近年來高通量測序技術蓬勃發(fā)展，基于高通量測序的低深度全基因組測序(copy number variation sequencing， CNV-seq)技術在產前診斷中的應用逐步深入。

為此，中華醫(yī)學會醫(yī)學遺傳學分會臨床遺傳學組、中國醫(yī)師協(xié)會醫(yī)學遺傳醫(yī)師分會遺傳病產前診斷專業(yè)委員會、中華預防醫(yī)學會出生缺陷預防與控制專業(yè)委員會遺傳病防控學組共同成立專家組，探討CNV-seq技術在產前診斷中的應用規(guī)范。2019年4月10日，《低深度全基因組測序技術在產前診斷中的應用專家共識》（以下簡稱“共識”）在《中華醫(yī)學遺傳學》雜志上刊發(fā)。本公眾號后臺回復“20190412”獲得該專家共識原文。

《共識》指出CNV-seq可以作為一線產前診斷技術對可能存在胎兒染色體異常的孕婦進行產前診斷；《共識》的達成，有利于規(guī)范CNV-seq技術的臨床應用，使其更好地服務于臨床。

本共識大致可分為七部分：前言、適用范圍、局限性、臨床應用路線、檢測前遺傳咨詢、檢測后遺傳咨詢、規(guī)范化臨床應用?，F針對其中的一些要點進行解讀說明。

二胎政策放開后，高齡孕婦的產前診斷需求日益增長。CNV-seq技術高通量、低成本的特點，可以解決現階段產前診斷服務供給嚴重不足的矛盾。

在低比例嵌合體的有效檢測方面，現行產前診斷技術（核型分析和芯片檢測）存在不足。核型分析需要細胞培養(yǎng)，而在培養(yǎng)過程中，如果發(fā)生染色體畸變細胞的增殖速度落后于正常細胞，則檢測結果可能會漏掉低比例嵌合體。

CMA雖然無需細胞培養(yǎng)，但受限于熒光信號強度波動以及背景噪音的影響，并不能準確分析＜30%的嵌合體。

CNV-seq技術無需細胞培養(yǎng)，測序完成后，通過計數每條染色體拷貝數的細微改變，來精確判斷嵌合體比例，故CNV-seq可以實現對低比例嵌合體更好的檢測，可為臨床醫(yī)生提供更為準確可靠的產前診斷結果。

CNV-seq技術很好的彌補了核型分析與芯片檢測的不足，因此對于染色體病高風險胎兒，CNV-seq技術可作為一線診斷方法供其選擇。在2018年5月份，AJOG發(fā)表了CNV-seq前瞻性臨床研究數據，對接受產前診斷且無CNV異常高風險（如胎兒超聲檢查提示結構異常等）的3429例羊水樣本進行CNV-seq分析。與核型分析相比，該技術可額外檢出1%的明確致病性CNV。該篇文章首次提出CNV-seq可以作為一線診斷技術應用于產前診斷經驗^[1]。

要點解讀：

CNV-seq亦存在一定的局限性，如無法檢測異倍體和雜合性缺失（含UPD），但通過聯(lián)合STR可實現對異倍體和部分雜合性缺失的分析。此外，CNV-seq無法檢測單基因病，WES技術可對單基因疾病進行分析。

原文內容（部分）：

CNV-seq實驗操作主要分為三步：（1）樣本基因組DNA提??；（2）文庫構建；（3）上機測序。其中，文庫構建可以選擇PCR或者PCR-free的方法進行。因PCR-free方法無PCR擴增偏好性，檢測更精準，故推薦用于文庫構建。

重點解讀：

傳統(tǒng)的建庫過程需經過PCR進行DNA片段的富集，而在富集的過程中會不可避免的引入擴增錯誤和偏向性，這意味著上機測序的文庫片段已經無法真實反映原始樣本的情況，同時也帶來dup偏高、測序數據浪費偏多的問題^[2-3]。上述將對檢測結果的準確性，尤其對于微缺失/重復（CNV）檢測，會造成比較大的影響。

PCR-free建庫方法無需進行PCR即可完成建庫，可有效避免復制錯誤的產生和累積，降低測序Error Rate，提高覆蓋度與均一性，結果更加準確可靠。因此，《共識》推薦應用PCR-free的方法進行文庫構建。

原文內容（部分）：

父母雙方外周血樣本與胎兒樣本同時進行CNV-seq檢測，有利于及時確定CNVs來源并判斷胎兒CNVs的致病性。

重點解讀：

應充分重視檢測前的遺傳咨詢。建議將父母雙方外周血樣本與胎兒樣本同時進行CNV-seq檢測。

CNV-seq結果分為致病、可能致病、致病性未知、可能良性、良性五種情況。對于致病性未知的CNVs，通常需要再次召回父母雙方，抽取外周血進行CNV-seq分析，根據父母雙方是否攜帶相同CNVs及表型信息，來推測胎兒CNVs的致病性，這無疑會延長檢測周期，給孕婦及家庭造成嚴重的心理負擔。

因此，父母雙方外周血樣本與胎兒樣本同時進行CNV-seq檢測不僅可以增加結果判讀的準確性，還可以及時確定CNVs的來源，縮短檢測結果等待時間，緩解孕婦焦慮心理。

原文內容（部分）：

嵌合體：可結合超聲結果進行綜合判斷，充分告知胎兒出生后可能出現的問題，產前無法對胎兒預后進行評估。如繼續(xù)妊娠，建議胎兒出生后多組織取樣行CNV-seq分析并密切隨訪。

重點解讀：

嵌合體的遺產咨詢一直是臨床上的一個難點。嵌合體胎兒出生后的臨床表型差異較大，從無明顯癥狀到典型的染色體病均可發(fā)生，這與嵌合比例、異常細胞分布、累及的染色體種類等因素相關^[4]。因此，臨床醫(yī)生不能簡單地根據嵌合的比例這個單一因素推測臨床表型的嚴重程度。

針對嵌合體的遺產咨詢如何開展？《共識》給予了詳細指導。

判斷嵌合體風險的遺傳咨詢，要將CNV-seq結果與超聲檢查結果綜合分析，充分告知胎兒出生后可能出現的問題，產前無法對胎兒預后進行評估。如果決定繼續(xù)妊娠，需要加強臨床隨訪，胎兒出生后可取外周血、唾液等組織進行CNV-seq分析，密切關注其生長發(fā)育與智力情況。

《共識》的發(fā)表對規(guī)范CNV-seq技術的臨床應用，推動技術發(fā)展起到了非常重要的作用。在《共識》的指導下，可以預見CNV-seq技術將會在我國的產前診斷中心進一步普及應用，協(xié)助臨床醫(yī)生進行精準產前診斷，有效緩解產前診斷壓力。

參考文獻