kuò)大到新的培養(yǎng)料上必然會(huì)出現(xiàn)成批的污染。這種污染的特點(diǎn)是雜菌從菌種塊上長出，污染的雜菌種類比較一致，且出現(xiàn)早，接種后3-5天就可以用肉眼鑒別。

（四）菌種廠設(shè)備設(shè)施過于簡陋引起滅菌后無菌狀態(tài)的改變

本來經(jīng)過滅菌后的菌袋已經(jīng)達(dá)到了無菌狀態(tài)，但由于滅菌后的冷卻和接種環(huán)境達(dá)不到潔凈無菌，特別是那些簡易菌種廠和在家里自制菌種的菇農(nóng)，其生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)節(jié)分散，又往往忽略場地的環(huán)境衛(wèi)生，忽視冷卻場地的潔凈度，使本已無菌的菌袋在冷卻過程中被污染。在冷卻過程中，隨著溫度的降低，袋內(nèi)氣壓降低，冷卻室如果灰塵過多，雜菌孢子基數(shù)過大，雜菌孢子就很自然的落到了菌袋的表面，而且隨內(nèi)外氣壓的動(dòng)態(tài)平衡向袋內(nèi)移動(dòng)，當(dāng)棉塞受潮后就更容易先在棉塞上定植，或等待接種操作時(shí)隨手的碰觸而落進(jìn)袋內(nèi)。當(dāng)菌袋外附有較多的灰塵和雜菌孢子時(shí)，就會(huì)成為接種操作的污染源。

（五）接種操作的污染  其發(fā)生特點(diǎn)是分散出現(xiàn)在接種口處，比菌種帶菌和滅菌不徹底造成的污染發(fā)生稍晚，一般接種后7天左右出現(xiàn)癥狀。接種操作的污染源主要是接種室空氣和菌袋冷卻中附在表面的雜菌，有的接種操作人員自身潔凈度不良，也是很重要的污染源，違反接種無菌操作規(guī)程等都是接種操作的污染原因。要避免或減少接種操作的污染需注意以下環(huán)節(jié)：

   1：不讓棉塞打濕  滅菌擺放時(shí)，切勿讓袋口棉塞貼近鍋壁。當(dāng)棉塞向上擺放時(shí)，要用牛皮紙包扎。菌袋滅菌結(jié)束時(shí)，要自然冷卻，不可強(qiáng)制冷卻。當(dāng)冷卻至一定程度后在掀開鍋蓋，讓國內(nèi)的余熱把棉塞的水汽蒸發(fā)。

  2：潔凈冷卻  規(guī)范化的菌種廠，其冷卻室是高度無菌的，空氣中不可能有可見的塵土，滅菌后的菌袋不能直接放在有塵土的地面上冷卻。冷卻室使用前可用煙霧消毒劑或金星消毒液進(jìn)行空間消毒。

  3：接種室和接種箱使用前必須嚴(yán)格消毒   接種室墻壁要光滑、地面要潔凈、封閉要嚴(yán)密。

  4：接種過程要嚴(yán)格按照無菌操作要求進(jìn)行操作  盡量少走動(dòng)，少搬動(dòng)，不説話、盡量小動(dòng)作、快動(dòng)作，以減少空氣震動(dòng)和流動(dòng)，減少污染。

 5：在火焰上方接種  實(shí)際上，無菌室內(nèi)相對無菌的空間只在酒精燈火焰周圍很小的范圍內(nèi)。因此，接種操作，包括開蓋、取種、接種。蓋蓋，都應(yīng)在這個(gè)絕對無菌的小區(qū)內(nèi)完成，不可偏離。接種人員要密切配合。

 6：拔出棉塞要緩勁  拔棉塞時(shí)，不可用力直線上拔，而應(yīng)旋轉(zhuǎn)式緩勁拔出，以免造成袋內(nèi)負(fù)壓，外界空氣突然進(jìn)入而帶入雜菌。

 7：濕塞換干塞   滅菌前，可將一些備用棉塞用塑料袋包好，放入滅菌鍋同菌袋一同滅菌，當(dāng)接種時(shí)發(fā)現(xiàn)菌袋棉塞被蒸汽打濕時(shí)，要換上這些新棉塞。

 8：接種前要做好一切準(zhǔn)備工作  力爭一次接種不間斷，一氣呵成。

    【注：本文摘自袁世平先生編撰的大型工具書《食用菌病蟲害識(shí)別與防治大全》】