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質(zhì)粒加的太多了。少加一點就可以了。 AMP是否失效了 Amp失效，或者涂太多了，或者說培養(yǎng)過度了 Originally posted by qingfengwuat 2009-12-3 17:27: 不是質(zhì)粒，轉(zhuǎn)的連接產(chǎn)物質(zhì)粒加的太多了。少加一點就可以了。 平板的問題，氨芐失效了?；蚴歉惺軕B(tài)細胞本身帶有質(zhì)粒。連接產(chǎn)物一般不會長那么多。可以挑個菌搖一下試試。 1、抗生素失效 2、轉(zhuǎn)化效率較高，菌液涂布的較多 3、感受態(tài)細胞有問題，染了雜菌或者其他的問題 平板太潮，涂板前放培養(yǎng)箱里烘1-2個小時 這種小問題也拿出來問？做實驗沒有主動性，怎么做研究？ 氨芐失效會這樣，我也遇到過，用新配的就好了。 轉(zhuǎn)化過得，就不是質(zhì)粒了么？笑話，作為載體，只是引入了你的外援片段而已，質(zhì)粒的屬性沒變 可能原因：1，抗生素失效，倒置選擇壓降低 2，涂平板的技術問題，不是菌液越多越好 希望對你有所幫助。另：你用的是PMD18-T的載體吧，這個常用，基本不存在問題 :) 抗生素失效的可能性大些， 樓主菌液就算涂多，能涂多多少，太多了他根本涂不干，菌液還四處流呢，怎么倒置，除非樓主根本就不管這些，管他菌液涂的樣，就無所謂的倒置培養(yǎng)，以至于菌液四流。 轉(zhuǎn)化效率高到重組菌整板生長的情況，呵呵呵，應該很低吧，要真是那樣，樓主該去偷著樂了 多半是氨芐失效了。 只有8樓回答對了。我再補充一點，涂板時，涂均了就行，不要一直涂到完全吸收為止，雖然還有液體在培養(yǎng)基的表面，正面放置一個小時后再倒置培養(yǎng)。 涂布棒一直攪動會將其表面的那層膜劃破，致使出現(xiàn)一片白，而看不到單菌落。 氨芐青霉素失效或者是感受態(tài)被污染。后者更有可能！ 轉(zhuǎn)化完成這后，離心濃縮之后少棄上清，涂布的時候去100微升或者更少，要不就干脆不離心濃縮，直接涂布。 這個問題我們也經(jīng)常遇到，很疑惑，尤其是電轉(zhuǎn)的時候。
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