circRNA是區(qū)別于傳統(tǒng)線性RNA的一類新型RNA,具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu),大量存在于真核轉(zhuǎn)錄組中。大部分的環(huán)狀RNA是由外顯子序列構(gòu)成,在不同的物種中具有保守性,同時(shí)存在組織及不同發(fā)育階段的表達(dá)特異性。 由于環(huán)狀RNA對核酸酶不敏感,所以比線性RNA更為穩(wěn)定,這使得環(huán)狀RNA在作為新型臨床診斷標(biāo)記物的開發(fā)應(yīng)用上具有明顯優(yōu)勢。circRNA作為競爭性內(nèi)源RNA(ceRNA),能競爭性結(jié)合miRNA,從而調(diào)控miRNA靶基因的表達(dá)。 但是很多童鞋可能還不是很了解如何調(diào)取circRNA正確的全長的序列,所以今天科研小助手就為大家講解一下如何調(diào)取circRNA基因組和剪切后的序列情況。 一、 circRNA基因組序列調(diào)取 1. 首先打開circBase網(wǎng)站: http://www., 2. 如果你有circRNA的ID號(hào)是最好的了,這里科研小助手直接隨便輸入一個(gè)基因的名字EGFR進(jìn)行模糊搜索,結(jié)果如下: 3. 可以看到結(jié)果有很多,這些都是EGFR的mRNA剪切形成的circRNA。 如果你對哪個(gè)circRNA感興趣想要調(diào)取其在基因組上的序列那么就點(diǎn)擊position (genome browser link)一欄的鏈接,比如我們調(diào)取第一個(gè)circRNA的基因組序列,就點(diǎn)擊chr7:55209978-55214433,這時(shí)候你就跳轉(zhuǎn)到了UCSC這個(gè)神奇的網(wǎng)站。 4. 然后點(diǎn)擊hsa_circ_0080220后面對應(yīng)的線條,跳轉(zhuǎn)到如下界面; 5. 點(diǎn)擊View DNA for this feature (hg19/Human); 6. 點(diǎn)擊 get DNA,最后你就得到circRNA hsa_circ_0080220的基因組上的序列了。 二、circRNA剪切后序列的調(diào)取 無論是對circRNA進(jìn)行過表達(dá)還是敲減或者是PCR驗(yàn)證設(shè)計(jì)divergent引物,一般都是使用circRNA剪切后的序列,所以科研小助手也為大家講解一下如何調(diào)取circRNA剪切后的序列。 1. 我們按照上述步驟搜索出結(jié)果之后直接點(diǎn)擊Fasta; 2. 出現(xiàn)如下界面后,默認(rèn)選中的是genomic,我們需要選中spliced,點(diǎn)擊search; 3. 這時(shí)會(huì)下載一個(gè)壓縮包,你只要保存這個(gè)壓縮包然后解壓以記事本的方式打開文件即可,如下即是circRNA剪切后的序列了 這個(gè)方法下載下來的是所有搜索結(jié)果的circRNA序列。如果只想獲取你感興趣的circRNA序列可以用circRNA的ID號(hào)再搜索,這樣就只會(huì)有一個(gè)結(jié)果了。如果你還有任何疑問歡迎在留言區(qū)留言。 |
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