前 言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國司法部歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：向平、卓先義、沈保華、劉偉、卜俊、馬棟、嚴(yán)慧。

尿液中Δ9-四氫大麻酸的測定

1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了尿液中Δ9-四氫大麻酸的測定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于尿液中Δ9-四氫大麻酸的測定。
本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限為50ng/mL。

2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（ GB/T 6682-2008， ISO 3696： 1987， MOD）
GA/T 122 毒物分析名詞術(shù)語

第一篇 免疫篩選法

3 原理
該法采用高度特異性的抗原-抗體反應(yīng)的免疫膠體金層析技術(shù)，通過單克隆抗體競爭結(jié)合Δ9-四氫大麻酸偶聯(lián)物和尿液中可能含有的Δ9-四氫大麻酸的原理，試劑盒含有被事先固定于膜上測試區(qū)（ T）的Δ9-四氫大麻酸偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗Δ9-四氫大麻酸單克隆抗體。

4 試劑
Δ9-四氫大麻酸尿液膠體金法試劑盒（ THC-COOH）。

5 操作方法
用吸管吸取尿液尿液，滴入試劑盒的樣品孔中 5 滴（約 150～200μL），３～５min 后觀察結(jié)果。

6 結(jié)果判定
6.1 陽性
僅質(zhì)控區(qū) C 出現(xiàn)紫紅色帶，而測試區(qū) T 無紫紅色帶，表明尿液中Δ9-四氫大麻酸濃度在50ng/mL 以上。
6.2 陰性
質(zhì)控區(qū) C 及測試區(qū) T 均出現(xiàn)紫紅色帶，表明尿液中Δ9-四氫大麻酸濃度在 50ng/mL 以下。
6.3 無效
質(zhì)控區(qū) C 未出現(xiàn)紫紅色帶，結(jié)果無效，應(yīng)重新檢驗(yàn)。

第二篇 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

7 原理

本法利用Δ9-四氫大麻酸在體內(nèi)形成葡萄糖醛酸結(jié)合物的特點(diǎn)，在堿性條件下尿液水解，然后在酸性條件下用有機(jī)溶劑提出，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)的多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行定性分析。

8 試劑和材料
除方法另有規(guī)定外，試劑均為分析純，試驗(yàn)室用水符合 GB/T6682 規(guī)定的一級水。
8.1 Δ9-四氫大麻酸對照液
Δ9-四氫大麻酸對照溶液濃度為 50μg/mL。試驗(yàn)中所用其它濃度的對照溶液均從上述對照溶液稀釋而得，儲存在 4℃ 冰箱中，保存期為 6 個月。
8.2 40%氫氧化鈉溶液。
8.3 1mol/L 鹽酸溶液。
8.4 冰醋酸。
8.5 正己烷。
8.6 乙酸乙酯。
8.7 甲酸
優(yōu)級純。
8.8 乙腈
色譜純。
8.9 乙酸胺
色譜純。
8.10 流動相緩沖液
20mmol/L 乙酸銨和 0.1%甲酸緩沖液：分別稱取 1.54g 乙酸銨和 1.84g 甲酸置于 1000mL容量瓶中，加水定容至刻度， pH 值約為 4。

9 儀器
9.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀
配有電噴霧離子源（ ESI）。
9.2 旋渦混合器。
9.3 離心機(jī)。
9.4 恒溫水浴鍋。
9.5 移液器。
9.6 具塞離心試管。

10 測定步驟
10.1 樣品預(yù)處理
尿液 2mL 加入 40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH>13，80°C 水浴中水解 30min，冷卻后加入 1mol/L鹽酸溶液至 pH4-5，再加入 0.5mL 冰醋酸和 3mL 正己烷:乙酸乙酯(9:1)，混旋，離心，取上清液，60°C 水浴中揮干，加入 100μL 乙腈:流動相緩沖液(90:10)溶解，取 5μL 進(jìn)樣 LC-MS/MS。
10.2 測定
10.2.1 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件
a) 液相柱： Ultra IBD 柱(50mm×2.1mm×5μm)或相當(dāng)者，前接 C18 保護(hù)柱；
b) 柱溫：室溫；
c) 流動相： V(乙腈): V(20mmol 乙酸胺和 0.1%甲酸緩沖液)=90: 10；
d) 流速： 200μL/min；
e) 進(jìn)樣量： 5μL；
f) 離子源：電噴霧電離-負(fù)離子模式(ESI-)；
g) 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；
h) 定性離子對、定量離子對、去簇電壓(DP)、碰撞能量(CE)和保留時間（tR）見表 1。

10.2.2定性測定

進(jìn)行樣品測定時，如果檢出的色譜峰保留時間與空白檢材添加對照品的色譜峰保留時間比較，相對誤差小于 2%，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，均出現(xiàn)所選擇的離子對，而且所選擇的離子對相對豐度比與添加對照品的離子對相對豐度比之相對誤差不超過表 2 規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在這種化合物。

10.3 空白試驗(yàn)
除以相同基質(zhì)空白替代檢材外，均按上述步驟進(jìn)行。

附 錄 A

（資料性附錄）

Δ9-四氫大麻酸的二級質(zhì)譜圖