|
摘要：在發(fā)芽糙米中加入峰蜜，利用酵母發(fā)酵制備成糙米酵素，并對糙米酵素提取物的抗氧化活性進行研究。結果表明：糙米酵素提取物清除DPPH自由基、清除超氧陰離子及羥基自由基的能力較強，與常用抗氧化劑BHT相差不大。 關鍵詞：糙米酵素；提取物；抗氧化性 中圖分類號：TS210 文獻標識碼：A 文章編號：1674-1161（2015）06-0060-03 糙米酵素是由發(fā)芽糙米加入蜂蜜后利用酵母菌培養(yǎng)而成的。發(fā)芽是指糙米中所含的大量酶被激活釋放，并從結合態(tài)向游離態(tài)的酶解過程。在此過程中，酵母菌吸取糙米營養(yǎng)并衍生出數(shù)十種新的酵素，使其營養(yǎng)價值超越了糙米本身。另外，酵素內(nèi)含有β-胡蘿卜素、維生素E、蛋白質(zhì)分解酵素、淀粉分解酵素、脂肪分解酵素，以及豐富的蛋白質(zhì)、粗纖維、糖質(zhì)、鐵、鈣、鈉等成分，可幫助營養(yǎng)素迅速吸收，提高人體免疫力，并能活化細胞，促進新陳代謝。目前，國內(nèi)對糙米酵素的研究主要集中在工藝上，對糙米酵素提取物的抗氧化性的研究報道較少。為此，特對糙米酵素提取物抗氧化活性進行研究。 1 材料與方法 1.1 材料和試劑 糙米酵素：由糙米加蜂蜜發(fā)酵后制得；玉米胚芽油：中糧金龍魚；酵母菌：實驗室保藏的安琪酵母；稻谷：晚秈稻谷。其他試劑均為分析純。 1.2 儀器和設備 粉碎機：天津市泰斯特儀器有限公司；UV-2000分光光度計：上海精密儀器廠；熒光分光光度計：上海精密儀器廠；電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海躍進醫(yī)療器械廠；真空抽濾機：天津泰斯特儀器有限公司。 1.3 試驗方法 1.3.1 糙米酵素的制備 用礱谷機使稻谷脫殼變成糙米。準確稱取糙米400 g，用水洗凈，加水2 000 mL，于32 ℃浸泡21 h。選取芽長1 mm的發(fā)芽糙米作為試樣，低溫凍干后用萬能粉碎機粉碎，過40目篩，于 -20 ℃冷凍保存。準確稱取發(fā)芽糙米粉末20.0 g，加水量為150%，加蜂蜜量為8%，加玉米胚油量為5%；糙米酵素最佳發(fā)酵條件為酵母用量10%，發(fā)酵時間2 h，發(fā)酵溫度35 ℃；發(fā)酵后用紗布粗過濾，在3 500 r/min下離心，抽濾，再離心，均分為4份備用。 1.3.2 糙米酵素提取物的提取 取1份糙米酵素加入100 mL 80%乙醇溶液，超聲11 min，離心后取上清液，重復3次?；旌仙锨逡哼M行真空濃縮，用HCl溶液調(diào)整pH值至2～3，用己烷（50 mL×4，每次30 min）脫脂，用乙酸乙酯萃取。萃取液用Na2SO4脫水后蒸發(fā)濃縮，用甲醇溶解并定容至5 mL。 1.3.3 DPPH自由基清除率的測定 分別準確稱取質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的DPPH標準儲備液（現(xiàn)用現(xiàn)配）于50 mL比色管中，配置質(zhì)量濃度依次為0，2，4，8，12，16，20 μg/mL的標準系列溶液，在516 nm處測定上述標準系列溶液的吸光度，繪制標準曲線（如圖1所示）。 取不同體積的提取液用乙醇稀釋至3.0 mL，再加入1.0 mL 0.20 mmol/L DPPH乙醇溶液啟動反應，使反應體系中DPPH的終濃度為0.05 mmol/L。搖勻后于室溫下避光放置30 min，然后以乙醇為參比，測定反應液在516 nm處的吸光度。提取物對DPPH的清除率的計算公式為： DPPH清除率（%）=1-[（A空白-A加樣）/A空白×100%] 1.3.4 清除超氧陰離子（O2-?）能力的測定 采用間苯三酚自氧化體系法測定。對超氧陰離子清除率的計算公式為： O2-?清除率（%）=（A空白-A加樣）/A空白×100% 1.3.5 清除羥基自由基（?OH）能力的測定 采用Fenton反應分光光度法進行測定。對羥基自由基（?OH）清除率的計算公式為： ?OH清除率（%）=（A加樣-A空白- A損傷）/（A未損傷- A損傷）×100% 2 結果與分析 2.1 清除DPPH自由基的能力 糙米酵素提取物和BHT對DPPH的清除率如圖2所示。 由圖1可知：兩種試樣對DPPH自由基的清除能力隨著溶液質(zhì)量濃度的增加而增大。當質(zhì)量濃度為0.64 mg/mL時，糙米酵素提取物清除DPPH的能力與BHT相等，為71%；當質(zhì)量濃度小于0.64 mg/mL時，糙米酵素提取物清除DPPH的能力大于BHT；當質(zhì)量濃度大于0.64 mg/mL時，糙米酵素提取物清除DPPH的能力稍小于BHT；當質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時，糙米酵素提取物清除DPPH的能力為82%，稍小于BHT的89%。總體來說，糙米酵素提取物與BHT的清除DPPH能力相差不明顯。 2.2 清除超氧陰離子（O2-?）的能力 糙米酵素提取物和BHT對超氧陰離子（O2-?）的清除率如圖3所示。 由圖2可知：兩種試樣對O2-?的清除能力隨著溶液質(zhì)量濃度的增加而增大。糙米酵素提取物清除O2-?的能力略低于BHT，但穩(wěn)定增長。當質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時，糙米酵素提取物清除O2-?的能力為40%，而BHT清除O2-?的能力為80%。 2.3 清除羥基自由基（?OH）的能力 糙米酵素提取物和BHT對羥基自由基（?OH）的清除率如圖4所示。 由圖3可知：兩種試樣對?OH的清除能力隨著溶液質(zhì)量濃度的增加而增大，但清除率增大趨勢逐漸變緩。當質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時，糙米酵素提取物清除?OH的能力為70%， 而BHT為78%?？傮w來說，二者清除?OH的能力相差不明顯。糙米酵素對?OH具有較好的清除能力，其原因可能是糙米酵素中含有供氫體，能夠提供氫質(zhì)子，可使具有高度氧化性的自由基還原，從而終止自由基連鎖反應，起到清除或抑制自由基的目的。但在高質(zhì)量濃度時，抑制效果出現(xiàn)微增長現(xiàn)象，可能是糙米酵素中某物質(zhì)能將Fe3+還原成Fe2+，增加了?OH生成反應的底物，導致?OH再次產(chǎn)生。 3 結論 當質(zhì)量濃度為0.64 mg/mL時，（下轉(zhuǎn)第64頁）（上接第61頁）糙米酵素提取物清除DPPH自由基的能力與BHT相等，為71%；當質(zhì)量濃度小于0.64 mg/mL時，糙米酵素提取物清除DPPH的能力大于BHT；當質(zhì)量濃度大于0.64 mg/mL時，BHT清除DPPH的能力稍大于糙米酵素提取物。糙米酵素提取物清除超氧陰離子和羥自由基的能力稍小于BHT，但相差不大。 通過試驗可知，糙米酵素有較好的抗氧化效果，但對DPPH，O2-?和?OH的清除率規(guī)律性不強，需要進一步對提取物中的具體物質(zhì)進行鑒定。 參考文獻 [1] 孟繁華.發(fā)芽糙米變溫干燥工藝研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學，2009. [2] RAO M S，MURALIKRISHNA G.Evaluation of the antioxidant properties of free and bound phenolic acids from native and malted finger millet （ragi，Eleusine coracana Indaf-15）[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2001，50（4）：889-892. [3] 張?S彬，龔鋼明，戴妙妙.甘薯多酚粗提液的抗氧化活性研究[J].中國糧油學報，2007，22（9）：76-80. [4] 龐戰(zhàn)軍，周玫，陳瑗.自由基醫(yī)學研究方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000. Research on Antioxidant Activity of Brown Rice Ferment Extract LI Jingsong， JIAN Zhongli* ?。–ollege of Grain Science and Technology， Shenyang Normal University， Shenyang 110034， China） Abstract： In the article， it expounded the method of adding honey in germinated brown rice， used yeast fermentation to produce brown rice ferment， and studied antioxidant activity of brown rice ferment extract. The result showed that the clearance ability of brown rice ferment extract to DPPH free radical， superoxide anion and hydroxyl radical is very strong and no big difference comparing to ordinary antioxidant BHT. Key words： brown rice ferment； extract； antioxidant |
|
|
