豬病毒感染十分常見，豬病毒性感染的檢查不僅用于臨床確定診斷，也可用于流行病學(xué)調(diào)查，為豬病毒性疾病的預(yù)防和治療提供科學(xué)依據(jù)。但由于豬病毒分離培養(yǎng)所要求的條件較高，傳統(tǒng)的血清學(xué)檢測既費(fèi)時又費(fèi)事，遠(yuǎn)不能滿足臨床需要。近年來，由于許多新技術(shù)在豬病毒學(xué)中的應(yīng)用，建立了快速診斷方法，為豬病毒感染的診斷提供了方便。

（一）標(biāo)本的采集

標(biāo)本的正確采集與迅速送檢是病毒感染診斷成功的關(guān)鍵。

1．標(biāo)本的采集  依據(jù)臨床癥狀、病期及檢測的目的為采取不同的標(biāo)本。標(biāo)本采集的原則和要求：

(1) 早期采集：病程初期或急性期采取標(biāo)本，標(biāo)本中含病毒量多，易于檢出，故病毒分離標(biāo)本最好在發(fā)病的1-2天內(nèi)采取。

(2) 由感染部位采集：呼吸道感染采取鼻咽部分泌物（如采取鼻咽洗漱液）及痰液，腸道感染采取糞便，皮膚感染采取局部滲出液，腦內(nèi)感染采取腦脊液；此外，還可采取血液、尿液、唾液、宮頸及陰道分泌物、脫落細(xì)胞和活體組織等。

(3) 嚴(yán)格尤菌操作：采集標(biāo)本時應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，避免雜菌污染標(biāo)本。

(4) 血清學(xué)診斷標(biāo)本的采集：應(yīng)在發(fā)病初期和病后2-3周內(nèi)各取——份血清，雙份血清同時進(jìn)行檢測，如抗體滴度升高4倍以上才有診斷意義。

2．標(biāo)本的處理  采取的標(biāo)本應(yīng)置人無菌器皿立即送檢。對本身帶有雜菌的標(biāo)本，如糞便、咽漱液和痰液等應(yīng)進(jìn)行抗生素除菌處理，多用高濃度的青霉素、鏈霉素和慶大霉素等。對組織細(xì)胞標(biāo)本，有時要將其研磨及用胰酶消化。對不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)置人含抗生素的50%甘油緩沖鹽水中，低溫。下保存送檢。若暫時不能檢查或分離培養(yǎng)時，應(yīng)將標(biāo)本存放在-70℃低溫冰箱或液氮罐內(nèi)保存。

為了提高病毒及其成分的檢出率，可對標(biāo)本進(jìn)行離心沉淀，即先用低速離心去沉渣，取上清液再行高速離心沉淀，這樣可將病毒濃縮集中，提高檢出率。

（二）病毒體的檢測

1．鏡檢  在光鏡或電鏡下，尤其是在電鏡下，不僅能直接觀察及檢測病毒的形態(tài)與結(jié)構(gòu)，也能鑒定病毒。如采用免疫標(biāo)記法，可提高鏡下檢出率。此外，觀察細(xì)胞內(nèi)有無包涵體的出現(xiàn)，也是檢測病毒感染的指標(biāo)之一。電鏡下觀察病毒常用磷鎢酸進(jìn)行負(fù)染色。鏡檢是快速檢測病毒的方法之一。

2．分離培養(yǎng)與鑒定  由于病毒只能在活細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，所以應(yīng)根據(jù)病毒的不同，選擇敏感動物、雞胚或離體組織與細(xì)胞，分別進(jìn)行動物接種、雞胚接種、組織培養(yǎng)或細(xì)胞培養(yǎng)來分離培養(yǎng)病毒。目前，實(shí)驗(yàn)室最常用的是細(xì)胞培養(yǎng)，常用的細(xì)胞有原代細(xì)胞、二倍體腎細(xì)胞、傳代細(xì)胞細(xì)胞等。病毒在細(xì)胞中增殖的指標(biāo)有：①細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)。多數(shù)病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖，可引起細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，稱為細(xì)胞病變效應(yīng)。常見的病變?yōu)榧?xì)胞變圓、壞死、溶解和脫落，有的細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)包涵體，如狂犬病毒。②紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象。流感病毒和副流感病毒感染的細(xì)胞膜上出現(xiàn)病毒基因編碼的抗原，可以與紅細(xì)胞結(jié)合。若向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入紅細(xì)胞，可見紅細(xì)胞吸附于細(xì)胞膜上，這種現(xiàn)象稱為紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象。

新分離的病毒，根據(jù)臨床癥狀和病毒的特性（包括易感宿主動物范圍、細(xì)胞病變特征與紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象等），即可初步鑒定病毒的科屬。進(jìn)一步分型需用特異性抗體進(jìn)行血清學(xué)鑒定。

（三）病毒抗原與相應(yīng)抗體的檢測

由于免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，不僅可以檢測病毒的各種抗原，而且還可檢測病毒抗原相應(yīng)的特異性抗體。免疫熒光、免疫酶、放射免疫、蛋白印跡技術(shù)、中和試驗(yàn)、紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)、紅細(xì)胞凝集抑制、間接血凝試驗(yàn)等技術(shù)和方法，均可用來檢測毒的各種抗原以及相應(yīng)的抗體，作為病毒性感染的診斷、輔助診斷或病情與病程分析的指標(biāo)。尤其是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，因其具有簡便、快速、靈敏和特異性高等特點(diǎn)，已廣泛用于多種病毒抗原及相應(yīng)抗體的檢測。

（四）病毒核酸的檢測

1. 病毒核酸雜交技術(shù)  利用雙鏈DNA可解離和重組合的性質(zhì)，將一條已知的單鏈DNA標(biāo)記上同位素作為探針，與待檢標(biāo)本中的病毒核酸（與探針DNA同源或部分同源）進(jìn)行核酸分子雜交，這種方法稱為病毒核酸雜交技術(shù)，，此法可測病毒的DNA，也可測病毒的RNA。目前，常用的核酸交技術(shù)有斑點(diǎn)雜交法、Southerm吸印法和Northerm吸印法等。病毒核酸雜交技術(shù)的主要用途是：①檢測血或組織細(xì)胞中的病毒核酸；②觀察血清或組織細(xì)胞中病毒核酸的分子質(zhì)量大??；③用于細(xì)胞內(nèi)基的定位及細(xì)胞內(nèi)核酸的定性與定量等+，核酸雜交技術(shù)比電鏡、免疫電鏡、免疫酶標(biāo)等方法更為特異、敏感和快速。

2．多聚酶鏈反應(yīng)  多聚酶鏈反應(yīng)( polyneragechain reaction，PCR)是一種體外基因擴(kuò)增方法。先將目的DNA變性為單鏈模板，加兩個人丁合成的已變性的單鏈DNA模板互補(bǔ)的引物。在DNA聚合催化(72℃)下，將單核苷酸從引物3，端開始摻人，沿模板5，—）3，方向延伸，合成DNA新股。標(biāo)本中只需有少量基因組DNA，經(jīng)放大后（可放大上萬倍）即能檢測出病毒序列。

此種方法比核酸雜交法敏感、快速，目前已應(yīng)用到AIDS，甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎等病毒感染的診斷中，取得了較好的效果。