圖1： 理想情況下PCR產(chǎn)物與循環(huán)數(shù)關(guān)系

圖2 理論情況下PCR產(chǎn)物量與循環(huán)數(shù)關(guān)系。

圖3 實際情況下PCR產(chǎn)物數(shù)與循環(huán)數(shù)的關(guān)系

剛開始的時候酶，緩沖液，能量，dNTP等都是充足的，PCR按照理論情況下的擴增（A: 指數(shù)期），限速因子為底物的量；

隨著時間的增加，產(chǎn)物越來越多，每次循環(huán)所需要的酶也就越來越多，當(dāng)達(dá)到B（線性期）階段的時候，所有的酶都參與了擴增，因此每個循環(huán)之后產(chǎn)物增加量是恒定的，和酶的數(shù)量相關(guān)，此時限制產(chǎn)物增加的因素是酶；

當(dāng)達(dá)到C（衰退期）階段時候，酶逐漸失活，dNTP消耗殆盡，產(chǎn)物增加量逐漸減少；

直至到D階段，沒有任何產(chǎn)物生成，數(shù)目保持恒定。

我們可以將每條PCR產(chǎn)物帶上一個熒光標(biāo)記（具體怎么回事下節(jié)講解），這樣的話有多少個PCR產(chǎn)物就有多少單位的熒光，因此：

熒光 正比于 DNA產(chǎn)物數(shù)目 某種關(guān)系于 DNA初始量

因此我們通過機器收集熒光的量就能知道DNA初始量了，那么機器如何收集熒光呢？

圖4 固定循環(huán)數(shù)測定熒光強度值

圖5 固定熒光強度測試循環(huán)數(shù)

只要我們把R0設(shè)置合適，R0這條水平線就能切割到所有的處于對數(shù)期的曲線，我們qPCR采用的就是這種模式，下面我們來看下為什么這種模式能夠反映出DNA初始量（以下推導(dǎo)中l(wèi)g代表以2為底的對數(shù)）。

一大波推導(dǎo)公式來襲~可直接看最后公式

如果你有一個實驗組和一個對照組，那么實驗組比對照組的比值就是2^-△△Ct，意思就是說實驗組的mRNA水平是對照組的多少倍（Fold change）。

那么為什么不能用圖4（固定循環(huán)數(shù)，測最終熒光強度值）的方式來衡量初始濃度呢？那是因為固定循環(huán)數(shù)的情況下，有很多樣品不處于對數(shù)期，熒光的量與初始濃度沒有特定的關(guān)系，無法計算初始濃度。

好了，不知道你是否已經(jīng)明白其中的原理，我們下一節(jié)將介紹qPCR儀器運行的原理，讓你真正理解qPCR~

“這哪是最清晰的QPCR講解?。俊?/p>

“客官請息怒，科研狗會努力做好，希望提出寶貴意見！汪汪汪”