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1.如何真正有效的殺死支原體？
當我們在養(yǎng)細胞的時候，有可能會出現(xiàn)如下的狀況：細胞生長緩慢、細胞變形、碎片增加、懸浮細胞容易成團、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點。
如果排除了其他試劑選擇不當、細胞株老化、細菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示：細胞可能出現(xiàn)了支原體污染。據(jù)報道，細胞培養(yǎng)中發(fā)生支原體污染的機率較高，會達到70%左右，常規(guī)抗生素的使用對支原體幾乎無效。
那么，支原體污染，對細胞培養(yǎng)有什么危害呢？
支原體是最小的自我復制的微生物，直徑0.2~2μm ，沒有剛性細胞壁，可通過濾膜，對抗生素不敏感；細胞培養(yǎng)時支原體污染沒有混濁，PH 變化及細胞病理變化不顯著，沒有明顯可見的污染跡。但是支原體污染能改變被培養(yǎng)細胞的生長特點、細胞膜組成以及DNA ，RNA及蛋白表達等；導致不準確或者錯誤的實驗結果；造成珍貴培養(yǎng)細胞的損失；浪費人力、物力及時間。
MP公司的支原體去除試劑MRA屬于抗生素喹啉家族的衍生物，它通過抑制DNA促旋酶清除支原體污染，該酶是微生物DNA復制過程中必不可少的酶類。
該產(chǎn)品特點：
1，超強抑制支原體活性，徹底去除污染：抑制DNA促旋酶（抑制DNA復制）清除支原體污染
2，活性范圍廣：各支原體株系均可作用
3，工作濃度低，無細胞毒性：在推薦濃度下使用MRA，細胞毒性極小，因此也可以作為預防支原體污染使用的試劑。
4，消除支原體污染后永不復發(fā)：一旦使用了MRA，培養(yǎng)細胞就不會再受到同樣的支原體污染。
5，使用方便：將支原體去除試劑加入污染培養(yǎng)物（工作濃度0.5ug/ml，孵育7天）即可徹底消除支原體污染；也可用于支原體的預防，預防濃度0.1ug/ml。
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2.細胞培養(yǎng)級中酚紅的作用？
酚紅在培養(yǎng)基中用作PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。
研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素).為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。在固醇類激素的研究和生產(chǎn)中應該選擇無酚紅培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。
3.谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?
L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的，如沒有谷胺酰胺細胞生長不良而發(fā)生細胞死亡。脫掉氨基后，可作為能量來源、參與蛋白質合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺是一種并不穩(wěn)定的氨基酸，在中性水溶液中會自發(fā)降解（4℃冰箱內放置2周,大部分谷氨酰胺被破壞)；導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。
因此，出現(xiàn)了一種谷氨酰胺的替代物，HiGlutaXL是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。
HiGlutaXL?二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，HiGlutaXL?二肽溶液有極少的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。由于穩(wěn)定性增加，因此無需反復添加，使用更方便； 可以防止L-谷氨酰胺降解產(chǎn)生有毒性氨的累積，因而有利于細胞生長。
4.培養(yǎng)級中丙酮酸鈉的作用？
丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
5.培養(yǎng)細胞時應使用5 %或10% CO2？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為3.7 g/L時，細胞培養(yǎng)時應使用10% CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3為1.5g/L時，則應使用5% CO2培養(yǎng)細胞。
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