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一種制備治療褥瘡的中藥制劑的方法_2

文檔序號(hào)：9676171

導(dǎo)航： X技術(shù)> 最新專利>醫(yī)藥醫(yī)療技術(shù)的改進(jìn);醫(yī)療器械制造及應(yīng)用技術(shù)>一種制備治療褥瘡的中藥制劑的方法

[0034]沒(méi)藥:橄欖科沒(méi)藥屬植物沒(méi)藥樹(shù)及同屬他種植物的樹(shù)干皮部滲出的油膠樹(shù)脂。味 苦，性平;入肝經(jīng);散瘀止痛，外用消腫生肌。

[0035]冰片:分機(jī)制冰片與艾片兩類。機(jī)制冰片以松節(jié)油、樟腦等為原料經(jīng)化學(xué)方法合成 的龍腦;艾片為菊科艾納香屬植物大風(fēng)艾的鮮葉經(jīng)蒸汽蒸餾、冷卻所得的結(jié)晶，又稱"艾粉" 或"結(jié)片"。味辛、苦，性微寒;歸心、脾、肺經(jīng);開(kāi)窮醒神，清熱止痛。

[0036]本發(fā)明中藥制劑的組方的方解： 該中藥組方是以地龍、白糖、生地、五倍子為君藥，清熱通絡(luò)、生津潤(rùn)燥、清熱涼血、收濕 斂瘡；以當(dāng)歸、沒(méi)藥、血竭、白花蛇舌草為臣藥，調(diào)經(jīng)止痛、消腫生肌、祛瘀定痛、活血解毒；以 姜黃、白芷、乳香為佐藥，破血行氣、消腫排膿、定痛追毒；以川黃連、冰片為使藥，瀉火解毒、 清熱止痛;君臣佐使諸藥配合，相互協(xié)調(diào)，互為陰陽(yáng)，共同達(dá)到清熱通絡(luò)、生津潤(rùn)燥、清熱涼 血、收濕斂瘡、消腫生肌、祛瘀定痛、破血行氣、消腫排膿、定痛追毒等功效，對(duì)褥瘡的治療表 現(xiàn)出了優(yōu)異的療效。

[0037] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明中藥制劑在治療褥瘡方面具有見(jiàn)效快、療效好、不復(fù)發(fā)等 顯著的技術(shù)優(yōu)勢(shì);并且該中藥制劑藥效穩(wěn)定，制造成本低，社會(huì)效益巨大。

[0038] 因此，本發(fā)明還要求保護(hù)上述中藥制劑在制備治療褥瘡的藥物中的應(yīng)用。

【具體實(shí)施方式】

[0039] 發(fā)明人進(jìn)行了一系列的實(shí)踐生產(chǎn)、安全性和有效性試驗(yàn)，用以進(jìn)一步證明本發(fā)明 的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。

[0040] 實(shí)施例1 發(fā)明人以幾組有代表性的組方配比和較佳的工藝參數(shù)生產(chǎn)軟膏劑，各組的配比如表1 所示。

[0041 ] 表1各組原料配比表

(1) 、按表1所示配比分別稱取地龍、白糖、當(dāng)歸、生地、白花蛇舌草、川黃連、姜黃、血竭、 五倍子、乳香、白芷、沒(méi)藥、冰片等各味原料； (2) 、將地龍、白糖、冰片分別粉碎，地龍和白糖一起研磨，冰片單獨(dú)研磨，過(guò)70目篩，混 合得細(xì)粉，備用； (3) 、將乳香、沒(méi)藥分別粉碎，炒制磨細(xì)，過(guò)70目篩，混合得細(xì)粉，備用； (4)、將當(dāng)歸、生地、白花蛇舌草、川黃連、姜黃、血竭、五倍子、白芷分別粉碎混合，加入 初始藥材12倍重量的純化水，浸泡14小時(shí)，回流煎煮3小時(shí)，過(guò)濾，再加入初始重量9倍重量 的純化水，回流煎煮2小時(shí)，過(guò)濾并保留濾渣，合并濾液，濃縮至55°C相對(duì)密度為1.18-1.23 的濃縮液備用； (5 )、將步驟(4 )的濾渣加 IO倍重量的濃度75%的乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)，過(guò)濾， 合并濾液，減壓蒸餾除去乙醇，并濃縮至55°C相對(duì)密度為1.18-1.23的濃縮液備用； (6) 、將步驟(4)和(5)所得的濃縮液合并，加入步驟(2)和步驟(3)所得細(xì)粉，混合均勻， 繼續(xù)濃縮至55°C相對(duì)密度為1.45-1.50的中藥稠膏，備用； (7) 、將步驟(6)所得中藥稠膏添加適當(dāng)?shù)妮o料，利用現(xiàn)代通用的中藥制劑技術(shù)，制成軟 膏劑，規(guī)格為〇. 18g生藥/g軟膏劑。

[0042] 實(shí)施例2 本發(fā)明中藥制劑的皮膚刺激性試驗(yàn) 1、試驗(yàn)藥物:本發(fā)明實(shí)施例1所生產(chǎn)的編號(hào)為A-E的軟膏劑，規(guī)格為:0.18g生藥/g軟膏 劑。

[0043] 2、實(shí)驗(yàn)方法： 取健康豚鼠60只，隨機(jī)分成6組，每組10只，將豚鼠背部脊柱兩側(cè)將脫毛劑均勻涂上，使 去毛范圍約20平方厘米。洗凈脫毛劑歸籠觀察24小時(shí)，5組豚鼠分別涂本發(fā)明中藥軟膏2g、 4g和8g，分別含生藥0.36g、0.72g和1.44g，對(duì)照組涂溶媒0.8ml每日二次，連續(xù)一周，實(shí)驗(yàn) 結(jié)束后，將豚鼠處死，心、肝、腎及脫毛皮膚做病理檢驗(yàn)。

[0044] 3、結(jié)果 上述5組用藥豚鼠軀干脫毛區(qū)，未見(jiàn)局部皮膚有水腫、充血、紅斑、出血點(diǎn)及潰瘍。用藥 組豚鼠毛發(fā)色澤、攝食、四肢活動(dòng)等對(duì)照組無(wú)明顯差異，病理組織學(xué)檢查，給藥組心、肝、腎 及脫毛皮與對(duì)照字比較也無(wú)明顯差異。結(jié)果提示，本發(fā)明中藥制劑無(wú)局部刺激作用，也未見(jiàn) 全身毒性及透皮吸收毒性表現(xiàn)。表明本發(fā)明中藥外用制劑使用安全。

[0045] 實(shí)施例3 本發(fā)明中藥制劑的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn) (一）、試驗(yàn)準(zhǔn)備 1、試驗(yàn)動(dòng)物：普通短毛豚鼠，雌雄各半，體重391 ± 24g; ICR小鼠，雌雄各半，體重24 土 3g;購(gòu)于上北京華阜康生物科技股份有限公司。

[0046] 2、試驗(yàn)藥物： 對(duì)照藥物:橡皮生肌膏，國(guó)藥準(zhǔn)字Z12020345，包裝規(guī)格30g/盒，天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅藥業(yè) 有限公司。阿司匹林腸溶緩釋片，國(guó)藥準(zhǔn)字H20030396,山東新華制藥股份有限公司。

[0047]試驗(yàn)藥:本發(fā)明實(shí)施例1所生產(chǎn)的編號(hào)為D和E的軟膏劑，規(guī)格為0.18g生藥/g軟膏 劑。

[0048](二）、對(duì)0.6%HAC致小鼠疼痛反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用： 取雄性健康小鼠80只，隨機(jī)分為8組，用本發(fā)明實(shí)施例1所制得編號(hào)為D和E的中藥有效 成分稠膏，調(diào)制成低、中、高劑量組（I .8g/kg、3.6 g/kg、7.2 g/kg，分別為臨床用量的5倍、 10倍、20倍），橡皮生肌膏組和空白對(duì)照組，橡皮生肌膏組劑量為3.6g生藥/kg/d，空白對(duì)照 組給等體積的水灌胃給藥，5個(gè)組均按0.25ml/10g體重的體積灌胃給藥，連續(xù)3天，分別測(cè)定 末次藥后1小時(shí)腹腔注射0.6%HAC，O. lml/lOg鼠重，記錄出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期和15分鐘內(nèi) 的扭體次數(shù)，按公式計(jì)算疼痛抑制率(％)，結(jié)果以? 土 SD表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用組間t檢 驗(yàn)，結(jié)果如表2所示。

[0049] 抑制率(％)=(空白組扭動(dòng)次數(shù)-給藥組扭動(dòng)次數(shù))/空白組扭動(dòng)次數(shù)X 100% 表2本發(fā)明中藥有效成分稠膏對(duì)0.6%HAC致小鼠疼痛反應(yīng)的作用0-±SD，n=10)

注：與空白組比較沖<0.05，*樸<0.01，林沖<0.001;與橡皮生肌膏組相比較~< 0.05產(chǎn)卩<0.01〇

[0050] 由表2結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明中藥有效成分稠膏高、中、低劑量均能明顯抑制小鼠的扭 體潛伏期。與空白對(duì)照組比較有不同程度的顯著性差異;本發(fā)明中藥有效成分稠膏高、中、 低劑量均能顯著減少小鼠的扭體次數(shù)，與空白組比較有不同程度的顯著性差異，提示本發(fā) 明中藥有效成分稠膏有較好的鎮(zhèn)痛作用。從疼痛抑制率結(jié)果看:本發(fā)明中藥制三個(gè)劑量組 均顯著優(yōu)于橡皮生肌膏組。

[0051 ](三）、本發(fā)明中藥制劑的抗炎作用 1、A⑶模型的建立A⑶模型的建立及給藥方法： 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)前一天腹部去毛，面積3 X 3cm。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日和第二日于去毛部涂0.5 % DNFB 25ul致敏，每天一次，第6日于小鼠左耳背涂0.2%DNFB 20ul誘發(fā)皮炎，右耳背涂基質(zhì) 20ul對(duì)照。誘發(fā)后6小時(shí)給藥，涂于左耳背部，稍按摩，每日2次，右耳以同樣方法涂等量基質(zhì) 對(duì)照。

[0052]將150只小鼠隨機(jī)分為5組，每組30只。分別為本發(fā)明D軟膏組、E軟膏組、橡皮生肌 膏組、模型組和空白對(duì)照組(生理鹽水組）。

[0053] 2、觀察指標(biāo)和方法： 各組小鼠于最后一次激發(fā)后6小時(shí)將每組小鼠又隨機(jī)分為24h、48h、72h三個(gè)時(shí)相點(diǎn)，每 個(gè)時(shí)相點(diǎn)每組隨機(jī)取10只。分別在激發(fā)用藥后24h、48h、72h斷髓處死。

[0054] (1)、耳腫脹度:游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠雙耳中部的厚度，計(jì)算誘發(fā)后左右耳厚度差即 小鼠耳腫脹度。

[0055] (2)、HE染色觀察:取鼠耳組織常規(guī)石蠟切片，HE染色。用光鏡觀察HE染色切片中有 無(wú)病理變化和各組織間有無(wú)差異，并觀察染色切片中細(xì)胞類型的變化及差異。

[0056] (3)、小鼠左耳皮損處組織采用免疫組化的方法，觀察IL-2，IFN-r的表達(dá):切片常 規(guī)脫蠟包埋、脫水，3%H2O2溶液消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，熱修復(fù)抗原，滴加5 % BSA封閉 液，然后依次加入一抗，生物素化二抗，SABC后，DAB顯色，蘇木素輕度復(fù)染，脫水，透明，封 片，顯微鏡觀察。

[0057] (4)、檢測(cè)血清IL-2，IFN-r濃度:各時(shí)相小鼠處死時(shí)采用眼球摘除法取血約1.5ml， 靜置15min后，3000r/min離心20min，分離血清，置于-20°C冰箱中待測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附 法(ELISA)測(cè)定血清中細(xì)胞因子IL-2, IFN-γ表達(dá)水平。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明操作，用酶標(biāo)儀 測(cè)定各標(biāo)本450nm處各孔OD值。以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，用"C

urveExertl. 3" 軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并求出各樣品血清中IL-2，IFN-y的含量。

[0058] 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，檢測(cè)數(shù)據(jù)用結(jié)果以Γ 土 SD表示，兩組間比較采用LSD法，設(shè)置檢驗(yàn)水準(zhǔn)α = 〇. 05，P<0.05為差異有顯著性。

[0059] 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (1)、各處理因素對(duì)鼠耳厚度的影響如表3所示： 表3各組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)耳腫脹度(左耳一右耳，單位:um)的比較0- 土SD，n=10)

注：與空白組相比#Ρ<〇.〇1;與模型組相比較撲<0.05，*撲<0.01;與橡皮生肌膏組相 比較 λΡ<0·05〇

[0060] 由表3可見(jiàn)，耳腫脹度差值不同時(shí)相模型組與空白組相比Ρ<0.05，24小時(shí)、48小 時(shí)、72小時(shí)后耳腫脹度，本品D和E軟膏組與模型組相比Ρ<0.01;且各時(shí)間段本品D軟膏組、E 軟膏組與橡皮生肌膏組相比Ρ<〇. 05。本發(fā)明中藥軟膏顯著優(yōu)于橡皮生肌膏，特別是D軟膏 組效果最好。

[0061] (2)、各處理因素對(duì)皮膚組織病理學(xué)影響分析： 不同時(shí)間段空白組小鼠組織病理無(wú)明顯變化，模型組HE染色切片可見(jiàn):表皮顯示細(xì)胞 間及細(xì)胞內(nèi)水腫，表皮細(xì)胞增生，真皮結(jié)締組織水腫，能發(fā)現(xiàn)較多的單一核細(xì)胞及少數(shù)多形 核細(xì)胞的浸潤(rùn)。血管擴(kuò)張充血，周圍可見(jiàn)輕度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。不同時(shí)間段各處理組小鼠血清 中IL-2，IFN-r含量的影響如表4、表5所示： 表4不同藥物不同時(shí)相小鼠血清中IL-2濃度(pg/ml)的比較(? ±SD，n=10)

注:與模型組相比較*p<〇. 05，#P<0.0 l;與橡皮生肌膏組相比較&?<0.05。

[0062] 表5不同藥物不同時(shí)相小鼠血清中IFN-γ濃度(pg/ml)的比較（? 土SD，n=10)

注:與模型組相比較*P<〇. 05，#P<0.01;與橡皮生肌膏組相比較&?<0.05。

[0063] 從表4、5可見(jiàn)，本品D軟膏組、E軟膏組、橡皮生肌膏組對(duì)DNFB誘導(dǎo)的A⑶小鼠血清中 IL-2、IFN-γ水平均有抑制作用，48小時(shí)、72小時(shí)橡皮生肌膏組與模型組相比有顯著性差異 (Ρ<0.05);各時(shí)間段本品D軟膏組、E軟膏組與模型組相比均有極顯著性差異(Ρ<0.01)，并 且與橡皮生肌膏組相比有顯著性差異(Ρ<〇.05)。本發(fā)明中藥軟膏顯著優(yōu)于橡皮生肌膏，特 別是D軟膏組效果最好。

[0064] 5、結(jié)論 本發(fā)明實(shí)施例1所生產(chǎn)的編號(hào)為D和E的軟膏劑可明顯減輕小鼠耳的腫脹度，對(duì)不同時(shí) 間段小鼠血清中細(xì)胞因子均有下調(diào)作用，說(shuō)明此藥可調(diào)節(jié)T細(xì)胞的分化且效果顯著;本發(fā)明 軟膏在藥效上顯著優(yōu)于橡皮生肌膏，特別是D軟膏組效果最好。

[0065](四）、對(duì)磷酸組織胺致癢閾值的影響： 豚鼠40只，隨機(jī)分為4組，即為空白對(duì)照組、本發(fā)明藥物D組、藥物E組和橡皮生肌膏組。 實(shí)驗(yàn)前IcU各組豚鼠右后足背脫毛并涂藥1次。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日用粗砂紙擦傷右后足背脫毛處表皮 Icm2，再涂藥1次，20min后，于擦傷脫毛區(qū)滴0.01 %磷酸組織胺0.05ml/鼠，此后，每隔3min 依次以0.02,0.03,0.04,0.05%……遞增的濃度滴至豚鼠回頭舔右后足時(shí)的組織胺總量為 致癢閾值，結(jié)果見(jiàn)表6。

[0066] 表6對(duì)磷酸組織胺所致豚鼠癢閾值的影響土SD，n=10)

注：與生理鹽水對(duì)照組比較，*P<〇.05，#P<0.Ol ;與橡皮生肌膏組比較，ΛΡ<0.Ol。

[0067] 由表6的結(jié)果可知，與生理鹽水組比較，無(wú)論是本品D軟膏組，E軟膏組，還是橡皮生 肌膏組，均對(duì)磷酸組織胺引發(fā)的豚鼠致癢閾值達(dá)到顯著的差異性效果，表明三者均有良好 的止癢作用；與橡皮生肌膏組比較，本發(fā)明藥物組明顯具有提高豚鼠致癢閾值且亦達(dá)到了 極顯著的差異性效果(P<〇.01)，提示本發(fā)明藥物具有良好的止癢能力，這對(duì)于褥瘡是非常 顯效的治療作用，特別是D軟膏組效果最好。

[0068] 實(shí)施例4 本次臨床試驗(yàn)共征集褥瘡患者158例，年齡24-63歲，其中男64例，女94例。所有患者隨 機(jī)均分成兩組，治療1組和治療2組;治療1組使用本發(fā)明實(shí)施例1所生產(chǎn)的編號(hào)為D的軟膏 劑，每日2次，以覆蓋患處為準(zhǔn)，間隔8小時(shí)以上;治療2組使用本發(fā)明實(shí)施例1所生產(chǎn)的編號(hào) 為E的軟膏劑，每日2次，以覆蓋患處為準(zhǔn)，間隔8小時(shí)以上。7天為一個(gè)療程，連續(xù)治療3個(gè)療 程。治療全部結(jié)束以后，統(tǒng)計(jì)治療結(jié)果如下： 治療1組:治愈68例，占86.1%;有效10例，占12.7%;無(wú)效1例，占1.3%;總有效率為98.7%; 治療2組:治愈63例，占79.8%;有效14例，占17.7%;無(wú)效2例，占2.5%;總有效率為97.5%。 [0069]治療結(jié)果顯示，本發(fā)明制備的中藥制劑對(duì)褥瘡有十分顯著的療效，兩組的總有效 率都在97.5%以上，且治療1組的治愈率高達(dá)86.1%。因此，本發(fā)明制備的中藥制劑在其領(lǐng)域 內(nèi)取得了突破性的技術(shù)進(jìn)步和巨大的科研成果，其創(chuàng)造性顯而易見(jiàn)。

【主權(quán)項(xiàng)】

1. 一種制備治療褥瘡的中藥制劑的方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟： (1) 、稱取地龍、白糖、當(dāng)歸、生地、白花蛇舌草、川黃連、姜黃、血竭、五倍子、乳香、白芷、 沒(méi)藥、冰片各味原料； (2) 、將地龍、白糖、冰片分別粉碎，地龍和白糖一起研磨，冰片單獨(dú)研磨，過(guò)60-100目 篩，混合得細(xì)粉，備用； (3) 、將乳香、沒(méi)藥分別粉碎，炒制磨細(xì)，過(guò)60-100目篩，混合得細(xì)粉，備用； (4) 、將當(dāng)歸、生地、白花蛇舌草、川黃連、姜黃、血竭、五倍子、白芷分別粉碎混合，加入 初始藥材4-15倍重量的純化水，浸泡4-24小時(shí)，回流煎煮1-6小時(shí)，過(guò)濾，再加入初始重量3-12倍重量的純化水，回流煎煮1 -5小時(shí)，過(guò)濾并保留濾渣，合并濾液，濃縮至55°C相對(duì)密度為 1.18-1.23的濃縮液備用； (5) 、將步驟(4)的濾渣加5-13倍重量的濃度60-85%的乙醇，回流提取2次，每次1-6小 時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓蒸餾除去乙醇，并濃縮至55°C相對(duì)密度為1.18-1.23的濃縮液備 用； (6) 、將步驟(4)和(5)所得的濃縮液合并，加入步驟(2)和步驟(3)所得細(xì)粉，混合均勻， 繼續(xù)濃縮至55°C相對(duì)密度為1.45-1.50的中藥稠膏，備用； (7) 、將步驟(6)所得中藥稠膏添加適當(dāng)?shù)妮o料，利用現(xiàn)代通用的中藥制劑技術(shù)，制成臨 床需要的中藥成品制劑。2. 如權(quán)利要求1所述的制備治療褥瘡的中藥制劑的方法，其特征在于，所述各味原料的 重量份為:地龍12-49份、白糖12-38份、當(dāng)歸8-28份、生地7-34份、白花蛇舌草5-19份、川黃 連6-21份、姜黃7-24份、血竭8-25份、五倍子11-34份、乳香3-10份、白芷5-21份、沒(méi)藥7-27 份、冰片4_12份。3. 如權(quán)利要求2所述的制備治療褥瘡的中藥制劑的方法，其特征在于，所述各味原料的 重量份為:地龍30份、白糖25份、當(dāng)歸18份、生地20份、白花蛇舌草12份、川黃連13份、姜黃15 份、血竭16份、五倍子22份、乳香6份、白芷13份、沒(méi)藥17份、冰片8份。

【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種制備治療褥瘡的中藥制劑的方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。該制備方法是將地龍、白糖、冰片制成細(xì)粉，將乳香、沒(méi)藥制成細(xì)粉；將當(dāng)歸、生地、白花蛇舌草、川黃連、姜黃、血竭、五倍子、白芷提取濃縮的濃縮液；將細(xì)粉與濃縮液混合，添加適當(dāng)?shù)妮o料，利用現(xiàn)代通用的中藥制劑技術(shù)，制成臨床需要的中藥成品制劑。該制備方法制得的中藥制劑在治療褥瘡方面具有見(jiàn)效快、療效好、不復(fù)發(fā)等顯著的技術(shù)優(yōu)勢(shì)；并且該中藥制劑藥效穩(wěn)定，制造成本低，社會(huì)效益巨大。