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益生菌(probiotics)通過改善宿主微生態(tài)平衡而發(fā)揮益生作用，達(dá)到提高宿主健康水平和健康狀態(tài)的活菌制劑及其代謝產(chǎn)物。存在于動物和人體內(nèi)的有益微生物主要有乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌等，其中，丁酸梭菌作為益生菌的一種，對于減少當(dāng)前飼料中抗生素產(chǎn)品的濫用、減少藥物在肉品中的殘留、降低動物細(xì)菌的耐藥性和保障動物健康有著重要的意義。因丁酸梭菌具有耐熱、耐酸及耐受多種抗生素等的特點，是一種較理想的具有廣泛開發(fā)前景的益生菌制劑。 丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是一種厭氧的革蘭氏陽性芽孢菌，呈直桿狀或稍有彎曲，廣泛存在于人和動物體的腸道中，能有效抑制腸道致病菌的繁殖，調(diào)整腸道微生態(tài)平衡，同時減少氨類、胺類等有害物質(zhì)的產(chǎn)生。丁酸梭菌制劑中活菌是以芽孢形式存在，對各種惡劣環(huán)境、存貯及加工運輸過程中的高溫、高濕、酸性、機(jī)械摩擦和擠壓等因素具有很強的穩(wěn)定性。因此添加在畜禽飼料中能夠抵抗飼料加工過程中的高溫、高熱及其胃腸道酸性環(huán)境，具有很強的市場競爭力。
 目前對丁酸梭菌的作用機(jī)制、培養(yǎng)條件和在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用研究的已非常廣泛，但幾乎都采用液體培養(yǎng)的方法。與液態(tài)培養(yǎng)相比，固態(tài)培養(yǎng)具有成本低、操作簡便等優(yōu)點。同時液態(tài)培養(yǎng)時生長量總是不能滿足生產(chǎn)需要，且畜禽腸道菌所生存的環(huán)境本身為固態(tài)或半固態(tài)環(huán)境，因此本試驗選用價格較為低廉的農(nóng)副產(chǎn)品豆粕、麩皮等為原料，對丁酸梭菌進(jìn)行固態(tài)培養(yǎng)研究。 1 材料與方法 1.1 菌種與培養(yǎng)基 菌種：丁酸梭菌(Clostridium butyricum)為山東寶來利來生物菌種保藏中心保存。 丁酸梭菌液體種子培養(yǎng)基：各物質(zhì)按質(zhì)量分?jǐn)?shù)計為葡萄糖2%、牛肉膏1.5%、蛋白胨2%、碳酸鈣1%、七水硫酸鎂0.02%、一水硫酸錳0.02%。調(diào)整pH為7.0，37 ℃靜止培養(yǎng)24小時，芽孢率95%以上。固體培養(yǎng)基加瓊脂粉1.5%。 固態(tài)基質(zhì)豆粕、麩皮，料水比為1:1.2，各生長限制因素按試驗設(shè)計溶解在水里添加到固體培養(yǎng)中，提前調(diào)整水的pH為7.0。
 1.2 方法 1.2.1 丁酸梭菌的固體發(fā)酵培養(yǎng) 從丁酸梭菌斜面中挑取一環(huán)接種于種子培養(yǎng)液中，靜置培養(yǎng)24小時后鏡檢芽孢率95% 以上，接種到含固體培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度37 ℃。按體積分?jǐn)?shù)5%接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)。以上操作均在無菌操作條件下進(jìn)行。 1.2.2 活菌數(shù)測定 固體發(fā)酵培養(yǎng)基中活菌數(shù)測定：取發(fā)酵好的固體培養(yǎng)基5 g，加入裝有100 mL含玻璃珠的無菌水的三角瓶中，280 r/min振蕩30 min搖勻，取1 ml梯度稀釋，倒平板，丁酸梭菌固體種子培養(yǎng)基進(jìn)行計數(shù)(以每克樣品中的菌落數(shù)進(jìn)行計數(shù)CFU/g表示)。 1.2.3 試驗設(shè)計 首先選用豆粕、麩皮和玉米面3種固態(tài)基質(zhì)作為培養(yǎng)基，葡萄糖和氯化鈣均以0.5%和0.2%添加，121 ℃，30分鐘滅菌，5%接種量接種，37 ℃恒溫培養(yǎng)72小時，取樣鏡檢，芽孢率75%以上，分別取5 g濕料進(jìn)行活菌計數(shù)。然后根據(jù)試驗結(jié)果再設(shè)計正交試驗，評價各個組方的活菌數(shù)多少，確定各組分的最適添加量。我們分別進(jìn)行了5次重復(fù)試驗，結(jié)果基本一致。 |
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