1、細胞轉(zhuǎn)染有脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，病毒轉(zhuǎn)染、電轉(zhuǎn)染、磷酸鈣法、顯微注射….下面主要講最常用的脂質(zhì)體lip2000介導的細胞轉(zhuǎn)染。

2、轉(zhuǎn)染效率影響因素：1、細胞種類，細胞狀態(tài)，2、質(zhì)粒大小， 3、轉(zhuǎn)染試劑。

3、轉(zhuǎn)染前細胞的狀態(tài)和密度都非常影響轉(zhuǎn)染效率和后期的實驗結(jié)果。轉(zhuǎn)染時細胞的密度為50%-80%較好，同時注意在轉(zhuǎn)染后收細胞時的密度不要過爆。比如轉(zhuǎn)染質(zhì)粒到細胞內(nèi)，48小時后做WB，那么此時細胞的密度最好不要長滿. 因為細胞長的過爆嚴重影響細胞的狀態(tài)（周期進程阻滯，凋亡增加等）從而影響實驗結(jié)果。一般為前一天下午鋪板，第二天上午進行轉(zhuǎn)染，48小時候收細胞進行功能檢測。

4、不同的質(zhì)粒和脂質(zhì)體最佳搭配比例不同，轉(zhuǎn)染前，應該摸一個最佳配比。質(zhì)粒：脂質(zhì)體=1：1， 1：1.5， 1：2， 1：2.5， 1：3， 1：3.5的梯度比例來檢測最佳轉(zhuǎn)染比例（一般質(zhì)粒有帶熒光，可以通過觀察每組熒光強弱來判斷轉(zhuǎn)染效率，沒有熒光的只能通過qPCR來檢測各組轉(zhuǎn)染效率）。

5、質(zhì)粒的純度影響轉(zhuǎn)染效率：1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進行。2、含有內(nèi)毒素的質(zhì)粒對細胞有很大的毒性作用。建議使用QIAGEN公司的超純質(zhì)粒抽提試劑盒。

6、轉(zhuǎn)染時，小心輕柔的將lip2000加到培養(yǎng)基中并輕輕混勻（說明書上的用詞為：Mix gently），避免粗暴用力吹打，會導致脂質(zhì)體失效。

7、轉(zhuǎn)染時各種培養(yǎng)皿添加的質(zhì)粒和脂質(zhì)體參考量見下表：

8、雖然現(xiàn)在的大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑可以使用帶血清的培養(yǎng)基進行轉(zhuǎn)染，但轉(zhuǎn)染時建議用無血無抗生素的opti-MEM培養(yǎng)基提高轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后6小時更換培養(yǎng)基，一是lip2000具有一定毒性，二是培養(yǎng)基需要更換成有血清培養(yǎng)基。

9、支原體污染會嚴重影響細胞轉(zhuǎn)染的效率，且支原體污染不會像細菌污染那么明顯可見，轉(zhuǎn)染前可以用環(huán)丙沙星殺一殺支原體。

10、轉(zhuǎn)染后效率的檢測：1、觀察轉(zhuǎn)染后細胞熒光情況。2、qPCR驗證。3、WB檢測敲減或者過表達蛋白。

11、轉(zhuǎn)染后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率不高，可以通過兩種方法：1、復轉(zhuǎn)染，即轉(zhuǎn)染后12-24小時再次進行轉(zhuǎn)染，前提是該細胞對脂質(zhì)體的耐受性較好，轉(zhuǎn)染后細胞死亡數(shù)較少。2、通過藥篩來殺死未轉(zhuǎn)入成功的細胞。前提是該質(zhì)粒帶有抗生素抗性的基因。

12、附加為常用的幾種轉(zhuǎn)染試劑說明書，點擊帖子最下方的閱讀原文。