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實驗萬事屋作品 我叫郭芙，是莫愁師姐的師妹，總之這件事情還挺棘手的。事情是這樣的，我投了一篇文章基因敲減方面的文章，做了NC 和siRNA的CCK8增殖實驗，評審回來說增加一個add-back rescue實驗。呃……天啊，啥是add-back rescue實驗??？是不是要過表達這個基因啊？師姐救命！ 實驗萬事屋作品 是夜…… 實驗萬事屋作品 莫愁：好感人啊，楚楚救了步驚云…… 實驗萬事屋作品
小郭：師姐，現(xiàn)在要靠你救我的命了，你怎么還看這種十幾二十年前的電影啊，會暴露年齡的好么。說正經(jīng)的，師姐Rescue Experiment（回復(fù)實驗）怎么做?。eview要我補這個實驗！ 實驗萬事屋作品 莫愁：??？補回復(fù)實驗啊？呃……給你舉個例子吧…… 實驗萬事屋作品 步驚云找雄霸搏命，最后被雄霸打斷手臂掉進河里。然后被楚楚救了起來，楚楚她爹又把自己的麒麟臂移植給了步驚云?？吹竭@里真的是讓人唏噓不已啊。好了，說正經(jīng)的，這其實就是一個Rescue Experiment。 實驗萬事屋作品 實驗萬事屋作品 所謂的Rescue Experiment，就是在敲減實驗驗證了表型（被打斷手臂）之后，再通過過表達（移植上麒麟臂），回補表型（事實證明移植完麒麟臂之后，步驚云的表型確實回復(fù)了）的一種實驗。 實驗萬事屋作品 實驗萬事屋作品 但大家又不禁要問，老娘做的是慢病毒感染的穩(wěn)轉(zhuǎn)株，再進行過表達的話，會不會也被轉(zhuǎn)進去的siRNA給敲減掉呢？這個問題就好像是在說，步驚云要是只移植上一條手臂那么單純，那到時候還不是被雄霸見一次打一次？ 實驗萬事屋作品 實驗萬事屋作品 好了，其實真正的Rescue Experiment，是要對你過表達的這個目的基因的序列進行突變的。也就是利用所謂的Off-target effects（脫靶效應(yīng)）來處理過表達的序列。siRNA僅僅是目的基因的十幾個堿基起到作用，也就是可以互補結(jié)合上去，所以只要Rescue Experiment中過表達的這個目的基因，在靶點位置，做一定的突變，就可以使siRNA對其脫靶了。就好像步驚云移植上去的不是他自己的那條斷臂，而是楚楚老爹帶了紋身的麒麟臂一樣。 實驗萬事屋作品 實驗萬事屋作品 問題又來了，既然過表達的基因要突變，那表達出來的蛋白還是原來的基因的么？這個問題很簡單，因為基因的密碼子是有簡并性的，也就是說三聯(lián)體密碼的第二和第三個堿基是可以調(diào)換的，同樣表達相同的蛋白。這樣就不會影響到原有的敲減實驗了。好了，明白了么！ 實驗萬事屋作品 實驗萬事屋作品 小郭：師姐，我懂了！楚楚的老爹好可憐啊……賠了女兒又斷臂…… 實驗萬事屋作品 莫愁：……這不是重點…… 實驗萬事屋作品 …華麗麗的分割線… 實驗萬事屋作品 李莫愁博士：紋了身就不認識你了么，確實對于siRNA來說，紋了身的mRNA就基本上不認識他了。 實驗萬事屋作品 實驗萬事屋作品 |
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