第一章 概論

第一節(jié)微生物(microorganism)

一、定義、特點(diǎn)、分類

特點(diǎn)： 形體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，種類繁多， 分布廣泛，繁殖迅速，易于變異。

分類：主要分為三大類八種微生物：

1.非細(xì)胞型微生物 ：

無(wú)典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，含一種類型的遺傳物質(zhì)，專性細(xì)胞內(nèi)寄生。例：病毒，亞病毒，朊粒。

2.原核細(xì)胞型：

有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，但細(xì)胞器不完善，僅有原始核質(zhì)，含有兩種類型的遺傳物質(zhì)。例：細(xì)菌、放線菌、螺旋體、支原體、衣原體、立克次氏體。

3.真核細(xì)胞型：

有完整的細(xì)胞器，細(xì)胞核分化程度高。例：真菌，原蟲(chóng)。

二、微生物與人類的關(guān)系

(一)、有利方面

參與物質(zhì)循環(huán)生產(chǎn)：(1)工業(yè)上：食品、皮革、紡織、化工等;(2)農(nóng)業(yè)上：制造菌肥、植物生長(zhǎng)素、滅蟲(chóng)等;(3)醫(yī)藥工業(yè)：抗生素的生產(chǎn);生物制品的制備;正常菌群;基因工程。

(二)不利方面

條件致病菌：致病菌：

三、微生物學(xué)發(fā)展過(guò)程

(一)微生物學(xué)的經(jīng)驗(yàn)時(shí)期

(二)實(shí)驗(yàn)微生物學(xué)時(shí)期

特點(diǎn)：人們將微生物與生產(chǎn)、生活密切聯(lián)系起來(lái)，發(fā)現(xiàn)了許多病的病原體，找到了醫(yī)治和預(yù)防方法，并能利用它。

此階段作出貢獻(xiàn)的科學(xué)家有：列文虎克(荷蘭)、巴斯德(法國(guó))、李斯特(英國(guó))、郭霍(德國(guó))、伊萬(wàn)諾夫斯基(俄國(guó))等。

(三)現(xiàn)代微生物學(xué)時(shí)期

(四)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的學(xué)習(xí)任務(wù)與方法

第二章 細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

第一節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)與大小

一.細(xì)菌的大?。阂評(píng)m 作為測(cè)量單位。

二.細(xì)菌的形態(tài)：球、桿、螺(弧菌、螺菌)。

三.細(xì)菌的排列： 球菌：雙、鏈、四聯(lián)、八疊、葡萄樣。

桿菌和螺菌：多分散排列，偶呈鏈狀。

第二節(jié) 細(xì)菌的結(jié)構(gòu)

一.細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)：包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)。

(一)細(xì)胞壁(cell wall)：

1.G 菌：含有豐富的肽聚糖、大量的磷壁酸。

(1)肽聚糖：由聚糖骨架(N-乙酰葡糖胺及N-乙酰胞壁酸經(jīng) -1、4糖苷鍵交替連接構(gòu)成)、四肽側(cè)鏈、五肽橋組成，形成牢固的三維空間構(gòu)型。

(2)磷壁酸：核糖醇及甘油醇?xì)埢B接而成的多聚物。分為：壁磷壁酸;膜磷壁酸(LTA)。功能：G 菌的主要抗原所在;有的具有粘附功能。

2.G-菌：含有少量的肽聚糖、很厚的外膜。

(1)肽聚糖：量少，缺乏五肽橋，形成疏松的二維平面結(jié)構(gòu)。

(2)外膜：由脂蛋白、脂質(zhì)雙層、脂多糖(脂類A、核心多糖、特異性多糖)構(gòu)成。

脂類A是內(nèi)毒素的毒性成分所在。

3.細(xì)胞壁的功能： 維持細(xì)菌固有的外形;保護(hù)細(xì)菌抗低滲;與細(xì)菌的抗原性有關(guān);參與細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換。

4.L型細(xì)菌：

定義:細(xì)菌L型即細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型。

特點(diǎn)：①呈高度的多形性;多染為革蘭氏陰性;②高滲、低瓊脂、含血清的平板培養(yǎng);2-7天后形成荷包蛋樣細(xì)小菌落;仍有一定的致病力。③可返祖性;④可致病性：細(xì)菌L型仍有一定的致病性。因此，當(dāng)臨床上遇有明顯癥狀而標(biāo)本常規(guī)細(xì)菌檢驗(yàn)為陰性者，應(yīng)考慮細(xì)菌L型感染的可能性。

(二)細(xì)胞膜(cell membrane)：

1、結(jié)構(gòu)：液態(tài)脂質(zhì)雙層內(nèi)鑲嵌多種蛋白質(zhì)，但不含膽固醇。

2、功能：物質(zhì)交換，生物合成，呼吸及分泌作用。

3、中介體：(類線粒體)胞膜內(nèi)折形成的囊管狀物，多見(jiàn)于G 菌，EM下可見(jiàn)。分為：橫膈中介體、側(cè)中介體。功能：能量代謝;細(xì)菌的分裂。

(三)細(xì)胞質(zhì)

1、核蛋白體(核糖體)，是細(xì)菌合成蛋白質(zhì)的場(chǎng)所。

2、質(zhì)粒(plasmid)：

定義：是染色體外的遺傳物質(zhì)，為環(huán)狀閉合的雙鏈DNA分子。

特點(diǎn)：具有自我復(fù)制的能力; 控制部分特定的遺傳信息

F質(zhì)粒：制造性菌毛。

R質(zhì)粒：決定細(xì)菌耐藥性形成。

Vi質(zhì)粒：參與細(xì)菌毒力。

Col質(zhì)粒：決定大腸桿菌能否產(chǎn)生大腸菌素。

非細(xì)菌生命活動(dòng)所必須，可自行丟失或消除;具有轉(zhuǎn)移性、相容性和不相容性。

3、胞漿顆粒：多為營(yíng)養(yǎng)儲(chǔ)存物，其中的異染顆粒粒，對(duì)白喉棒狀桿菌的鑒別有一定的意義。有鑒別意義。

(四)核質(zhì)(nuclear material)

細(xì)菌屬于原核細(xì)胞，無(wú)成形的細(xì)胞核，無(wú)核膜和核仁等，故稱核質(zhì)、核區(qū)或擬核。

雙股DNA。細(xì)菌遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)質(zhì)，控制著細(xì)菌的主要遺傳變異性狀。

二、細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)： 包括莢膜、芽胞、鞭毛、菌毛

(一)莢膜

定義：某些細(xì)菌細(xì)胞壁外包繞著一層黏液性物質(zhì)，當(dāng)其厚度大于0.2μm時(shí)稱為莢膜。

形成條件：機(jī)體內(nèi)或營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上。

結(jié)構(gòu)：多糖或多肽。

功能：(1)保護(hù)菌體：抗干燥、抗吞噬、抗體液因子的殺菌;

(2)與致病性有關(guān);

(3)與抗原性有關(guān)

(4)鑒定作用

觀察法：莢膜染色或墨汁負(fù)性染色。

(二)芽胞

定義：芽胞是某些細(xì)菌在一定環(huán)境條件下，細(xì)胞質(zhì)脫水濃縮，在菌體內(nèi)形成一個(gè)具有多層膜狀結(jié)構(gòu)、通透性低、折光性強(qiáng)的圓形或橢圓形小體。

形成條件：營(yíng)養(yǎng)缺乏主要是革蘭陽(yáng)性桿菌。

特點(diǎn)：①保存了細(xì)菌的全部生命活性，②是細(xì)菌的休眠狀態(tài)，無(wú)新陳代謝(細(xì)菌-繁殖體;芽胞-休眠體)③條件適宜，芽胞可萌發(fā)成繁殖體而致病(1個(gè)細(xì)菌→1個(gè)芽胞→1個(gè)細(xì)菌)④抵抗力強(qiáng)，存活時(shí)間長(zhǎng)

結(jié)構(gòu)：多層厚膜。

意義：①增強(qiáng)細(xì)菌的抵抗力

②可成為潛在病源

③判斷滅菌效果的指標(biāo)

④鑒定作用

觀察法：芽胞染色。

(三)鞭毛

定義:是某些細(xì)菌菌體表面附著的細(xì)長(zhǎng)呈波狀彎曲的絲狀物。

分類：?jiǎn)?霍亂弧菌)、雙(空腸彎曲菌)、叢(銅綠假單胞菌)、周(沙門(mén)菌)。

存在菌：幾乎所有的弧菌和螺菌、約50%的桿菌、少數(shù)球菌有鞭毛。

結(jié)構(gòu)：鞭毛蛋白構(gòu)成，自細(xì)胞膜長(zhǎng)出，游離于細(xì)胞外。包括基礎(chǔ)小體、鉤狀體、絲狀體。

功能：①運(yùn)動(dòng)作用：毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官。

②與致病有關(guān)。

③有免疫原性(特殊H抗原)

④鑒定作用

判斷方法：①經(jīng)特殊染色。

②用電子顯微鏡直接觀察鞭毛。

③通過(guò)暗視野顯微鏡觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)方式，推斷鞭毛的有無(wú)

④在半固體培養(yǎng)基中觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象，推斷鞭毛的有無(wú)。

(四)菌毛(pilus)

定義：是某些細(xì)菌菌體表面的比鞭毛更短、直絲狀物。

結(jié)構(gòu)：菌毛蛋白構(gòu)成。

分類及作用：普通菌毛：具有粘附能力，與致病性有關(guān)。

性菌毛： 遺傳物質(zhì)的載體;噬菌體的受體。細(xì)菌的耐藥性、毒力等均通過(guò)這種方式傳遞。

觀察法：必須用電子顯微鏡才能觀察到。

第三章 細(xì)菌的生理

第一節(jié) 細(xì)菌的理化性

一、細(xì)菌的化學(xué)組成：與其他生物細(xì)胞相似，細(xì)菌的化學(xué)組成主要有水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂類、核酸和蛋白等。

①水在細(xì)菌細(xì)胞中含量最多，占細(xì)胞總重量的70%-90%;

②糖類大多為多糖，占細(xì)菌干重的10%-30%

③蛋白質(zhì)約占細(xì)菌干重的50%-80%

④細(xì)菌含有核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)兩種核酸。RNA主要存在于胞質(zhì)中，占細(xì)菌干重的10%;DNA則存在于染色體和質(zhì)粒中，占細(xì)菌干重的3%。

二、細(xì)菌的物理性狀：

1.帶電現(xiàn)象： 細(xì)革蘭陰性菌的pl約為pH4-5，革蘭陽(yáng)性菌的pl約為pH2-3，

2.光學(xué)性質(zhì)：細(xì)菌為半透明體

3.滲透壓 ：由于細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)含有高濃度的無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)物，因而具有較高的滲透壓。4.表面積：細(xì)細(xì)菌體積微小，但其單位體積表面積大，有利于細(xì)菌與外界物質(zhì)交換。

5 . 具有半透性。染色法、比濁法、分光光度計(jì)法。

6.營(yíng)養(yǎng)類型：根據(jù)細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需要的不同，將細(xì)菌分為兩大營(yíng)養(yǎng)類型。

(1)自營(yíng)菌：能以簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)碳化物、氮化物作為碳源、氮源，合成菌體所需的大分子，其能量來(lái)自無(wú)機(jī)化合物的氧化(化學(xué)能)，也可通過(guò)光合作用而獲得(光能)，如固氮菌。

(2)異營(yíng)菌：不能以無(wú)機(jī)碳化合物作為唯一的碳源，必須利用有機(jī)物如糖類、蛋白質(zhì)、蛋白胨和氨基酸作為碳源和氮源，僅有少數(shù)異養(yǎng)菌能利用無(wú)機(jī)氮化物，合成菌體所需的大分子，其所需的能量大多從有機(jī)物質(zhì)氧化而獲得。

第二節(jié) 細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖

一、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件：

充足的營(yíng)養(yǎng)： 包括水、氮源(主要是提供合成菌體成分的原料，一般不提供能量。)、碳源(碳源是細(xì)菌合成蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸、酶類等菌體成分的原料，同時(shí)也為細(xì)菌新陳代謝提供能量。)、無(wú)機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子。

合適的PH值：最適PH7.2-7.6。特殊：結(jié)核分枝桿菌在pH6.4-6.8、霍亂弧菌在pH8.4-9.2的環(huán)境中生長(zhǎng)最好。

適宜的溫度：最適溫度37℃ 。

必要的氣體環(huán)境：主要包括O2、CO2、N2

據(jù)其對(duì)氧氣的需求，分專性需氧、專性厭氧、微需氧、兼性厭氧菌。

專性厭氧菌厭氧的原因：

(1)缺乏Eh高的細(xì)胞色素及細(xì)胞色素氧化酶，不能從有氧環(huán)境獲得營(yíng)養(yǎng)。

(2)缺乏過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶及超氧化物岐化酶，不能消除O2-及H2O2的殺菌作用。

二、細(xì)菌繁殖的方式及速度：

個(gè)體的生長(zhǎng)繁殖：多為無(wú)性二分裂;速度快。

通常每20～30min分裂一次，結(jié)核分枝桿菌18～20h分裂一次。

群體的生長(zhǎng)繁殖：常用生長(zhǎng)曲線表示其繁殖規(guī)律。

(1)定義：以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以活菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)繪制一條曲線，稱為細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線

(2)生長(zhǎng)曲線分為4個(gè)時(shí)期：

1)遲緩期：是細(xì)菌進(jìn)入新環(huán)境后的適應(yīng)階段，細(xì)菌數(shù)不增加，甚至還稍有減少。

2)對(duì)數(shù)期：此期細(xì)菌以幾何級(jí)數(shù)增長(zhǎng)(20→21→22→23→24→…)，在生長(zhǎng)曲線圖上，活菌數(shù)的對(duì)數(shù)呈直線上升，增長(zhǎng)極快。此期細(xì)菌的形態(tài)、染色性、生理活性都較典型，對(duì)外界環(huán)境因素的作用較為敏感。

3)穩(wěn)定期：由于培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗，毒性產(chǎn)物積聚，pH下降使細(xì)菌繁殖速度漸趨下降，細(xì)菌死亡數(shù)則逐漸上升，細(xì)菌繁殖數(shù)與死亡數(shù)大致平衡。

4)衰亡期：細(xì)菌繁殖逐漸減慢，死亡逐漸增多，死菌數(shù)超過(guò)活菌數(shù)。

第三節(jié) 細(xì)菌的新陳代謝

一、細(xì)菌的分解代謝產(chǎn)物及生化反應(yīng)：

1.對(duì)糖的分解： 需氧菌將丙酮酸經(jīng)三羧酸循環(huán)徹底分解成二氧化碳和水。厭氧菌則發(fā)酵丙酮酸，產(chǎn)生各種酸類、醛類、醇類、酮類。

糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)： V-P實(shí)驗(yàn);甲基紅實(shí)驗(yàn)。

2.對(duì)蛋白質(zhì)的分解：細(xì)菌分泌的胞外酶先將復(fù)雜的蛋白質(zhì)分解為短肽或氨基酸，然后吸收進(jìn)人細(xì)胞，再由胞內(nèi)酶將氨基酸繼續(xù)分解。

常用的生化試驗(yàn)：有吲同靛基質(zhì)試驗(yàn)：檢測(cè)細(xì)菌分解色氨酸的能力。硫化氫實(shí)驗(yàn)：檢測(cè)細(xì)菌分解含硫AA的能力。

3.其 它：枸櫞酸鹽利用實(shí)驗(yàn);尿素酶實(shí)驗(yàn)。其中IMViC常用于鑒別產(chǎn)氣桿菌和大腸桿菌。

二、細(xì)菌的合成代謝產(chǎn)物：五素一質(zhì)

1.熱原質(zhì)：為G-菌的LPS，有致熱、耐熱的特點(diǎn)。

2.毒素及侵襲性酶：

外毒素是由革蘭陽(yáng)性菌及部分革蘭陰性菌合成并釋放到菌體外的毒性蛋白質(zhì)，毒性強(qiáng)，不同細(xì)菌的外毒素對(duì)組織器官有高度的選擇性。內(nèi)毒素是革蘭陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖成分，當(dāng)菌體死亡裂解后，才可釋放到菌體外。

3.抗生素：抗生素主要由真菌和放線菌產(chǎn)生，由細(xì)菌產(chǎn)的抗生素只有多粘菌素等少數(shù)幾種。

4.細(xì)菌素：有抗菌作用，但作用譜狹窄，常用于細(xì)菌的分型。

5.維生素：主要有B族維生素和維生素K。

6.色素： 分脂溶性和水溶性兩種，有助于細(xì)菌的鑒別。

第四章 細(xì)菌的遺傳與變異

有關(guān)概念： 遺傳、變異(遺傳性、非遺傳性)

細(xì)菌遺傳、變異的物質(zhì)基礎(chǔ)主要有染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子等。

一、細(xì)菌變異的物質(zhì)基礎(chǔ)

1、染色體：環(huán)狀閉和的雙股DNA，無(wú)組蛋白包繞。

2、質(zhì)粒：染色體外的遺傳物質(zhì)，主要特點(diǎn)：自主復(fù)制;不相容性;轉(zhuǎn)移性;編碼某些特殊功能蛋白質(zhì)。

耐藥性質(zhì)粒(接合性耐藥質(zhì)粒R質(zhì)粒)、Col質(zhì)粒(腸毒素)、Vi質(zhì)粒(致病性有關(guān))。

3、轉(zhuǎn)位因子：插入順序、轉(zhuǎn)座子、轉(zhuǎn)座噬菌體。

細(xì)菌染色體或質(zhì)粒上一段特異的核苷酸序列片段，可在DNA分子中隨機(jī)轉(zhuǎn)移，但必須依附于染色體或質(zhì)粒同時(shí)復(fù)制。分類： 插入序列IS、轉(zhuǎn)座子Tn(IS 中心序列)。

4、噬菌體

定義：噬菌體是感染細(xì)菌、真菌等微生物的病毒。此鄉(xiāng)。此類病毒感染細(xì)菌后能引起細(xì)菌裂解，故稱噬菌體。

生物學(xué)特性：形態(tài)及大?。簻y(cè)量單位是nm;形態(tài)有：蝌蚪形、微球形、細(xì)桿形;結(jié)構(gòu)：由頭、尾兩部分構(gòu)成;化學(xué)組成：核酸-遺傳物質(zhì)，DNA或RNA;蛋白質(zhì)-保護(hù)核酸，決定噬菌體的表型特征;抗原性：特異性抗體能抑制相應(yīng)噬菌體侵襲敏感菌;抵抗力。

噬菌體與細(xì)菌的相互關(guān)系：

(1)毒性噬菌體(virulent phage)：指能在宿主菌內(nèi)復(fù)制增殖產(chǎn)生大量子代噬菌體并裂解細(xì)菌的噬菌體。其溶菌過(guò)程包括吸附、穿入、生物合成、成熟與釋放。

①吸附階段：高度的特異性;②增殖階段：Phage DNA復(fù)制子代DNA 轉(zhuǎn)錄mRNA、轉(zhuǎn)譯與生物合成有關(guān)的酶、調(diào)節(jié)蛋白、結(jié)構(gòu)蛋白，一定程序裝配成完整 Phage;③裂解階段：噬菌現(xiàn)象：液體培養(yǎng)基-變澄清;固體培養(yǎng)基-噬菌斑。

(2)溫和噬菌體(temperate phage)：指不能在宿主菌內(nèi)復(fù)制增殖而將其基因整合到細(xì)菌染色體上，并隨菌分裂到子代菌中的噬菌體。但整合基因可自發(fā)或經(jīng)誘導(dǎo)而脫落成為游離狀態(tài)，使噬菌體進(jìn)入溶菌周期，因此溫和噬菌體既有溶原周期又有溶菌周期。前噬菌體;溶原性細(xì)菌。

二、 細(xì)菌的變異現(xiàn)象

1.形態(tài)、結(jié)構(gòu)的變異：①莢膜變異;②芽胞變異;③鞭毛變異(H-O變異)。

2.菌落的變異：S-R變異。指新從患者分離的沙門(mén)菌常為光滑型，經(jīng)人工培養(yǎng)后菌落呈現(xiàn)粗糙型。常伴有抗原、毒力、某些生化特性的改變。

3.毒力的變異：BCG即為毒力變異的典型。

4.耐藥性的變異：

三. 細(xì)菌變異的機(jī)理

1.突變(mutation)：

定義：突變是細(xì)菌遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生突然而穩(wěn)定的改變，這種改變可傳于后代。

分類：自發(fā)突變與誘導(dǎo)突變：基因突變與染色體畸變;

突變的規(guī)律：可誘導(dǎo)性; 隨機(jī)、不定向性;可逆性。

2.、基因的轉(zhuǎn)移與重組：

①轉(zhuǎn)化：受體菌直接攝取供體菌提供的游離DNA片段整合重組。

②轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為媒介，將供體菌的基因轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi)。

③接合：性菌毛將供體菌所帶有的F質(zhì)?；蝾愃七z傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移至受體菌的過(guò)程。主要見(jiàn)于革蘭陰性菌。

④溶原性轉(zhuǎn)換：噬菌體的DNA與細(xì)菌染色體重組。

⑤原生質(zhì)體融合：兩種失去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體混和可發(fā)生融合。

四、細(xì)菌變異的實(shí)際意義

一、 在診斷疾病方面：

二、在治療疾病方面：注意耐藥性變異，選擇敏感抗生素。

三、在預(yù)防疾病方面：

四、在致癌物質(zhì)測(cè)定方面的應(yīng)用

五、在基因工程方面：

第五章 細(xì)菌的分類與命名

一、細(xì)菌的分類：

細(xì)菌的分類系統(tǒng)有多種，伯杰分類系統(tǒng)是目前國(guó)際上普遍采用的分類系統(tǒng)。

1.微生物的分類等級(jí)與其他生物相同，也分為界、門(mén)、綱、目、科、屬、種。

2.臨床微生物檢驗(yàn)中常用的分類單位是科、屬、種。

3.種是細(xì)菌的基本分類單。

二、細(xì)菌的命名：

國(guó)際上多采用拉丁文雙命。一個(gè)細(xì)菌的名稱由字組成，前一字是屬名，首字母大寫(xiě);后一字為種名，首字母小寫(xiě)。中文的命名次序與拉丁文相反。

三、細(xì)菌生物學(xué)特性分類法

細(xì)菌的形態(tài)、染色以及細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)、細(xì)菌的生理生化特征，包括：傳統(tǒng)分類法、數(shù)值分類法。

四、細(xì)菌的遺傳學(xué)分類法

以細(xì)菌的核酸、蛋白質(zhì)等在組成上的同源程度分類，包括：

DNA G C mol%測(cè)定

核酸同源值測(cè)定

核糖體RNA堿基序列測(cè)定

細(xì)菌的分類系統(tǒng)

包括有細(xì)菌的鑒定以及細(xì)菌分類資料

伯杰分類系統(tǒng)——最常用

CDC(美國(guó)疾病預(yù)防和控制中心)分類系統(tǒng)

第六章 微生物檢驗(yàn)概述

一、標(biāo)本的采集與送檢

(一)標(biāo)本采集的一般原則

1.早期采集：采集時(shí)間最好是病程早期、急性期或癥狀典型時(shí)，而且應(yīng)在使用抗菌藥物之前采集。

2.無(wú)菌采集： 采集的標(biāo)本應(yīng)無(wú)外源性污染。

與外界相通的腔道，如竇道標(biāo)本應(yīng)由竇道底部取樣;

從正常菌群寄生部位(如口腔)采集的標(biāo)本，采用特殊選擇性培養(yǎng)基;

盛標(biāo)本的無(wú)菌容器須先經(jīng)高壓滅菌、煮沸、干熱等物理方法滅菌，或用一次性無(wú)菌容器，而不能用化學(xué)處理。

3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集

如尿液標(biāo)本，疑為厭氧菌感染時(shí)，應(yīng)以無(wú)菌注射器從恥骨上緣行膀胱穿刺術(shù)抽取;若懷疑是需氧或兼性厭氧菌的感染，則可通過(guò)自然導(dǎo)尿獲取標(biāo)本。

4.采集適量標(biāo)本：如腸熱癥患者，發(fā)病的第1 周應(yīng)采集血液，第2 周應(yīng)采集糞便和尿液。否則影響細(xì)菌檢出率。

5.安全采集

(二)標(biāo)本的處理

一些對(duì)環(huán)境敏感的細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢，而其他所有的標(biāo)本采集后最好在2小時(shí)之內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。

一般情況下，用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本保存時(shí)間不應(yīng)超過(guò)24小時(shí)。

二、微生物檢驗(yàn)

1.直接涂片鏡檢;

初步診斷，5～10min。標(biāo)本經(jīng)涂片染色或制備濕片鏡檢，有些標(biāo)本如尿液、腦脊液等經(jīng)過(guò)離心濃縮后鏡檢出其初步結(jié)果對(duì)疾病診斷有參考價(jià)值。直接鏡檢對(duì)于確定進(jìn)一步檢出步驟及鑒定方法也很有幫助。另外，直接鏡檢還可評(píng)價(jià)標(biāo)本是否符合檢驗(yàn)要求。

2.分離培養(yǎng);

3.生化實(shí)驗(yàn);

4.血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：鑒定細(xì)菌的種或型;

5.動(dòng)物試驗(yàn); 藥物敏感試驗(yàn);

6.其他鑒定法。

三、血清學(xué)診斷

用已知的細(xì)菌或Ag檢測(cè)病人體液中有無(wú)相應(yīng)的Ab及效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，作為某些傳染病的輔助診斷。結(jié)果判斷：Ab效價(jià)升高(超過(guò)正常人);雙份血清標(biāo)本，Ab效價(jià)4倍或4倍以上增長(zhǎng)。

四、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室安全措施和質(zhì)量保證

(一)實(shí)驗(yàn)室感染來(lái)源

1.微生物氣溶膠。

2.接觸感染材料或使之附著于衣服帶出室外、菌液滴落于物體表面，注射時(shí)不慎刺破皮膚等。

(二)感染性廢棄物的處理

1.任何污染材料未經(jīng)消毒不能拿出實(shí)驗(yàn)室。

2.液體廢棄物必須收集在防漏、未破的容器內(nèi)，經(jīng)高濃度的化學(xué)消毒劑處理。

3.對(duì)剩余標(biāo)本、接種過(guò)的培養(yǎng)基、菌種等丟棄前均需適當(dāng)消毒。

4.動(dòng)物房的廢物在處理前及動(dòng)物籠被清洗前均需消毒，最好經(jīng)高壓蒸氣滅菌。

5.對(duì)于任何有污染的銳器如針頭、注射器、玻片等在處理前不要用手接觸。

(三)微生物實(shí)驗(yàn)室的室內(nèi)質(zhì)控

1.對(duì)細(xì)菌檢驗(yàn)人員的要求;

2.操作手冊(cè);

3.儀器設(shè)備的功能監(jiān)測(cè);

4.培養(yǎng)基的質(zhì)量控制;

5.試劑、染色液以及抗生素的質(zhì)量控制;

6.標(biāo)本檢驗(yàn)的質(zhì)量控制;

7.標(biāo)準(zhǔn)菌株的來(lái)源和保存及室內(nèi)質(zhì)量的全面控制。

五、動(dòng)物試驗(yàn)

主要用途：分離和鑒定病原微生物，檢測(cè)細(xì)菌毒性產(chǎn)物，觀察病原微生物的致病性。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠、豚鼠、家兔及綿羊等。

接種方法：皮下/皮內(nèi)/肌內(nèi)/腹腔/靜脈/腦內(nèi)注射等?！　?/p>

六、免疫檢驗(yàn)技術(shù)

七、發(fā)光分析技術(shù)

依賴酶或化學(xué)反應(yīng)釋放能量引起發(fā)光物質(zhì)(如魯米諾、熒光素等)發(fā)光的檢測(cè)方法。

根據(jù)發(fā)光原理，主要分為生物及化學(xué)發(fā)光兩種方法。

八、鱟試驗(yàn)

鱟試驗(yàn)陽(yáng)性表明有革蘭染色陰性菌或內(nèi)毒素血癥，也可用于生物制品或注射液的內(nèi)毒素污染檢測(cè)。

九、分子生物學(xué)在病原微生物中的應(yīng)用

分子生物學(xué)：從分子水平上研究生物的生命活動(dòng)及其規(guī)律的科學(xué)。

基因診斷：應(yīng)用基因工程技術(shù)對(duì)生物體的基因組DNA片段及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析，進(jìn)而對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷。

(一)核酸雜交

(二)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

(三)生物芯片技術(shù)