代志峰  河南大學(xué)淮河醫(yī)院檢驗(yàn)科

在生化室日常工作中，審核結(jié)果的時(shí)候你是否心中有底，能保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。眾所周知，一切生化檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的前提是室間質(zhì)控和室內(nèi)質(zhì)控在控。但是，在實(shí)驗(yàn)室都在控的情況下，結(jié)果就一定是準(zhǔn)確無(wú)誤的嗎？

誠(chéng)然，對(duì)于目前市面上常見生化儀，如常見的日立、東芝、羅氏等，在質(zhì)控在控的情況下，都已經(jīng)可以保證檢測(cè)結(jié)果極高的準(zhǔn)確度和精密度。但是在特定的情況下，結(jié)果或許不是我們想當(dāng)然的那樣。

筆者最近遇到一個(gè)有趣的結(jié)果，機(jī)器報(bào)告CK=—67。結(jié)果顯然是有問(wèn)題的，酶活性不存在負(fù)值的情況。筆者隨即查看項(xiàng)目反映曲線，本應(yīng)是筆直的斜線變成了平平的直線，且達(dá)到設(shè)定吸光度（Abs=40000）上限。按照筆者經(jīng)驗(yàn)，定是標(biāo)本中CK濃度過(guò)高導(dǎo)致的底物耗盡，果斷對(duì)標(biāo)本10倍稀釋，稀釋后檢測(cè)結(jié)果CK=1550，查看反應(yīng)曲線，在測(cè)光區(qū)為一平滑曲線，符合酶促反應(yīng)曲線，乘以稀釋倍數(shù)后該標(biāo)本結(jié)果CK=15500，然后審核并報(bào)告臨床危急值。

筆者想到，是否有同仁不知道為何會(huì)出現(xiàn)負(fù)值，并且假如機(jī)器報(bào)告結(jié)果為正值，會(huì)不會(huì)有同仁直接審核結(jié)果而導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)報(bào)。針對(duì)此種情況，筆者對(duì)此例檢查結(jié)果進(jìn)行分析，并分享避免此種情況發(fā)生的處理經(jīng)驗(yàn)。

在此之前，我們必須復(fù)習(xí)一下生化的常用檢測(cè)方法。一種為我們最常見的檢測(cè)酶的“酶學(xué)方法”，另一種為非酶檢測(cè)的“終點(diǎn)法”，包括一點(diǎn)終點(diǎn)法和兩點(diǎn)終點(diǎn)法。在此我們只討論酶活性濃度測(cè)定方法。其按檢測(cè)方法分為比色法、濁度法、分光光度計(jì)法、熒光分光光度計(jì)法、量積法、電位滴定法和生物傳感器法，其中以分光光度計(jì)法最常用；按照反應(yīng)時(shí)間分為定時(shí)法、連續(xù)監(jiān)測(cè)法和平衡法，最常用的為連續(xù)檢測(cè)法^[1]。

目前臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定酶活性濃度廣泛采用“分光光度計(jì)連續(xù)監(jiān)測(cè)法”。其中又以“酶耦聯(lián)法”應(yīng)用最普遍。臨床常規(guī)酶學(xué)分析所用的酶耦聯(lián)法中，多以脫氫酶為指示酶，通過(guò)監(jiān)測(cè)其反應(yīng)物NDDH或NADPH于340nm處吸光度的變化速率來(lái)檢測(cè)樣本中酶的量^[1]。

筆者單位生化儀器為日立7180全自動(dòng)生化儀，所用試劑購(gòu)自上海高宗科技有限公司，對(duì)酶檢測(cè)采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法進(jìn)行。舉例說(shuō)明，對(duì)肌酸激酶（CK）檢測(cè)為在28到34點(diǎn)處連續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)中吸光度的變化率，以此計(jì)算樣本中被測(cè)酶濃度，如圖1。當(dāng)待測(cè)酶濃度過(guò)高時(shí)，迅速耗盡試劑盒中底物，到達(dá)機(jī)器連續(xù)檢測(cè)區(qū)時(shí)，酶促反應(yīng)到達(dá)平臺(tái)期，吸光度無(wú)變化，但是實(shí)際檢測(cè)中可能出現(xiàn)上下浮動(dòng)，因此可以出現(xiàn)負(fù)值或者低值。

圖1

圖2

對(duì)每種項(xiàng)目的試劑盒，廠商都會(huì)給出相應(yīng)的線性范圍，比如CK的線性范圍為0-1500U/L。在此，筆者特意咨詢?cè)噭S商，對(duì)于給定的線性范圍是保守估計(jì)。一般情況下，超出給定線性范圍2—3倍都是可以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，筆者也特意對(duì)超出線性范圍的標(biāo)本進(jìn)行稀釋檢測(cè)，確實(shí)與未稀釋標(biāo)本結(jié)果符合，因此，線性范圍只是參考，對(duì)于超出線性范圍的標(biāo)本不一定需要稀釋重測(cè)，而需要查看反應(yīng)曲線，只要是線性曲線，即可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

但是以上提及的連續(xù)監(jiān)測(cè)法都是在保證底物充足的情況下進(jìn)行的。當(dāng)標(biāo)本檢測(cè)酶濃度過(guò)高時(shí)，試劑盒中底物被迅速耗盡，在達(dá)到測(cè)光點(diǎn)之前即達(dá)平臺(tái)期，此時(shí)測(cè)光點(diǎn)開始連續(xù)監(jiān)測(cè)，吸光度前后無(wú)變化或變化極小，結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)極低值甚至負(fù)值。

圖3

圖4

在此，筆者反思，在臨床實(shí)驗(yàn)室工作中，怎樣保證報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性。首先必須保證實(shí)驗(yàn)室室間和室內(nèi)質(zhì)控在控。對(duì)于待測(cè)濃度超出線性范圍的情況，①大型的全自動(dòng)生化儀都會(huì)有報(bào)警提示，對(duì)于報(bào)警的結(jié)果，查看反應(yīng)曲線來(lái)進(jìn)行相應(yīng)處理②對(duì)于超出線性范圍的檢測(cè)結(jié)果查看其反應(yīng)曲線③對(duì)于基層醫(yī)院的小型生化儀，可以利用組合項(xiàng)目的優(yōu)勢(shì)，比如筆者遇到的情況，心肌酶譜全線升高，某一項(xiàng)目偏低，此時(shí)可以查看反應(yīng)曲線，確定是真低值還是假性低值。

當(dāng)然，這都是要建立在掌握酶促反應(yīng)原理及檢測(cè)方法的前提下，只有深入了解生化儀的檢測(cè)過(guò)程，才能在實(shí)際工作中去偽存真，為臨床醫(yī)生報(bào)告準(zhǔn)確可靠的值，為病人治療提供一份力量。

參考文獻(xiàn)

[1]府偉靈. 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)[M]. 人民衛(wèi)生出版社, 2012.

說(shuō)明：本文為中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)微信公眾平臺(tái)全網(wǎng)首發(fā)，轉(zhuǎn)載時(shí)請(qǐng)注明來(lái)源及原創(chuàng)作者姓名和單位。