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兔巴氏桿菌病的診斷及防控措施
1 1 2 王文杰 段巨剛 石 剛 1 1 2
（1.河北東光縣農(nóng)業(yè)局 ，河北滄州 061600； 2. 河北東光縣職業(yè)技術(shù)教育中心，河北滄州 061600）
摘要：兔巴氏桿菌病是由多殺性巴氏桿菌引起的各種兔病的總稱。臨床癥狀表現(xiàn)以全身敗
血病、傳染性鼻炎、流行性肺炎而多見，是嚴重危害養(yǎng)兔業(yè)重要的傳染病之一。 本文從該 病的病原、流行病學特點、癥狀與病變、診斷與防控方面進行闡述，旨在為兔場科學防治巴 氏桿菌病提供參考。
關(guān)鍵詞：兔巴氏桿菌?。辉\斷；防控措施
兔巴氏桿菌病（Pasteurellosis）又名出血性敗血癥，是由多殺性巴氏桿菌引起的一種 多型性、散發(fā)性或地方流行性、細菌性傳染病
【1,2】
。由于病菌的毒力、感染途徑以及病程長
短不同，其臨床癥狀和病理變化也不同。主要有全身敗血病、傳染性鼻炎、 、地方流行性肺 炎、結(jié)膜炎、中耳炎、生殖器官感染和膿腫。
【3,4】
家兔對多殺性巴氏桿菌十分敏感，發(fā)病率
【5】
高達 60%以上， 若不及時采取有效措施， 易引起大量發(fā)病和死亡，
郭永剛
【6】
等、 李佳麗
【7】
等對兔巴氏桿菌的診斷進行了報道， 一致認為本病是嚴重危害養(yǎng)兔業(yè)的重要傳染病之一； 隨 著養(yǎng)兔生產(chǎn)高度集約化，本病發(fā)生呈上升趨勢，另外由該病引發(fā)兔只死亡、生長緩慢、飼料 報酬降低及藥物防治費用增加等， 給養(yǎng)兔業(yè)造成了嚴重經(jīng)濟損失， 應引起廣大養(yǎng)殖戶及有關(guān) 部門的足夠重視。
1 病原
兔巴氏桿菌病的病原為多殺性巴氏桿菌，呈革蘭氏陰性 、兩端鈍圓、細小、卵圓形的 短桿狀菌 ，大小為（1-1.5）×（0.25-0.5）μm。單個存在，有時成雙排列。用瑞氏染色 或亞甲藍染色呈典型兩級染色。無鞭毛，不形成芽孢，新分離的強度菌株有莢膜，但經(jīng)培養(yǎng) 后莢膜迅速消失。本菌為需氧或兼性厭氧菌。 該病菌存在于病兔的血液、內(nèi)臟器官、病變局部和一些外表健康的家兔的上呼吸道粘 膜及扁桃體內(nèi)。 該病菌對外界環(huán)境因素的抵抗力不強，在眼光下暴曬 10min，或 56℃加熱 15min ，或 60℃加熱 10min 可被殺死。在干燥空氣中 2-3d 死亡，在廄舍及糞便中能存活一個月左右， 在尸體內(nèi)能存活三個月。一般常用的消毒藥都能將其殺滅。1%福爾馬林、1%石碳酸、1%漂白 粉、01%升汞等溶液，經(jīng) 3-5min 即能殺死。對青霉素、鏈毒素、四環(huán)素、土霉素、磺胺類及 許多新的抗菌藥物敏感。
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該菌在鮮血和血清培養(yǎng)基上生長良好，但在普通培養(yǎng)基上不能生長，由于巴氏桿菌毒 力強弱不同，呈三種菌落形態(tài)。從敗血型死亡的兔子新分離的毒力強大的菌株，在血清瓊脂 表面上培養(yǎng) 24h 后長出菌落，在折射光下有熒光、圓整、半透明、 細小。 在肉湯內(nèi)一致渾濁， 稱光滑型（S 型） 。從慢性病例或帶菌者所分離的菌株，中心多半為不透明的粘性大菌落， 無熒光。在肉湯內(nèi)一致渾濁，稱粘液型（M 型） 。從帶菌者分離的菌株，常出現(xiàn)粗糙而干燥 的菌落。在肉湯內(nèi)產(chǎn)生顆粒狀沉淀物，稱粗糙型（R 型） 。
【8】
2 診斷
根據(jù)流行病學、臨床癥狀與病變特點，可作出初步診斷，進一步確診需進行實驗室檢 查。敗血型和肺炎型可從心血、脾、肝或體腔慘出物等取病料做細菌學檢查，其他病例主要 從病變部位、膿汁、滲出物和呼吸道、陰道分泌物中檢查病原。對慢性病例和健康帶菌的家 兔可采取血清學方法進行診斷 2.1 涂片鏡檢 無菌取病兔心血肝脾等有病變組織作涂片，自然干燥，火焰固定，分別瑞氏及革蘭氏 染色、鏡檢?？梢姷絾蝹€或多個短桿菌散在排列。瑞氏染色細菌呈藍色的短小桿菌，兩極著 色，周邊有淡紅色的莢膜；革蘭氏染色呈兩極著色的陰性短桿菌。 2.2 細菌分離培養(yǎng) ①無菌取病兔心血和肝脾，接種于鮮血瓊脂平板和麥康凱平板上，37℃培養(yǎng) 24h，結(jié)果 麥康凱平板上無任何菌落，而鮮血瓊脂平板上則可見許多淡灰色、圓形濕潤、露珠樣的小菌 落，菌落周圍不溶血。 取典型菌落做革蘭氏染色，鏡檢，可見該菌為革蘭氏陰性，兩極濃染， 兩端鈍圓，有莢膜的短桿菌。然后，挑取鏡檢后的菌落進行純培養(yǎng)，制得分離菌株 ②將分離菌株接種到普通瓊脂上生長出菌落形態(tài)為灰白色、 針尖大小的菌落或不生長。 ③將分離菌株劃線接種于血清瓊脂平板和麥康凱平板，37℃培養(yǎng) 24h，可長成淡灰色， 表面光滑閃光、邊緣整齊、露珠樣小菌落，直徑約 2-3mm，有臭味，將該血清平板放于顯微 鏡下，于 45 折光觀察，可見菌落呈藍綠色帶金光，邊緣有窄的紅黃光帶，為 Fg 型菌落。 ④將分離培養(yǎng)菌株接種于肉湯，37℃培養(yǎng) 24h，培養(yǎng)物呈輕度混濁，于管底部生成黏稠 沉淀，表面灰白色形成菌環(huán)。 ⑤將分離菌株接種到三糖鐵培養(yǎng)基上 37℃恒溫培養(yǎng) 24h，其底部變黃。 2.3 生化試驗 將所分離的菌株分別接種于各種生化培養(yǎng)基，做鑒定培養(yǎng)，結(jié)果；該菌株能分解葡萄 糖、蔗糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇，不發(fā)酵乳糖、木糖、鼠李糖、山梨醇、枸櫞三鈉； 靛基質(zhì)反應、硝酸鹽還原反應、吲哚試驗、接觸酶試驗、血漿凝固酶試驗、氧化酶實驗、產(chǎn) ：MR、VP 酸、產(chǎn)生 H2S 和氨均為陽性（也有試驗不產(chǎn)氣，可能是由于菌株間的差異造成的）
。 【9】
。
2
試驗均為陰性；尿素酶試驗為陰性；不液化明膠，石蕊牛乳無變化，三糖鐵可生長，底部變 黃
[11]
。
2.4 動物回歸試驗 2.4.1 小鼠感染試驗 取新分離菌株純培養(yǎng)，制成細菌純培養(yǎng)液（獲取病兔的肝組織，用生理鹽水做成 1:10 的混懸液） ，接種小鼠 5 只，每只腹腔注射細菌純培養(yǎng)液（或混懸液）0.2ml，24-48h 全部 死亡。解剖該死亡小鼠，臨床癥狀、病理變化均與自然發(fā)病兔相同。去心血、肝組織進行接 種培養(yǎng)，可見典型菌落，經(jīng)染色，鏡檢，可見革蘭氏陰性兩極濃染的小桿菌。 2.4.2 家兔回歸試驗 取新分離菌株純培養(yǎng)，制成細菌純培養(yǎng)液（或取病兔的肝組織，用生理鹽水作成 1:10 的混懸液） ，接種家兔 2 只，每只皮下注射細菌純培養(yǎng)液（或混懸液）0.2 ml，24-48h 全部 死亡。解剖該死亡兔，臨床癥狀、病例變化均與自然發(fā)病兔相同。取心血、肝組織進行接種 培養(yǎng)，可見典型菌落，經(jīng)染色，鏡檢，可見革蘭氏陰性兩級濃染的小桿菌 2.5 藥敏試驗 選用 14 種抗菌藥敏紙片，按照美國 NCCLS 藥敏試驗紙片擴散法規(guī)，檢測分離菌對這些 抗菌藥物的敏感性。結(jié)果分離菌株高敏的藥物為：乙酰螺旋霉素、氨芐青霉素、鏈霉素、復 方新諾明、慶大霉素、氟苯尼考；對分離菌株中敏的藥物是：丁胺卡那、紅霉素，對分離菌 株不敏感的藥物是：四環(huán)素、強力霉素、羥芐青霉素、痢特靈、多粘菌素及丙氟哌酸。 2.6 血清學試驗 試管法：將待檢兔的血清做成不同稀釋度，加入等量診斷抗原。凝集價在 1：40 以上 者均為陽性反應。 玻片法：取被檢血清 0.1 ml 加于玻片上，隨后加入等量抗原，于 15-20℃溫度下進行 搖動玻片使抗原與被檢血清均勻混合。陽性反應在 1-3min 內(nèi)，出現(xiàn)絮狀物，液體透明
[13] [12]
。
。
３防控措施
3.1 預防 3.1.1 建立無多殺性巴氏桿菌種兔群是防治本病的最好辦法。這種兔群是通過選擇無鼻炎臨 床癥狀，并經(jīng)常對鼻腔連續(xù)進行細菌學檢查，多次的血清抗體檢測，選留無多殺性巴氏桿菌 的種兔建立起來的。有條件的兔場用剖腹取胎，或自然分娩后，立即將仔兔隔離進行人工喂 養(yǎng)的方法，建立無特定病原體兔群則更為理想。 3.1.2 堅持自繁自養(yǎng)原則， 不從疫區(qū)引種或購買商品兔， 引種兔時要嚴格檢疫并隔離觀察 30 天，無鼻炎臨床癥狀，進行細菌學和血清學檢查，確定無病后方可并群。 3.1.3 加強飼養(yǎng)管理，增強機體的抗病能力。家兔是草食動物，應以青粗飼料為主，精料為
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輔，飼料要注意營養(yǎng)成分合理，符合飼養(yǎng)要求。由于飼料的季節(jié)性不同，在改變飼料時要逐 步過渡，約 1 周左右可全部更換。飼喂時要定時定量，使家兔養(yǎng)成定時采食和排泄的習慣， 同時根據(jù)家兔的年齡、體重、個體差異，季節(jié)特點及兔體對飼料的需要，制定每兔每天的采 食量，不可忽多忽少。飼料和飲水必須清潔衛(wèi)生。 3.1.4 消除一切應激因素 在飼養(yǎng)過程中采取積極防范措施，創(chuàng)好良好的飼養(yǎng)條件，把應激因素減少到最小程度。 兔舍應與其他畜禽場分開，嚴禁混養(yǎng)，控制飼養(yǎng)密度，保持安靜，清潔舒適，通風良好，冬 天要保溫防寒，夏天要降溫防暑，雨季要防潮。 3.1.5 搞好清潔衛(wèi)生和定期消毒，減少疫病感染機會 兔舍和兔籠內(nèi)外要經(jīng)常打掃消毒，保持兔舍的干燥、清潔衛(wèi)生，同時定期進行消毒，食 槽、水槽及其飼養(yǎng)用具可選用百毒殺劑進行消毒。經(jīng)常檢查兔群，發(fā)現(xiàn)病兔立即隔離封鎖， 嚴格淘汰病兔，兔舍及周圍環(huán)境可用 10%-20%石灰乳、2%-3%燒堿水、0.3%過氧乙酸、1%漂 白粉等進行消毒，器械用具可用 2%-3%燒堿水或 0.3%來蘇兒消毒，兔籠最好用火焰消毒，也 可用 2%石灰乳、3%的來蘇兒、2%-3%燒堿水消毒。對病死兔及其污染物作無害化處理。病兔 使用高敏藥物治療，對健康兔中的易感兔群緊急注射巴氏桿菌疫苗。 3.1.6 藥物預防 每 50Kg 飼料中加 8-10g 乙醇，均混合于飼料中飼喂，可獲得較好的預防效果。 3.1.7 預防注射 30 日齡以上的家兔首免兔巴氏桿菌滅火苗，皮下注射 1 ml，間隔 14 天后在皮下注射 1.5ml ，免疫期 3—6 個月，種兔每年注射 3 次。也可使用兔瘟巴氏桿菌病二聯(lián)苗注射，20 日齡以上的家兔，每兔皮下注射 1 ml，7d 產(chǎn)生免疫力，間隔 20d 后再皮下注射 1.5m1,免疫 期 3—6 個月。常年每間隔四個月注射一次.發(fā)生疫情時緊急預防注射，每只 2m1。 3.1.8 嚴禁其他動物出入兔場，定期滅鼠滅蠅，杜絕或減少傳染來源，切斷一切傳播途徑。 3.2 治療 阿莫西林鈉（青霉素、氨芐青霉素的換代產(chǎn)品）肌注，10-15mg/kg,一次/d,連用 3d; 或用鏈霉素肌注,0.5-1IU/Kg,2 次/d,連用 5d;或用鏈霉素每只兔 5—10 萬 IU、青霉素 2—5 萬 IU,混合一次肌注，2 次/d，連用 3-4d;或用慶大霉素每兔 2—4 萬 IU 一次肌注，2 次/d, 連用 3d,或用核能 2000 （主要成分為長效土霉素） 肌注 0.5m1/Kg,連用 2-3d;或用氟苯尼考 注射液肌注， 0.2—04 ml/Kg， 次/d,連用 2d;或用氟哌酸注射液肌注 0.5—1 ml 次， 次/d, 1 2 連用 5d;或用紅霉素肌注，8mg/Kg,2 次/d,或口服喹乙醇，25-50mg/Kg,2 次/d,連用 2-3d; 或用氟氧沙星肌注 0.2—0.3ml/Kg，2 次/d,連用 5d；或用磺胺嘧啶肌注 0.05—0.2g/kg，2 次/d,同時配合口服土霉素，25-40mg/Kg，混在飼料喂給，1 次/d,連用 5d,或用磺胺甲基嘧 啶，內(nèi)服量 0.1mg/Kg,1 次/d,肌注量 0.007g/Kg,2 次/d,連用 4d;也可在飼料中拌入 0.2%諾 氟沙星，連用 3-5d。在使用抗生素治療的同時，可用 5%葡萄糖 10-20ml 加維生素 C1ml 靜
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脈注射。使用磺胺類藥物時應加等量碳酸氫鈉，預防不良反應的發(fā)生。 對慢性呼吸道癥狀的病兔，用青霉素、鏈霉素滴鼻，每毫升各 2 萬 1U，每 2 次/d,連用 5d；也可用慶大霉素、氯霉素滴鼻。眼結(jié)膜炎可用鏈霉素眼藥水滴眼，1 次 3-5 滴，兩次/d； 對局部巴氏桿菌感染病兔施行外科療法，切開成熟的膿腫排膿，用 0.1%新潔爾滅或 3%雙氧 水沖洗，再涂以紅霉素軟膏或撒布消炎粉，或沖洗后以 0.1%利凡諾滅菌紗布引流。 急性病例，皮下注射抗出敗多價血清，每千克體重約 6ml，8-10h 后再重復注射一次， 有顯著療效，但此法成本較高，只適合高價種兔。 另可選用三黃湯或雙花劑中藥治療 三黃湯處方： 黃連、 黃芪各 10g 黃柏 20g,加水 500ml 煎成 20ml， 每次每只喂 10-20ml ,2 次/d,連用 3d. 雙花劑處方：金銀花 9g,野菊花 6g,加水 200ml 煎成 100ml，每次每只喂 10-20ml， 2 次/d,連用 3d。 對于神經(jīng)癥狀的病兔，除用上述藥物外在肌注維生素 B12 和維生素 B1 各一支，一次/d, 連用 3d。
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