?甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用的制作方法

專(zhuān)利名稱(chēng)：甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用的制作方法

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

疼痛是一種常見(jiàn)的臨床癥狀，己經(jīng)成為影響人們生活和工作的重要疾病之一。調(diào)查顯示，頭痛、牙痛、肌肉和關(guān)節(jié)痛是我國(guó)居民最常經(jīng)歷的疼痛，其次為受運(yùn)動(dòng)損傷導(dǎo)致的疼痛和經(jīng)痛。其中，不同年齡

段頭痛發(fā)生比例都超過(guò)了半數(shù)；30歲以下以及30-45歲人群頭痛發(fā)生率都超過(guò)70%;肌肉關(guān)節(jié)痛和牙痛。

目前常用的鎮(zhèn)痛藥可分為兩大類(lèi)，以嗎啡為代表的阿片類(lèi)麻醉性鎮(zhèn)痛藥和以阿斯匹林為代表的非甾體類(lèi)抗炎藥。阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥是中樞神經(jīng)抑制劑，雖效果明顯但易成癮并產(chǎn)生耐受性。非甾體類(lèi)抗炎藥作用于外周神經(jīng)系統(tǒng)，是以阻斷前列腺素的合成為目的，該類(lèi)藥物長(zhǎng)期服用能產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)、胃出血和潰瘍。因此，迫切需要尋找安全有效的鎮(zhèn)痛藥物。

從中草藥中尋找和研制的天然藥物，鎮(zhèn)痛效果良好，具有療效好、副作用小、適合長(zhǎng)期服用及安全可靠等許多優(yōu)點(diǎn)，已愈來(lái)愈引起人們的重視，成為一個(gè)重要的研究發(fā)展方向。

甾醇類(lèi)化合物，尤其是植物中的甾醇類(lèi)化合物，主要有谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇、以及甾醇糖苷、甾醇酯和?；薮继擒盏取：芏嘀参镏卸己戌薮碱?lèi)化合物，在植物中一般以混合物形式3存在。有大量關(guān)于甾醇類(lèi)化合物生物活性的報(bào)道。例如，甾醇糖苷具有 補(bǔ)體活化和抗炎活性；包括P -谷甾醇葡萄糖苷和其它P -谷甾醇糖苷 的甾醇糖苷混合物具有免疫調(diào)節(jié)作用；體內(nèi)試驗(yàn)表明，甾醇類(lèi)化合物 對(duì)Hashimoto氏甲狀腺炎、遺傳性過(guò)敏癥eczema、牛皮癬、哮喘和腫 瘤都有作用。甾醇可降低膽固醇，還可以用于治療抑郁癥(見(jiàn)中國(guó)專(zhuān) 利申請(qǐng)200510111265，公開(kāi)號(hào)CN1977848A)。但甾醇類(lèi)化合物及總 甾醇提取物的鎮(zhèn)痛作用未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物的醫(yī)藥新用途，即 甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用，以獲得療效 好、副作用小、安全可靠、能長(zhǎng)期服用的鎮(zhèn)痛藥物。

以天然植物或中草藥為原料，可以獲得甾醇類(lèi)化合物或總甾醇提 取物。可用的天然植物或中藥包括百合、白芍、大棗、大豆(或大豆 油脫臭餾出物)、牛膝、油菜籽(或菜籽油脫臭餾出物)、小麥(或小 麥麩)等。

采用的工藝包括溶劑提取法、溶劑萃取法、樹(shù)脂吸附法或二氧化 碳超臨界萃取等方法中的一種或多種；并可結(jié)合濃縮干燥、減壓干燥 或冷凍干燥等常用干燥方法，利用包括吸附樹(shù)脂柱層析、真空液相柱 層析、硅膠柱層析、Sephadex凝膠柱層析、中低壓柱層析以及高壓液 相(HPLC)柱層析，和沉淀、結(jié)晶等方法進(jìn)行純化和精制。

在采用溶劑提取法中，所用溶劑可選用水、甲醇、乙醇、丙醇、 丁醇、戊醇、丙酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚或 石油醚等有機(jī)溶劑或兩種或多種互溶的混合溶劑，在室溫下浸漬提取 或用超聲提取或加熱狀態(tài)下的回流提取，提取次數(shù)可為一次，也可為多次。

在采用溶劑萃取法中，可將上述得到的提取物懸浮于水中用合適 的溶劑丁醇、戊醇、乙酸乙酯、甲酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚或 石油醚等直接進(jìn)行萃取，萃取次數(shù)可為一次，也可為多次。

上述的樹(shù)脂法為大孔吸附樹(shù)脂法，水、醇或含水醇提取物可用大 孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行處理，棄去水洗脫部分，全部或部分收集醇洗脫部分 即得。

所采用的二氧化碳超臨界萃取法可根據(jù)情況加入適當(dāng)?shù)膴A帶劑， 如環(huán)己烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇或乙醇等。 本發(fā)明所述甾醇類(lèi)化合物為甾醇。

所述甾醇類(lèi)化合物為谷甾醇(Sitosterol)、豆甾醇(Stigmasterol)、 菜油甾醇(Campesterol )菜籽甾醇(brassicasterol )、膽甾醇

(cholesterol)、菠菜甾醇(spinasterol)、巖藻甾醇(flicosterol)、羊 毛甾醇(lanosterol)、燕麥甾醇(avenasterol)、禾本甾醇(gramisterol)、 多孔甾醇(poriferasterol)、菌甾醇(flingisterol)、扶桑甾醇(rosasterol)、 莧菜甾醇(amasterol)、糞甾醇(epicoprosterol )、刺松藻甾醇

(codisterol)、鈍葉甾醇(obtusifoliol)、蜆甾醇(corbisterol)、粉茍 苣甾醇(chondrilla sterol)、鏈甾醇(desmosterol)、桐甾醇(clerosterol)、 或大戟甾醇(euphorbosterol)等來(lái)源于植物的甾醇。

所述總甾醇提取物是指由天然植物或中藥中通過(guò)上述提取分離 方法得到的含有上述一種或一種以上甾醇類(lèi)化合物的提取物，其中總 甾醇含量在50 90%。

以甾醇類(lèi)化合物或總甾醇提取物作為制備鎮(zhèn)痛藥物的有效成份， 可單獨(dú)應(yīng)用或者合用或與可接受的賦形劑等結(jié)合，按照常規(guī)方法制成 口服劑型或非口服劑型的治療疼痛的藥物。

5試驗(yàn)結(jié)果表明，甾醇類(lèi)化合物或總甾醇提取物都具有明顯的鎮(zhèn)痛 效果，可用于制備鎮(zhèn)痛藥物；且具有明顯療效，副作用小，安全可靠， 能夠長(zhǎng)期服用。

具體實(shí)施例方式

實(shí)施例1 甾醇類(lèi)化合物e-谷甾醇提取分離

取百合科植物百合的干燥鱗莖(葉)片lkg，用80%乙醇回流提 取，濃縮浸提液得乙醇提取物，提取物混懸于水中，用石油醚萃取， 濃縮得石油醚提取物，石油醚提取物上硅膠柱層析，正己烷-乙酸乙

酯梯度洗脫，氯仿甲醇溶液中結(jié)晶，得到e-谷甾醇。

實(shí)施例2大棗中甾醇類(lèi)化合物的提取分離

取千燥大棗用80%乙醇回流提取，濃縮浸提液得乙醇提取物，提 取物混懸于水中，用乙酸乙酯萃取，濃縮得乙酸乙酯提取物；將乙酸 乙酯提取物混懸于5%氫氧化鈉水溶液中，用乙酸乙酯萃取，萃取物 上硅膠柱，正己烷-氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫餾分放置或甲醇重結(jié)晶， 得到P -谷甾醇和P -谷甾醇葡萄糖苷。

實(shí)施例3 白芍中甾醇化合物的提取分離

取白芍飲片，用85%乙醇回流提取，濃縮浸提液得乙醇提取物， 提取物混懸于水中，用石油醚萃取，濃縮得石油醚提取物，石油醚提 取物上硅膠柱層析，正己烷-乙酸乙酯梯度洗脫，氯仿甲醇溶液中結(jié) 晶，得到卜谷甾醇。

實(shí)施例4 百合中總甾醇提取物的提取分離

取百合科植物百合的干燥鱗莖(葉)片，用80%乙醇回流提取， 濃縮浸提液得乙醇提取物，提取物混懸于水中，用氯仿萃取，將氯仿萃取物溶液丙酮中，過(guò)濾，丙酮溶液濃縮干燥后，加甲醇熱熔，放置 一定時(shí)間后，過(guò)濾，收集沉淀物，干燥，得百合總甾醇提取物。

實(shí)施例5 大豆中總甾醇提取物的提取分離

將大豆脫臭餾出物溶于乙酸乙酯，用5%氫氧化鈉萃取，水系， 濃縮干燥后熱熔于甲醇，放置，濾出沉淀既為總甾醇提取物。

實(shí)施例6 牛膝中總甾醇提取物的提取分離

取干燥牛膝，粉碎，用80%乙醇回流提取，提取物混懸于水中， 以乙酸乙酯萃取，萃取液再用5%氫氧化鈉洗滌后，用甲醇熱熔放冷 沉淀，反復(fù)多次的牛膝總甾醇提取物。

實(shí)施例7 菜籽油脫臭餾出物中總甾醇提取物的提取分離

將菜籽油脫臭餾出物溶于一定濃度的熱甲醇或乙醇中，放置，結(jié) 晶。經(jīng)多次重復(fù)結(jié)晶，濾出沉淀既為總甾醇提取物。

實(shí)施例8 甾醇類(lèi)化合物鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)

選用e-谷甾醇和豆甾醇為代表，應(yīng)用于小鼠扭體實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證甾 醇類(lèi)化合物鎮(zhèn)痛作用。

操作方法為取18 22g小鼠30只，隨機(jī)分為三組，分別按體 重100mg/kg、 30mg/kg和10mg/kg 口服給藥，給藥組樣品液0.6m1/ 只；另設(shè)對(duì)照組給等體積生理鹽水。60分鐘后，各鼠腹腔注射0.7% 醋酸0.1ml/10g，觀察并記錄10分鐘內(nèi)產(chǎn)生扭體反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)或每組 扭體反應(yīng)的次數(shù)，與對(duì)照組比較其鎮(zhèn)痛效果。同時(shí)以阿米替林為比較， 結(jié)果見(jiàn)表l。表1. 甾醇類(lèi)化合物小鼠扭體試驗(yàn)結(jié)果

化合物劑量(mg/kg)對(duì)照組扭體次數(shù)實(shí)驗(yàn)組扭體次數(shù)抑制率(％)P值

e-谷甾醇10po36.3±8.132.1±6.911.6>0.05

30po26.4±12.626.4>0.05

訓(xùn)po18.6±4.148.8O.001

豆甾醇10po42.3±8.433.4±8.620.9>0.05

30po27.5±8.135.0<0.01

100po32.7±10.222.7<0.05

阿米替林 (Amitriptyline)15po8.6±4.676.3O.001

以上實(shí)驗(yàn)表明，甾醇類(lèi)化合物如p-谷甾醇和豆甾醇等具有鎮(zhèn)痛 作用。

實(shí)施例9菜籽油脫臭餾出物總甾醇提取物鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)

取實(shí)施例7的菜籽油脫臭餾出物總甾醇提取物，進(jìn)行小鼠醋酸扭 體實(shí)驗(yàn)，操作方法同實(shí)施例8，同時(shí)以阿米替林為比較，結(jié)果如表2。

表2.甾醇提取物小鼠扭體試驗(yàn)結(jié)果

劑量(mg/kg)對(duì)照組扭體次數(shù)實(shí)驗(yàn)組扭體次數(shù)抑制率 (%)P值

菜籽油脫臭餾 出物總甾醇提 取物10 po39.0±8.529.6±5.524.0<0.05

30 po22.7±9.541.8<0.01

圃po21.3±5.945.5<0.01

300 po22.5±2.642.3<0.01

阿米替林 (Amitriptyline)15 po10.7±7.372.6<0.01

8

權(quán)利要求

1、甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。

2、 權(quán)利要求1所述的甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物 中的應(yīng)用，其特征在于，所述甾醇類(lèi)化合物為甾醇。

3、 權(quán)利要求1所述的甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物 中的應(yīng)用，其特征在于，所述總甾醇提取物是從百合、白芍、大棗、 大豆、大豆油脫臭餾出物、牛膝、油菜籽、菜籽油脫臭餾出物、小麥 或小麥麩中提取得到的含有一種或多種甾醇類(lèi)化合物的提取物，其中 總甾醇含量為50-90%。

4、 權(quán)利要求2所述的甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物 中的應(yīng)用，其特征在于，所述甾醇為谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜 籽甾醇、膽甾醇、菠菜甾醇、巖藻甾醇、羊毛甾醇、燕麥甾醇、禾本 甾醇、多孔甾醇、菌甾醇、扶桑甾醇、莧菜甾醇、糞甾醇、刺松藻甾 醇、鈍葉甾醇、蜆甾醇、粉苞苣甾醇、鏈甾醇、桐甾醇或大戟甾醇。

5、 權(quán)利要求2所述的甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物 中的應(yīng)用，其特征在于，所述甾醇為谷甾醇或豆甾醇。

6、 權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在 制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物以一種或多種甾醇類(lèi) 化合物、或總甾醇提取物作為活性成分，單獨(dú)應(yīng)用，或者加上藥學(xué)上 可接受的賦形劑制成的口服或非口服制劑。

全文摘要

本發(fā)明公開(kāi)了甾醇類(lèi)化合物及總甾醇提取物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用?？傜薮继崛∥餅閺闹参锘蛑胁菟幹刑崛〉暮环N或多種甾醇類(lèi)化合物的提取物，總甾醇含量50-90％；甾醇類(lèi)化合物為甾醇，如谷甾醇和豆甾醇等。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明，這些物質(zhì)都具有鎮(zhèn)痛作用，可以用于制備鎮(zhèn)痛藥物。