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今天是第1059期日報(bào)。 Lancet子刊：菌群如何影響癌癥及癌癥治療（綜述）The Lancet Oncology[IF:36.418] ① 特定微生物、菌群代謝產(chǎn)物通過多種機(jī)制，引發(fā)或調(diào)控癌癥的發(fā)生；② 腸道菌群對宿主免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)會(huì)影響抗癌免疫，菌群紊亂可能會(huì)增加癌癥風(fēng)險(xiǎn)；③ 共生菌群影響免疫檢查點(diǎn)阻斷劑、干細(xì)胞移植、放/化療和細(xì)胞療法的療效和毒性；④ 菌群可作為癌癥治療的生物標(biāo)記物，但需考慮多種生物、環(huán)境、社會(huì)影響因素；⑤ 糞菌移植、益生菌、膳食干預(yù)與益生元等手段有望用于提高抗癌療效；⑥ 進(jìn)一步研究需要將實(shí)驗(yàn)、檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化，并建立更可靠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/p> Modulating the microbiome to improve therapeutic response in cancer 【主編評(píng)語】共生菌群與宿主的密切互作，為癌癥治療提供了新的切入點(diǎn)。近期在《The Lancet Oncology》發(fā)表的綜述回顧了大量基礎(chǔ)和臨床研究，闡釋了共生菌群在癌癥及抗癌治療中的作用，影響菌群的因素以及各種菌群干預(yù)手段在癌癥治療中的潛在作用，對于了解菌群與癌癥的關(guān)聯(lián)、提高抗癌治療療效具有參考價(jià)值。（@小腸君） Science：高果糖玉米糖漿具有促癌風(fēng)險(xiǎn)Science[IF:41.058] ① 在飲水中添加25%的高果糖玉米糖漿（HFCS），腸道腫瘤易感的APC突變小鼠每天攝入這種飲水后，腫瘤體積和惡性程度顯著增加；② APC突變小鼠的腫瘤惡化情況與肥胖及代謝疾病無關(guān)；③ HFCS增加了腸腔和血清中果糖和葡萄糖含量，兩種糖類均被腫瘤組織轉(zhuǎn)運(yùn)并利用；④ 腫瘤組織中，果糖被轉(zhuǎn)化為果糖-1-磷酸, 激活糖酵解、增加脂肪酸生成并促進(jìn)腫瘤生長；⑤ 飲食中的葡萄糖和果糖可能協(xié)同促進(jìn)腫瘤發(fā)生進(jìn)程。 High-fructose corn syrup enhances intestinal tumor growth in mice 【主編評(píng)語】高果糖玉米糖漿常被用來作為飲料增甜劑。《Science》近期發(fā)表研究，在腸道腫瘤易感小鼠模型中，發(fā)現(xiàn)飲水中增加高果糖玉米糖漿具有促進(jìn)腸道腫瘤生長的效果，顯示葡萄糖和果糖在促進(jìn)腸道腫瘤生成過程中存在協(xié)同作用。該結(jié)果對評(píng)估高果糖玉米糖漿及相關(guān)飲料的促癌風(fēng)險(xiǎn)、指導(dǎo)科學(xué)飲食具有重要參考價(jià)值。（@小腸君） JAMA：多吃雞蛋可能增加健康風(fēng)險(xiǎn)JAMA[IF:44.405] ① 在美國納入平均年齡為51.6歲的29615名成年參與者，其中44.9%為男性，31.1%為黑色人種；② 在中位數(shù)為17.5年的跟蹤時(shí)間內(nèi)，共發(fā)生5400例心血管疾?。–VD）和 6132 例全因性死亡事件；③ 每天每額外攝入300mg膳食膽固醇或者半個(gè)雞蛋 ，與罹患CVD或發(fā)生死亡事件的風(fēng)險(xiǎn)升高具有顯著相關(guān)性；④ 膽固醇攝入量的增加是額外攝入雞蛋帶來的主要風(fēng)險(xiǎn)因素；⑤ 美國人群中高膳食膽固醇或雞蛋攝入量會(huì)提高罹患CVD或死亡的風(fēng)險(xiǎn)，攝入量的多少影響風(fēng)險(xiǎn)大小。 Associations of Dietary Cholesterol or Egg Consumption With Incident Cardiovascular Disease and Mortality 【主編評(píng)語】2015年美國膳食指南調(diào)整中，放開了對每日膽固醇和雞蛋攝入量的限制。然而《JAMA》近期發(fā)表的研究顯示，美國人群中更多的膳食膽固醇或雞蛋攝入會(huì)提高心血管疾病或死亡的風(fēng)險(xiǎn)，攝入量的多少影響風(fēng)險(xiǎn)大小。該結(jié)果對制定或更新膳食指導(dǎo)具有重要參考作用。（@小腸君） Nature Reviews：色氨酸代謝——疾病治療新靶點(diǎn)？（綜述）Nature Reviews Drug Discovery[IF:50.167] ① L-色氨酸（Trp）通過犬尿氨酸代謝途徑（KP）參與免疫、神經(jīng)元功能和腸內(nèi)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié);② 靶向治療KP失衡需特別關(guān)注吲哚胺-2,3-雙加氧酶1（IDO1）、IDO2和色氨酸-2,3-雙加氧酶以及犬尿氨酸單加氧酶，及不同的抑制結(jié)合機(jī)制；③ Trp代謝涉及腸道、菌群、免疫細(xì)胞、肝臟和大腦，代謝產(chǎn)物犬尿喹啉酸可調(diào)節(jié)認(rèn)知、情緒、行為，并有神經(jīng)保護(hù)作用，喹啉酸會(huì)促進(jìn)神經(jīng)退行性變；④ Trp代謝生成的小分子是激活不同免疫細(xì)胞中芳香烴受體的分子來源。 Tryptophan metabolism as a common therapeutic target in cancer, neurodegeneration and beyond 【主編評(píng)語】《Nature Reviews Drug Discovery》近期發(fā)表綜述，總結(jié)了色氨酸代謝對免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)的影響及作用機(jī)制，強(qiáng)調(diào)了該過程在開發(fā)針對多種疾病的新型藥物中的巨大潛力，值得參考。（@小腸君） Nature Reviews：芳香烴受體如何調(diào)節(jié)免疫與神經(jīng)系統(tǒng)（綜述）Nature Reviews Immunology[IF:41.982] ① 芳香烴受體（AHR）與熱休克蛋白、AHR互作蛋白、共伴侶p23和蛋白激酶SRC組成伴侶復(fù)合物，維持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定；② AHR與激動(dòng)劑結(jié)合活化后，在細(xì)胞核與調(diào)控元件及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合來調(diào)控基因表達(dá)；③ 活化AHR通過調(diào)控樹突細(xì)胞和T細(xì)胞，影響宿主的固有和適應(yīng)性免疫；④ AHR可調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞生長、通過上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和先天淋巴細(xì)胞極化發(fā)揮抗炎和抑制病原菌的作用；⑤ AHR被可穿過血腦屏障的激動(dòng)劑激活，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，可作為治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的新靶點(diǎn)。 The aryl hydrocarbon receptor: an environmental sensor integrating immune responses in health and disease 【主編評(píng)語】芳香烴受體可與來自環(huán)境、膳食、微生物代謝的多種信號(hào)分子結(jié)合，參與靶向調(diào)控基因表達(dá)。《Nature Reviews Immunology》近期發(fā)表綜述，總結(jié)了目前芳香烴受體調(diào)節(jié)免疫、神經(jīng)功能的研究進(jìn)展，對于研究體外信號(hào)因子對免疫、神經(jīng)系統(tǒng)的影響機(jī)制具有重要參考價(jià)值。（@小腸君） Nature：挖掘細(xì)菌基因多態(tài)性與宿主健康Nature[IF:41.577] ① 借用基因拷貝數(shù)多態(tài)概念，從887份人腸道菌群基因組中鑒別出了7479個(gè)結(jié)構(gòu)變異（SV）；② SV在人腸道菌群中普遍存在，長度、所含基因、在不同宿主內(nèi)的豐度各異；③ SV與微生物適應(yīng)性相關(guān)，與CRISPR、產(chǎn)抗生素相關(guān)的SV數(shù)量多，與看家基因相關(guān)的SV數(shù)量少；④ 發(fā)現(xiàn)了124個(gè)與人類血壓、血糖、膽固醇、腰圍、體重和年齡相關(guān)的SV，其中40個(gè)SV與健康指標(biāo)的相關(guān)性在人群隊(duì)列中得到證實(shí)；⑤ 通過分析SV上的基因，可推測共生菌群與宿主互作的機(jī)制。 Structural variation in the gut microbiome associates with host health 【主編評(píng)語】菌株水平的基因差異可能意味著功能上的顯著變化?！禢ature》近期發(fā)表研究，在人類腸道菌群中發(fā)現(xiàn)了基因拷貝數(shù)多態(tài)現(xiàn)象，同時(shí)發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)和豐度存在差異的微生物基因簇與人類宿主健康存在關(guān)聯(lián)。該研究提出的概念和研究方法，有助于在基因功能水平闡釋共生菌群與宿主的相互作用，對目前的共生菌群研究有重要參考價(jià)值。（@小腸君） Nature：難培養(yǎng)的腸道細(xì)菌基因組有“話”要說Nature[IF:41.577] ① 從地理分布、表型多樣的人群中收集3810份糞便宏基因組數(shù)據(jù)，組裝出60664個(gè)原核生物基因組草圖；② 這些基因組提供了2058個(gè)菌種水平的新操作分類單位（OTUs），將已知腸道細(xì)菌分類類群增加了50%；③ 個(gè)體水平，新發(fā)現(xiàn)的OTUs對腸道菌群α-多樣性豐富度和菌種豐度的平均貢獻(xiàn)分別為33%和28%，這些OTUs在農(nóng)村人口中較多；④ 臨床大數(shù)據(jù)顯示，許多疾病與新發(fā)現(xiàn)的OTUs相關(guān)，或有助于優(yōu)化疾病預(yù)測模型；⑤ 難培養(yǎng)腸道微生物缺少特定生物合成途徑。 Novel insights from uncultivated genomes of the global human gut microbiome 【主編評(píng)語】腸道中大部分微生物難以被培養(yǎng)?！禢ature》近期發(fā)表研究，從人群糞便宏基因組中組裝出60664個(gè)原核生物基因組草圖，新發(fā)現(xiàn)了2058個(gè)菌種水平的新OTUs，并發(fā)現(xiàn)新OTUs與許多疾病存在相關(guān)性。該結(jié)果大大增加了已知腸道細(xì)菌種類，對于菌群分析相關(guān)各領(lǐng)域都有極大意義。（@小腸君） Science：“看透”調(diào)控T細(xì)胞的分節(jié)絲狀菌與腸上皮細(xì)胞的親密接觸Science[IF:41.058] ① 電子斷層成像技術(shù)顯示，小鼠腸道中，分節(jié)絲狀菌（SFB）可直接“鉤”住腸上皮細(xì)胞（IEC），并在鉤尖處觸發(fā)內(nèi)吞囊泡形成；② 這些囊泡含有能誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的SFB細(xì)胞壁蛋白，經(jīng)內(nèi)體-溶酶體網(wǎng)絡(luò)，在IEC內(nèi)從頂端運(yùn)輸至基底外側(cè)；③ 該內(nèi)吞過程依賴于肌動(dòng)蛋白調(diào)節(jié)因子CDC42，若IEC缺乏CDC42，則SFB誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞和IEC內(nèi)抗原蛋白轉(zhuǎn)移作用受損，使SFB誘導(dǎo)的Th17細(xì)胞減少；④ 這種微生物黏附觸發(fā)的內(nèi)吞作用，可能是SFB獨(dú)有的。 Endocytosis of commensal antigens by intestinal epithelial cells regulates mucosal T cell homeostasis 【主編評(píng)語】腸道菌群在免疫調(diào)控中有重要作用?！禨cience》發(fā)表的一項(xiàng)最新研究，通過電鏡技術(shù)，直觀的“看”到小鼠腸道內(nèi)，分節(jié)絲狀菌（SFB）通過微生物黏附觸發(fā)的內(nèi)吞作用（MATE）與腸上皮細(xì)胞（IEC）發(fā)生互作的形態(tài)，該過程中，能誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的SFB抗原“借道”IEC，經(jīng)細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸轉(zhuǎn)移至IEC底部，進(jìn)而活化Th17。該研究不僅揭示了SFB調(diào)節(jié)Th17的機(jī)制，以及IEC的抗原呈遞作用，同時(shí)還是使用高分辨率電鏡技術(shù)分析微生物-宿主互作機(jī)制的一個(gè)范例?！癝eeing is believing”這句話在生物學(xué)微觀研究中恐怕永不過時(shí)。（@李丹宜） Science：腸上皮內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，調(diào)控IgA免疫反饋Science[IF:41.058] ① 腸道上皮細(xì)胞（IEC）的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)會(huì)引發(fā)多反應(yīng)性IgA反饋，該免疫反饋可以抵御腸道炎癥；② IEC的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激會(huì)引起B(yǎng)1b細(xì)胞激活和擴(kuò)增，該過程不依賴于共生菌群與T細(xì)胞，并伴隨著腸道上皮固有層和腸腔內(nèi)IgA的增加；③ 有細(xì)胞自噬缺陷的健康人腸道上皮會(huì)表現(xiàn)出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，這類人群中表達(dá)IgA的漿細(xì)胞數(shù)量有所增加；④ 發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)時(shí)，IEC將信號(hào)傳遞到腹膜，引發(fā)不依賴于T細(xì)胞的、具有屏障保護(hù)性的IgA免疫反饋。 Epithelial endoplasmic reticulum stress orchestrates a protective IgA response 【主編評(píng)語】IgA免疫反饋的誘發(fā)可不依賴于T細(xì)胞。Science近期發(fā)表研究，發(fā)現(xiàn)腸道上皮細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，可以不經(jīng)過T細(xì)胞信號(hào)通路引發(fā)IgA免疫反饋，保護(hù)腸道上皮、抵御腸道炎癥。該結(jié)果對了解腸道上皮免疫調(diào)控具有重要參考作用。（@小腸君） 腸道菌群究竟如何影響精神疾病（綜述）ANNUAL REVIEW OF CLINICAL PSYCHOLOGY[IF:13.278] ① 菌群-腸-腦軸有雙向作用，涉及機(jī)制包括應(yīng)激反應(yīng)、免疫、短鏈路脂肪酸、神經(jīng)遞質(zhì)的產(chǎn)生、迷走神經(jīng)、血清素、膽汁酸和內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)等；② 情緒障礙、焦慮癥、精神類疾病、神經(jīng)發(fā)育障礙患者的菌群都有特征性，益生菌、益生元治療有一定緩解作用但效果不一致；③ 需進(jìn)一步開展人體研究，包括分析特定患者群體中菌群組成，以及益生菌、益生元、菌群移植和飲食等干預(yù)效果；④ 各實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和方法需要標(biāo)準(zhǔn)化，確保菌群數(shù)據(jù)的一致性和通用性。 Man and the Microbiome: A New Theory of Everything? 【主編評(píng)語】菌群對腸-腦軸具有關(guān)鍵影響。《ANNUAL REVIEW OF CLINICAL PSYCHOLOGY》發(fā)表的綜述全面總結(jié)了菌群-腸-腦軸的作用機(jī)制、涉及的精神類疾病以及菌群干預(yù)手段的效果，并對該領(lǐng)域的研究方向提出了建議，對于系統(tǒng)性了解菌群-腸-腦軸與精神疾病的關(guān)聯(lián)具有重要參考價(jià)值。（@小腸君） 劉星吟等：自閉癥相關(guān)基因突變改變腸道免疫，經(jīng)菌群影響果蠅行為Cell Host and Microbe[IF:17.872] ① 果蠅中，去甲基化酶KDM5水平不足可導(dǎo)致腸道屏障功能損傷，并使果蠅呈現(xiàn)“自閉”樣社會(huì)行為異常，伴隨腸道菌群失調(diào)，植物乳桿菌減少、條件致病菌過度繁殖；② 補(bǔ)充植物乳桿菌或給予抗生素可改變腸道菌群，還可部分改善KDM5缺陷型果蠅的行為、壽命和腸道異常，并降低腸道和腦內(nèi)過高的5-羥色胺水平；③ KDM5以依賴于其去甲基化酶活性的方式，在轉(zhuǎn)錄水平上抑制IMD/Rel先天免疫通路的過度活化，促進(jìn)宿主-菌群穩(wěn)態(tài)，經(jīng)腸腦軸影響果蠅社交行為。 Drosophila Histone Demethylase KDM5 Regulates Social Behavior through Immune Control and Gut Microbiota Maintenance 【主編評(píng)語】KDM5家族蛋白是一種組蛋白去甲基化酶，參與基因的表觀遺傳調(diào)控。此前有研究表明，在智力殘疾和自閉癥患者中，存在KDM5功能喪失型基因突變。南京醫(yī)科大學(xué)劉星吟團(tuán)隊(duì)主導(dǎo)的最新研究，發(fā)現(xiàn)腸道菌群在KDM5突變相關(guān)的社會(huì)行為異常中有重要介導(dǎo)作用。通過使用多種KDM5缺陷型果蠅模型，該研究揭示出，KDM5通過調(diào)控先天免疫通路，影響腸道屏障和菌群組成，經(jīng)腸腦軸改變果蠅社會(huì)行為，并表明靶向腸道菌群的干預(yù)方法可在一定能程度上改善果蠅的社會(huì)行為異常。相關(guān)成果發(fā)表在Cell Host and Microbe上，對于研究宿主-菌群互作和菌群-腸-腦軸等都很有借鑒價(jià)值。（@李丹宜） 解讀腸道菌群對抑郁行為和大腦炎癥的影響Molecular Psychiatry[IF:11.64] ① 壓力暴露構(gòu)建大鼠社交失敗模型，分為短期失敗延遲（壓力易感）和長期失敗延遲（抗壓）組大鼠；② 社交失敗后，易感大鼠腸道菌群α多樣性增加，抗壓組與對照組相似，兩組β多樣性發(fā)生顯著改變，厚壁菌門/擬桿菌門比例和桿菌綱/梭菌綱比例升高；③ 將易感大鼠的糞便移植給普通大鼠，可增加抑郁樣行為，增加腹側(cè)海馬區(qū)小膠質(zhì)密度和IL-1β表達(dá)等促炎現(xiàn)象，但不增加社交過程中的焦慮樣行為；④ 移植抗壓大鼠的糞便不引發(fā)顯著行為或炎癥反應(yīng)變化。 The gut microbiome regulates the increases in depressive-type behaviors and in inflammatory processes in the ventral hippocampus of stress vulnerable rats 【主編評(píng)語】長期壓力與抑郁、焦慮和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的發(fā)生有關(guān)?！禡olecular Psychiatry》近期發(fā)表研究，通過構(gòu)建大鼠行為學(xué)模型，并進(jìn)行腸道菌群移植，發(fā)現(xiàn)壓力易感大鼠的腸道菌群對抑郁行為、大腦海馬區(qū)炎癥都有促進(jìn)作用，表明腸道菌群在調(diào)控抑郁相關(guān)的行為模式和大腦炎癥方面具有重要作用，對研究焦慮、抑郁行為機(jī)制，開發(fā)相應(yīng)治療措施具有參考價(jià)值。（@小腸君） Nature子刊：腸道菌群如何調(diào)節(jié)宿主代謝和能量穩(wěn)態(tài)（綜述）Nature Metabolism[IF:N/A] ① 腸道菌群組成及其代謝/衍生物影響宿主能量穩(wěn)態(tài)；② 短鏈脂肪酸（SCFA）可作為能量來源并參與脂肪生成和糖異生等代謝途徑，還能刺激生成胃腸激素，與ClpB等菌群組分和菌群調(diào)控的神經(jīng)遞質(zhì)一起經(jīng)腸腦軸影響進(jìn)食；③ 膽汁酸、SCFA、內(nèi)源性大麻素等可調(diào)節(jié)產(chǎn)熱和脂肪褐化，冷暴露、抗生素和運(yùn)動(dòng)等因素可經(jīng)菌群影響能量代謝；④ 支鏈氨基酸相關(guān)代謝物、吲哚丙酸等色氨酸衍生物、氧化三甲胺等也參與代謝調(diào)節(jié)；⑤ 基于腸道菌群的療法有望改善代謝健康。 Microbial regulation of organismal energy homeostasis 【主編評(píng)語】腸道菌群對宿主代謝的影響，是菌群研究的一大熱點(diǎn)?！禢ature Metabolism》近期發(fā)表綜述，回顧了近15年來該領(lǐng)域的主要進(jìn)展，介紹了腸道菌群組成及其代謝物和衍生物對宿主代謝穩(wěn)態(tài)的調(diào)控機(jī)制和與代謝疾病的關(guān)聯(lián)，以及多種內(nèi)源和外源因素如何作用于菌群進(jìn)而影響能量平衡。雖然很可能只是揭開了冰山一角，但這些發(fā)現(xiàn)無疑為基于腸道菌群治療代謝疾病的療法，奠定了一定的理論基礎(chǔ)。（@李丹宜） Nature：哺乳動(dòng)物脂代謝的系統(tǒng)性遺傳分析Nature[IF:41.577] ① 在107個(gè)不同小鼠品系的肝臟中檢測到7775種蛋白和311種脂質(zhì)，三酰甘油是品系間的標(biāo)志脂質(zhì)；② 大多數(shù)脂質(zhì)在肝臟和血漿之間無相關(guān)性，但烷基磷脂酰膽堿、單己糖基神經(jīng)酰胺和烯基磷酰二乙醇胺顯著相關(guān)；③ 血液中全肝神經(jīng)酰胺、三酰甘油和二酰甘油是肝臟病理的脂質(zhì)標(biāo)志物；④ 鑒定出3981個(gè)及6765個(gè)SNP，分別影響了272種及252種肝臟及血漿脂質(zhì)；⑤ 脂肪酸代謝酶、蛋白水解相關(guān)蛋白等蛋白參與脂代謝的調(diào)節(jié)，例如蛋白PSMD9調(diào)節(jié)肝臟和血漿脂質(zhì)豐度。 An integrative systems genetic analysis of mammalian lipid metabolism 【主編評(píng)語】《Nature》上發(fā)表的一項(xiàng)最新研究，對107個(gè)不同品系小鼠的肝臟及血液中的脂質(zhì)進(jìn)行了全面系統(tǒng)的檢測分析，鑒定出了一些肝臟疾病的潛在脂質(zhì)標(biāo)志物，以及參與脂代謝的SNP，并鑒定出了一些參與脂代謝調(diào)節(jié)的蛋白。本文結(jié)果對研究脂肪代謝具有重要參考價(jià)值。（@沈志勛） Gut：菌群在人類發(fā)育中的作用（綜述）Gut[IF:17.016] ① 菌群與宿主構(gòu)成共生功能體，共同進(jìn)化；② 妊娠母體菌群的改變可間接影響胎兒，分娩時(shí)母系原始菌群可垂直傳遞給下一代，由母乳獲得的菌群可引導(dǎo)新生兒菌群建立和免疫發(fā)育等；③ 嬰幼兒隨著生長發(fā)育，菌群多樣性增加，免疫成熟；④ 孕期抗生素使用、剖腹產(chǎn)、配方奶喂養(yǎng)等，都可能改變正常菌群的定殖；⑤ 現(xiàn)代生活正消耗著原始菌群多樣性及其功能庫，可增加患免疫和代謝疾病的風(fēng)險(xiǎn)；⑥ 重建健康菌群、了解其在疾病中的可能機(jī)制，有助于制定防治措施。 Role of the microbiome in human development 【主編評(píng)語】共生菌群與宿主共同進(jìn)化，在人體發(fā)育中發(fā)揮重要作用，現(xiàn)代化對菌群的影響與多種慢性疾病的流行相關(guān)?！禛ut》近期發(fā)表由美國幾位菌群領(lǐng)域的知名專家共同撰寫的綜述，從進(jìn)化和發(fā)育的角度，探討了共生菌群（尤其腸道菌群）在生命早期營養(yǎng)和免疫等方面的作用，以及影響菌群正常建立的母體和現(xiàn)代化等因素。對于了解早期菌群發(fā)育和功能以及相關(guān)潛在轉(zhuǎn)化應(yīng)用，很有幫助。（@李丹宜） Nature Reviews：聚焦腸道真菌組（綜述）Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology[IF:16.99] ① 真菌組研究需要技術(shù)和生信分析標(biāo)準(zhǔn)化，以及完整的培養(yǎng)組數(shù)據(jù)庫；② 成人腸道真菌主要由囊菌門（70%）和擔(dān)子菌門（30%）中的10個(gè)屬組成，受環(huán)境、飲食等因素影響；③ 細(xì)菌和真菌間存在互惠、共棲或競爭等相互作用，是腸道菌群調(diào)控研究的熱點(diǎn)；④ 腸道真菌通過識(shí)別Toll樣受體、C型凝集素受體、半乳糖凝集素3和NOD樣受體及NKp30影響宿主免疫系統(tǒng)；⑤ 真菌組對炎癥性腸病、腸易激綜合癥、結(jié)直腸癌、酒精性肝病等有直接或間接影響，但仍需大量研究。 The gut mycobiota: insights into analysis, environmental interactions and role in gastrointestinal diseases 【主編評(píng)語】腸道真菌對宿主健康和疾病的影響日受關(guān)注?！禢ature Reviews Gastroenterology and Hepatology》近期發(fā)表綜述，系統(tǒng)性總結(jié)了目前腸道真菌組研究在真菌-細(xì)菌互作、真菌-宿主互作中取得的進(jìn)展，也指出了目前檢測分析技術(shù)缺乏標(biāo)準(zhǔn)化等局限性，對于研究腸道真菌組具有重要參考價(jià)值。（@小腸君） Nature子刊：腸道與皮膚中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（綜述）Nature Immunology[IF:21.809] ① 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）在維持腸道和皮膚屏障平衡中至關(guān)重要；② 和淋巴器官里的Treg不同，處于該屏障上的Treg表現(xiàn)出組織適應(yīng)性功能；③ 腸道Treg主要調(diào)節(jié)對菌群和膳食的炎癥反應(yīng)，受腸道細(xì)胞因子（如IL-2和TGF-β1）、菌群、代謝產(chǎn)物（如色氨酸和維生素A）等影響；④ 皮膚Treg主要促進(jìn)皮膚傷口修復(fù)，可能受IL-2和IL-33等細(xì)胞因子、皮膚菌群、代謝產(chǎn)物（如維生素A）、紫外輻射等調(diào)節(jié)；⑤ 腸道和皮膚Treg與組織的互作或可為相關(guān)疾病提供新靶點(diǎn)。 Regulatory T cell adaptation in the intestine and skin 【主編評(píng)語】《Nature Immunology》上發(fā)表的一篇綜述，詳細(xì)介紹了在腸道及皮膚處，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的亞群分布及特定功能，并討論了腸道及皮膚中的各類因素調(diào)節(jié)Treg的途徑與機(jī)制，值得一讀。（@沈志勛） Nature：調(diào)節(jié)細(xì)菌-宿主互作的新蛋白質(zhì)家族Nature[IF:41.577] ① 細(xì)菌受到動(dòng)物細(xì)胞模式識(shí)別受體檢查時(shí)，環(huán)狀二核苷酸作為第二信使可以在感染期引起免疫應(yīng)答；② 對細(xì)菌信號(hào)核苷酸進(jìn)行系統(tǒng)生化篩選后，發(fā)現(xiàn)一個(gè)類cGAS/DncV核苷酸轉(zhuǎn)移酶（CD-NTases）蛋白家族，可利用嘌呤和嘧啶合成環(huán)狀二核苷酸和三核苷酸；③ CD-NTases在結(jié)構(gòu)上較保守，其酶活性位點(diǎn)的關(guān)鍵連接處直接影響嘌呤或嘧啶的選擇；④ CD-NTases產(chǎn)生的環(huán)狀二核苷酸和三核苷酸激活不同宿主受體，調(diào)節(jié)病原體和共生菌群與動(dòng)物或植物宿主的相互作用。 Bacterial cGAS-like enzymes synthesize diverse nucleotide signals 【主編評(píng)語】環(huán)狀二核苷酸在維持細(xì)菌穩(wěn)態(tài)和致病性方面具有重要作用。Nature近期發(fā)表研究，報(bào)告了一個(gè)新的類cGAS/DncV核苷酸轉(zhuǎn)移酶（CD-NTases）蛋白家族，其產(chǎn)生的環(huán)狀二核苷酸和三核苷酸可調(diào)節(jié)病細(xì)菌與宿主的相互作用。該成果對解釋病原菌致病性、共生菌群穩(wěn)態(tài)具有重要參考價(jià)值。（@小腸君） Cell：致病菌奪取宿主營養(yǎng)的新方式Cell[IF:31.398] ① 細(xì)胞吸附型致病大腸桿菌（EPEC）可從宿主細(xì)胞質(zhì)中直接抽取營養(yǎng)物質(zhì)；② 依賴CORE蛋白復(fù)合物，EPEC在細(xì)菌表面組裝產(chǎn)生納米管，納米管插入宿主細(xì)胞抽提營養(yǎng)；③ CORE蛋白復(fù)合物是III型分泌系統(tǒng)的主要組分，表明EPEC的注射系統(tǒng)與宿主營養(yǎng)抽提系統(tǒng)存在同源性；④ CORE蛋白功能保守，當(dāng)EPEC缺乏內(nèi)源性CORE蛋白時(shí)，導(dǎo)入遠(yuǎn)源CORE基因也能恢復(fù)其抽提宿主營養(yǎng)的功能；⑤ 致病菌廣泛存在抽提宿主營養(yǎng)的系統(tǒng)，有助于致病菌獲得競爭優(yōu)勢。 Pathogenic E. coli Extracts Nutrients from Infected Host Cells Utilizing Injectisome Components 【主編評(píng)語】腸道致病菌需要克服共生菌群和腸粘膜保護(hù)屏障的干擾才能順利定植?！禖ell》近期發(fā)表研究，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞吸附型致病大腸桿菌可以利用一種納米管系統(tǒng)直接攝取宿主細(xì)胞養(yǎng)分，而該納米管系統(tǒng)與細(xì)菌外分泌注射系統(tǒng)存在結(jié)構(gòu)同源性，且廣泛分布于致病菌中。該結(jié)果對研究致病菌定植和致病機(jī)制有重要參考價(jià)值。（@小腸君） Cell：低能量代謝狀態(tài)有助于耐受細(xì)菌感染Cell[IF:31.398] ① 免疫活化狀態(tài)會(huì)引發(fā)機(jī)體的體溫維持系統(tǒng)發(fā)生能量代償，導(dǎo)致基礎(chǔ)代謝率降低和體溫過低；② 這種由免疫引起的能量代償效應(yīng)的發(fā)生，依賴于toll樣受體4（TLR4）對細(xì)菌標(biāo)志物脂多糖(LPS)的響應(yīng)，但不依賴于疾病狀態(tài)；③ 免疫系統(tǒng)通過重新編碼肝臟的代謝狀態(tài)，來影響機(jī)體能量的分配；④ 低代謝或能量限制（節(jié)食）狀態(tài)，會(huì)促進(jìn)機(jī)體對細(xì)菌耐受作用而不是免疫攻擊作用；⑤ 低代謝狀態(tài)及相關(guān)行為，可能是機(jī)體耐受細(xì)菌感染的進(jìn)化機(jī)制。 Energetic Trade-Offs and Hypometabolic States Promote Disease Tolerance 【主編評(píng)語】機(jī)體抵御細(xì)菌感染需要耗費(fèi)能量?！禖ell》雜志近期發(fā)表研究，發(fā)現(xiàn)機(jī)體對于細(xì)菌感染的免疫作用會(huì)與體溫維持系統(tǒng)競爭能量，導(dǎo)致機(jī)體能量代謝降低、體溫降低，最終導(dǎo)致對細(xì)菌的耐受效應(yīng)。該結(jié)果對解釋免疫反應(yīng)的能量消耗問題、機(jī)體的免疫耐受機(jī)制以及節(jié)食對免疫的影響具有重要參考作用。（@小腸君） 后抗生素時(shí)代的噬菌體療法（綜述）Clinical Microbiology Reviews[IF:20.642] ① 從生物學(xué)上考慮，為了避免溶原性噬菌體可能帶來的新的致病性性狀，噬菌體治療應(yīng)當(dāng)選用裂解性噬菌體；② 噬菌體治療本身不能完全清除感染，而是達(dá)到一個(gè)細(xì)菌-噬菌體群落的動(dòng)態(tài)平衡，根治仍然需要免疫系統(tǒng)的協(xié)同；③ 臨床案例表明噬菌體雞尾酒療法可有效應(yīng)對多耐藥性細(xì)菌感染，口服、靜脈注射和腔內(nèi)注射等手段均有嘗試；④ 噬菌體和抗生素聯(lián)用具有協(xié)同作用，可提高治療成功率；⑤ 噬菌體衍生酶、抗性和生物工程指引了未來發(fā)展方向。 Phage Therapy in the Postantibiotic Era 【主編評(píng)語】在抗生素時(shí)代來臨之前（1940左右），噬菌體已經(jīng)被用于人類疾病的治療。隨著抗生素的發(fā)現(xiàn)和廣泛應(yīng)用，噬菌體療法逐漸式微。如今，由于抗生素耐藥性的不斷加劇，噬菌體療法再度進(jìn)入人們的視線。再度歸來的噬菌體療法同時(shí)也帶來了新的治療策略，包括與抗生素聯(lián)用，利用噬菌體衍生酶、噬菌體抗性和噬菌體生物工程等。（@高春輝） 哈佛劉洋彧團(tuán)隊(duì)：找出最小驅(qū)動(dòng)物種，撬動(dòng)整個(gè)菌群Nature Communications[IF:12.353] ① 通過把現(xiàn)代控制論里的可達(dá)性推廣到結(jié)構(gòu)可達(dá)性，可構(gòu)建一個(gè)系統(tǒng)、有效的菌群控制理論，獲得對復(fù)雜菌群的控制能力；② 在該理論指導(dǎo)下，通過分析菌群生態(tài)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可找到最小驅(qū)動(dòng)物種集合，進(jìn)而通過調(diào)控驅(qū)動(dòng)物種的豐度實(shí)現(xiàn)對整個(gè)菌群狀態(tài)的精確控制；③ 這一理論框架的可行性，得到隨機(jī)構(gòu)造的復(fù)雜菌群數(shù)值驗(yàn)證的肯定；④ 在限菌小鼠腸道菌群、海綿核心共生菌群的生態(tài)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行的數(shù)值演示，進(jìn)一步驗(yàn)證了該理論模型的應(yīng)用價(jià)值。 A theoretical framework for controlling complex microbial communities 【主編評(píng)語】菌群中的微生物存在復(fù)雜的生態(tài)學(xué)聯(lián)系，導(dǎo)致如何控制菌群是一門很“高深”的學(xué)問。而為了利用菌群造福人類，我們需要做到這一點(diǎn)。劉洋彧最新研究成果利用菌群生態(tài)網(wǎng)絡(luò)計(jì)算最小驅(qū)動(dòng)物種，理論上實(shí)現(xiàn)了對菌群狀態(tài)的精確控制。對于這樣一個(gè)理論研究，小編是一頭霧水。敬請關(guān)注“熱心腸先生”公眾號(hào)獨(dú)家專訪中，劉老師本人的詳細(xì)解讀。（@高春輝） 獼猴桃或可用于改善輕度便秘Alimentary Pharmacology and Therapeutics[IF:7.357] ① 14名健康成年志愿者，每日食用4個(gè)獼猴桃（每個(gè)150g）或相同卡路里的飲料；② 獼猴桃可顯著增加小腸含水量、排便次數(shù)、糞便形狀分?jǐn)?shù)，MRI結(jié)果顯示獼猴桃可顯著增加升結(jié)腸的T1松弛時(shí)間；③ 食用獼猴桃使結(jié)腸體積平均增加16%（即大便排泄總量增加），但這結(jié)果低于之前報(bào)道的車前草的效果（增加50%總結(jié)腸體積）；④ 健康成年人中食用獼猴桃未見有副作用，獼猴桃可作為改善輕度便秘的膳食替代品，但對于老年人需謹(jǐn)慎推薦。 Mechanisms underlying effects of kiwifruit on intestinal function shown by MRI in healthy volunteers 【主編評(píng)語】《Alimentary Pharmacology and Therapeutics》上發(fā)表的一項(xiàng)最新研究，發(fā)現(xiàn)每日食用一定量的獼猴桃，可顯著增加排便次數(shù)，并改善糞便形態(tài)，提示獼猴桃或可用于改善輕度便秘。因受試者主要為中青年人，該結(jié)論不一定適用于老年人。（@沈志勛） 腸道菌群失調(diào)惡化小鼠肝病Gut[IF:17.016] ① 原發(fā)性硬化性膽管炎小鼠模型（Mdr2?/?小鼠）腸道菌群失調(diào)，且NLRP3炎癥小體活化增強(qiáng)；② Mdr2?/?小鼠的腸道菌群失調(diào)引起腸道屏障功能失調(diào)，增加細(xì)菌易位，從而增強(qiáng)肝臟中NLRP3炎癥小體介導(dǎo)的先天性免疫反應(yīng)；③ 將Mdr2?/?小鼠的菌群移植給健康小鼠，可在后者中引起顯著的肝臟損傷，提示腸道菌群失調(diào)與膽汁淤積性肝病進(jìn)展之間的因果關(guān)聯(lián)；④ IDN-7314可抑制炎癥小體的活化，緩解肝臟損傷，逆轉(zhuǎn)血清膽汁酸譜及腸道菌群的變化。 Intestinal dysbiosis augments liver disease progression via NLRP3 in a murine model of primary sclerosing cholangitis 【主編評(píng)語】來自《Gut》上的一項(xiàng)最新研究，在原發(fā)性硬化性膽管炎小鼠模型中，發(fā)現(xiàn)腸道菌群失調(diào)與膽汁淤積性肝病進(jìn)展之間存在因果關(guān)聯(lián)，腸道菌群的失調(diào)及易位通過激活NLRP3炎癥小體，介導(dǎo)肝臟先天性免疫反應(yīng)的增強(qiáng)，從而引起肝臟損傷。（@沈志勛） 王璐璐+蔣建東等：針對腸道菌群的小檗堿給藥系統(tǒng)Advanced Functional Materials[IF:13.325] ① 新開發(fā)的BBR-CS/PT-NP納米顆粒藥物遞送系統(tǒng)，可響應(yīng)pH/腸道菌群雙刺激，將小檗堿（BBR）特異性地遞送到結(jié)腸，增強(qiáng)與腸道菌群的互作；② 該遞送系統(tǒng)在胃和小腸中保持穩(wěn)定，到達(dá)結(jié)腸后，由細(xì)菌產(chǎn)生的酶降解納米粒子釋放BBR；③ 在高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖倉鼠中，用體系進(jìn)行BBR給藥，可刺激短鏈脂肪酸的產(chǎn)生，抑制體重增加和脂肪沉積，降低血脂、血糖和細(xì)菌脂多糖水平，改善炎癥和胰島素耐受，緩解肝臟脂肪變性。④ 該體系的給藥效果強(qiáng)于直接給藥。 Dual‐Stimuli‐Responsive Gut Microbiota‐Targeting Berberine‐CS/PT‐NPs Improved Metabolic Status in Obese Hamsters 【主編評(píng)語】小檗堿的代謝調(diào)控機(jī)制很可能涉及腸道菌群調(diào)控。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所 王璐璐和蔣建東團(tuán)隊(duì)近期在《Advanced Functional Materials》上發(fā)表研究，報(bào)道了一種新型的小檗堿給藥體系，可以將藥物靶向遞送到結(jié)腸并直接作用于結(jié)腸菌群，提高了小檗堿的代謝調(diào)節(jié)療效。該體系對提高小檗堿用藥效率、闡釋小檗堿藥理機(jī)制、優(yōu)化代謝疾病治療均有重要意義。（@小腸君） Nature子刊：評(píng)估菌群移植效率的新武器Nature Communications[IF:12.353] ① 利用基于右旋氨基酸的順序標(biāo)記代謝探針（STAMP），可評(píng)估移植菌群的活性；② 用熒光右旋氨基酸（FDAA）標(biāo)記供體小鼠的腸道菌群，移植后用另一種FDAA標(biāo)記受體小鼠菌群，成功定植的菌群同時(shí)具有兩種熒光標(biāo)記；③ STAMP證明移植過程中存在高存活率的特定細(xì)菌類群；④ STAMP可用于評(píng)估糞菌移植效率；⑤ STAMP證實(shí)移植前所用抗生素的種類影響菌群移植效率，僅多粘菌素B促進(jìn)了移植菌群在小鼠中的存活，萬古霉素、頭孢噻肟和甲硝唑均降低了移植效率。 Assessing the Viability of Transplanted Gut Microbiotas by Sequential Tagging with D-Amino acid-based Metabolic Probes 【主編評(píng)語】來自上海交大附屬仁濟(jì)醫(yī)院、北京大學(xué)和廈門大學(xué)的研究者近期聯(lián)合在《Nature Communications》發(fā)表研究，利用熒光氨基酸標(biāo)記物開發(fā)了一種可衡量菌群移植效率的技術(shù)，并運(yùn)用該技術(shù)發(fā)現(xiàn)了在菌群移植中生存率高的細(xì)菌類群，以及抗生素前處理對菌群移植的影響。對于評(píng)估菌群移植效率、開發(fā)有效的菌群調(diào)控手段具有重要參考價(jià)值。（@小腸君） Nature子刊：社交人群中的菌群傳遞Nature Microbiology[IF:14.174] ① 斐濟(jì)群島地理位置相對獨(dú)立，群島上287人的糞便和口腔菌群在家庭成員和配偶間存在顯著的傳遞現(xiàn)象；② 相比于男性，女性攜帶的菌株與其接觸的家人和其他群體的菌株更相近；③ 口腔菌群與糞便菌群的傳遞模式并不完全相同；④ 無法判斷菌群傳遞的方向和直接程度；⑤ 使用核心SNP和可變基因組區(qū)域分析，從菌株水平的菌群信息就可以判定一部分配偶關(guān)系, 反映出個(gè)體在環(huán)境易感性、行為、社交關(guān)系上的相似性對于菌群傳遞網(wǎng)絡(luò)的影響。 Transmission of human-associated microbiota along family and social networks 【主編評(píng)語】《Nature Microbiology》近期發(fā)表研究，對斐濟(jì)群島上287人的腸道和口腔菌群進(jìn)行核心SNP分析和可變基因組區(qū)域分析，闡釋了共生菌群在人群中的水平傳遞現(xiàn)象，發(fā)現(xiàn)菌群的相似性一定程度上可以反映人群的社交關(guān)系。該結(jié)果對于闡釋環(huán)境因素對共生菌群的影響、共生菌群的建立具有重要參考價(jià)值。（@小腸君） 口腔健康別忽視！大多數(shù)口腔菌能在腸道安家eLife[IF:7.616] ① 分析五個(gè)國家470名健康或患病個(gè)體的310個(gè)唾液和糞便菌種，通過檢測細(xì)菌單核苷酸變異，在菌株水平分析細(xì)菌在消化道的傳播情況；② 口腔-腸道傳播是一個(gè)頻繁且連續(xù)的過程，絕大多數(shù)口腔菌種可在健康人中轉(zhuǎn)移并定殖于腸道；③ 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)直腸癌患者腸道中富集的數(shù)個(gè)菌種來源于口腔，且機(jī)會(huì)致病菌種具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移性；④ 需將消化道菌群作為整體考慮，口腔-腸道菌群轉(zhuǎn)移是塑造健康和疾病腸道菌群的重要過程。 Extensive transmission of microbes along the gastrointestinal tract 【主編評(píng)語】“病從口入”，《eLife》的一項(xiàng)最新研究似乎再次證實(shí)了這一點(diǎn)。該研究對比了470名參與者的唾液和糞便菌種，并在菌株水平分析了細(xì)菌從口入腸的情況，證實(shí)了腸道中定植部分機(jī)會(huì)致病菌是來自口腔，提示口腔菌群對腸道菌群健康的影響不容小覷。（@李丹宜） Cell子刊：吃進(jìn)去的益生菌也會(huì)變異Cell Host and Microbe[IF:17.872] ① 大腸桿菌Nissle株（EcN）缺乏分解復(fù)雜多糖的能力，但在宿主體內(nèi)缺乏可利用碳源條件下，EcN通過攝取外源基因表達(dá)糖苷水解酶來分解多糖；② EcN基因組在無菌小鼠中發(fā)生的變化最大，其他細(xì)菌的存在會(huì)解除飲食成分對EcN基因演化的篩選壓力；③ 共生菌群多樣性低的條件下，小鼠體內(nèi)的EcN會(huì)積累分解黏蛋白的基因突變，獲得分解腸粘液的能力；④ 攝入鏈霉素類抗生素后，宿主腸道中的EcN獲得穩(wěn)定存在的鏈霉素耐藥基因。 Adaptive Strategies of the Candidate Probiotic E. coli Nissle in the Mammalian Gut 【主編評(píng)語】《Cell Host and Microbe》近期發(fā)表研究，發(fā)現(xiàn)潛在益生菌大腸桿菌Nissle株在營養(yǎng)成分、抗生素藥物的篩選壓力之下會(huì)發(fā)生演化，獲得之前不具有的糖苷水解能力、腸粘液分解能力和抗生素耐藥性，可能影響益生菌運(yùn)用的安全性。本研究所用的方法可用來評(píng)估潛在益生菌的安全性和基因操作潛力，對于開發(fā)益生菌產(chǎn)品具有重要參考價(jià)值。（@小腸君） Cell子刊：馬拉色菌或是特定易感患者的克羅恩病“引爆器”Cell Host and Microbe[IF:17.872] ① 對比健康人和克羅恩?。–D）患者的盲腸和結(jié)腸粘膜真菌，鑒定出與CD相關(guān)的真菌組成變化；② 常見的皮膚共生真菌——限制馬拉色菌，在攜帶與炎癥性腸病相關(guān)的CARD9（參與抗真菌免疫的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)接頭蛋白）單核苷酸多態(tài)性的患者腸道中豐度上升，并可被CD患者的抗真菌抗體識(shí)別；③ 該CARD9基因變異可使人免疫細(xì)胞對這種真菌產(chǎn)生的炎癥細(xì)胞因子增強(qiáng)；④ 在野生型和限菌小鼠中，該真菌可通過依賴于CARD9的信號(hào)通路，加劇DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。 Malassezia Is Associated with Crohn’s Disease and Exacerbates Colitis in Mouse Models 【主編評(píng)語】炎癥性腸?。↖BD）與腸道菌群及其相關(guān)的免疫應(yīng)答改變有關(guān)，近期有不少研究開始揭示腸道真菌組在IBD中的作用。《Cell Host and Microbe》的一項(xiàng)最新研究分析了克羅恩病患者的腸粘膜真菌組成的變化，發(fā)現(xiàn)一種馬拉色菌在攜帶IBD風(fēng)險(xiǎn)CARD9基因突變的患者中富集，并在小鼠模型中證實(shí)這種真菌可通過參與抗真菌免疫的CARD9信號(hào)來加劇結(jié)腸炎。這些發(fā)現(xiàn)提示，對于特定遺傳易感人群，靶向特定腸道真菌的療法，或能用于治療IBD。（@李丹宜） 感謝本期日報(bào)的創(chuàng)作者：張玲，小腸君，米見對，李丹宜，吳芹，Echo-gdm，張?jiān)ｂ?，方芳，沈志勛，劉永鑫，高春輝，Roxy，祁玉麗 |
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