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圖注：Li B. Global cancer statistics, 2012[J]. Ca A Cancer Journal for Clinicians, 2011, 61(2):69. 蛋白類腫瘤標(biāo)志物 AFP是目前全世界應(yīng)用最廣泛的HCC腫瘤標(biāo)志物，診斷HCC的敏感度為39%～65%，特異度為76%～94%。其敏感度和特異度均不令人十分滿意，尤其在具有小腫塊的HCC早期階段，80%的患者血清AFP并未見(jiàn)明顯升高，在腫塊直徑＜3 cm和＞3 cm的HCC患者中，AFP的檢測(cè)敏感度分別為25%和52%。 GP73在正常人的肝細(xì)胞中表達(dá)量極低或者不表達(dá)，而在HCC患者血清中明顯升高，盡管肝炎和脂肪肝也可導(dǎo)致GP73水平升高，但其升高程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于HCC患者。研究顯示在低水平AFP小肝癌患者中，GP73檢測(cè)敏感度和特異度分別為72.0%和94.0%。故GP73是一個(gè)較好的小肝癌的輔助診斷標(biāo)志物。 AFP-L3是AFP異質(zhì)體的一種，常用AFP-L3與AFP的百分比作為HCC早期診斷的標(biāo)志物。AFP-L3為肝癌細(xì)胞特有，AFP-L3在肝癌惡性程度評(píng)估、治療效果和預(yù)后判定方面有著重要的意義，尤其對(duì)低水平AFP肝癌或小肝癌的早期診斷意義較大。 GPC-3是一種細(xì)胞膜表面的硫酸乙酰肝素糖蛋白，在正常人肝臟中并不表達(dá)，在HCC患者中明顯高于良性肝臟疾病患者，因此其有助于HCC的早期診斷和良惡性肝腫瘤的鑒別診斷。目前，GPC-3的敏感度和特異度分別為36%～65%、65%～100%，且在小肝癌的檢測(cè)方面敏感度優(yōu)于AFP。 研究表明HSP27的表達(dá)可通過(guò)線粒體死亡胱天蛋白酶依賴的途徑從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用，特別是在HCC細(xì)胞中。因而HSP27對(duì)診斷HCC具有潛在價(jià)值。 OPN是一種分泌型鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白，存在于人體多種組織細(xì)胞中，尤其是惡性轉(zhuǎn)化的上皮細(xì)胞，HCC患者血清OPN水平明顯高于良性慢性肝病患者，用于診斷HCC的特異度為26%，敏感度為92.5%。OPN與HCC大小、臨床分期、有無(wú)肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移及癌栓等密切相關(guān)，其對(duì)于HCC的預(yù)后判斷及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)也有重要意義。 SF主要在肝臟合成，以維持體內(nèi)鐵的供應(yīng)和血紅蛋白的相對(duì)穩(wěn)定。目前認(rèn)為SF的測(cè)定可以作為HCC輔助診斷及療效監(jiān)控和預(yù)后判斷的手段之一，特別是對(duì)于AFP陰性的患者尤有意義，但其特異度較低。 CD166是免疫群蛋白超級(jí)家族的細(xì)胞表面構(gòu)件，其表達(dá)被視為有價(jià)值腫瘤指標(biāo)，與HCC疾病進(jìn)展情況、疾病預(yù)后有一定聯(lián)系。CD166是一種精確的血清標(biāo)志物，用于肝癌的診斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)，靈敏度和特異性高于AFP。 細(xì)胞因子類 研究發(fā)現(xiàn)HCC患者血清TGFβ1和TGFβ1mRNA水平均明顯高于正常對(duì)照組和肝臟良性疾病對(duì)照組。但由于TGFβ1在肝外腫瘤、傷口愈合、血管再生和纖維化中均會(huì)升高，從而導(dǎo)致其特異度降低。 血液中的IGF-Ⅱ主要由肝臟合成。研究表明IGF-Ⅱ與HCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。HCC患者血清中IGF-Ⅱ明顯升高，其對(duì)HCC有一定的輔助診斷、預(yù)后判斷價(jià)值。 HGF的檢測(cè)對(duì)HCC早期診斷、療效觀察及預(yù)后判斷均有一定意義。但是，除了HCC之外，其他疾病也可表現(xiàn)為HGF水平的升高，包括食管鱗癌、淋巴瘤、冠脈綜合征、主動(dòng)脈夾層、肺血栓栓塞、腦梗死及敗血癥等。因此，需要進(jìn)一步的研究來(lái)探討炎性改變和惡性腫瘤二者與HGF濃度升高程度的相關(guān)性。 TSGF是一種在腫瘤生長(zhǎng)時(shí)由腫瘤細(xì)胞及周邊血管產(chǎn)生的物質(zhì)。TSGF可用于早期HCC診斷，且在監(jiān)測(cè)療效、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)中也有一定應(yīng)用價(jià)值。有研究報(bào)道TSGF用于HCC檢測(cè)的敏感度為82.4%，特異度為75.3%，其與AFP、α-L-巖藻糖苷酶(AFU)和IL-8聯(lián)合檢測(cè)的敏感度和特異度均可達(dá)100%。 酶類標(biāo)志物 DCP是一種維生素K缺乏所致的異常凝血酶原蛋白，在惡性腫瘤細(xì)胞中由于凝血酶原前體翻譯后羧基化缺陷而產(chǎn)生。其敏感度和特異度可達(dá)86%和93%，明顯優(yōu)于AFP和AFP-L3，被日本、韓國(guó)及印度批準(zhǔn)作為HCC的有效標(biāo)志物，尤其是判斷肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和預(yù)后。 有研究報(bào)道AFU用于診斷HCC的敏感度為72.4%，特異度為63.8%。但AFU在糖尿病、胰腺炎、甲狀腺功能減低癥時(shí)也會(huì)有一定程度的升高。因此，AFU對(duì)HCC的早期診斷特異度不高，需與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)才能有效對(duì)HCC進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)。 有臨床資料表明GGT是診斷HCC的敏感指標(biāo)之一，對(duì)HCC的早期診斷有一定的意義；GGT升高幅度與癌組織大小及范圍有關(guān)，動(dòng)態(tài)觀察可監(jiān)測(cè)療效、判斷預(yù)后。 有研究發(fā)現(xiàn)HCC患者血清MMP1水平明顯升高，MMP是腫瘤發(fā)展微環(huán)境中改變的主要介質(zhì)，可以作為早期診斷HCC的生物學(xué)標(biāo)志物。MMP1從肝硬化患者中區(qū)分出HCC患者的敏感度和特異度比AFP和OPN高，MMP1能準(zhǔn)確辨別AFP水平低于20 ng/ml的HCC。 抗體和抗原類 SCCA是絲氨酸蛋白酶抑制劑家族的一員，在HCC患者組織和血清中SCCA過(guò)度表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)血清SCCA診斷HCC的敏感度為18%～84%，特異度為27%～73%，而血清SCCA-IgM可能是診斷HCC更加有希望的生物標(biāo)志物。 常用于HCC診斷的抗原還有CEA、CA19-9、CA12-5、CA50、CA15-3等，但檢測(cè)單個(gè)抗原對(duì)HCC診斷的特異度較低，多個(gè)抗原抗體的組合檢測(cè)可能會(huì)提高HCC的診斷效率。 循環(huán)基因和細(xì)胞類標(biāo)志物 循環(huán)標(biāo)志物由于便于獲取而成為HCC預(yù)后判斷的首選標(biāo)志物。HCC患者的外周血循環(huán)遺傳標(biāo)志物如AFPmRNA、TGFβ1mRNA和IGF-ⅡmRNA等用于監(jiān)測(cè)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移或HCC術(shù)后復(fù)發(fā)。 CTC已作為預(yù)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有前途的候選標(biāo)志物。有研究表明上皮細(xì)胞黏附分子陽(yáng)性CTC可作為肝癌術(shù)后的預(yù)后指標(biāo)，但它們的臨床有效性依然需要驗(yàn)證。 HCCR主要在肝癌細(xì)胞的質(zhì)膜和胞漿中表達(dá)，正常組織為陰性；在從肝硬化到HCC的疾病進(jìn)程中，HCCR作為診斷標(biāo)志物優(yōu)于AFP，尤其是診斷早期HCC及小肝癌患者。此外，有研究顯示HCCR的過(guò)量表達(dá)與HCC的早期發(fā)生關(guān)系密切，并且與HCC的侵襲和轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系，HCCR在低分化肝癌細(xì)胞中表達(dá)明顯高于高分化肝癌細(xì)胞。 AFP-mRNA源于脫落入血的HCC細(xì)胞，可在HCC患者外周血清中檢測(cè)到，可作為HCC的血清腫瘤標(biāo)志物。AFP-mRNA可用于HCC早期轉(zhuǎn)移的診斷，且其特異性極高，可有效排除假陽(yáng)性患者。 P53是一個(gè)重要的抗癌基因，其與細(xì)胞周期的調(diào)控、修復(fù)、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡等生物學(xué)功能有關(guān)，功能異?？蓪?dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)異常。HCC患者最常見(jiàn)為P53突變，P53通過(guò)影響beta-catenin信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)EMT的調(diào)控作用，降低P53表達(dá)能夠促進(jìn)betacatenin的細(xì)胞核內(nèi)積累及轉(zhuǎn)錄活性，抑制beta-catenin信號(hào)通路可減弱P53降低所促進(jìn)的肝癌細(xì)胞EMT、細(xì)胞遷移和腫瘤轉(zhuǎn)移，其P53突變預(yù)示較差的預(yù)后。 SALL4在HCC細(xì)胞的陽(yáng)性率為81.67%，顯著高于癌旁組織的25%，此外SALL4高表達(dá)患者的3年生存率低于SALL4低表達(dá)者。因而SALL4與HCC有著密切的臨床聯(lián)系，對(duì)判斷患者預(yù)后有一定臨床價(jià)值。 CDH17是鈣黏蛋白超家族的新成員，在正常組織中，CDH17的表達(dá)局限于小腸和結(jié)腸的上皮細(xì)胞；其參與細(xì)胞間識(shí)別、粘附過(guò)程，在組織發(fā)育維持形態(tài)有不可替代的功能。CDH17是診斷消化系統(tǒng)腺癌的有用的免疫組織化學(xué)標(biāo)記。 ■ 腫瘤標(biāo)志物對(duì)HCC的診斷起著至關(guān)重要的作用，特別是對(duì)于早期無(wú)癥狀的微灶腫瘤，影像學(xué)無(wú)法發(fā)現(xiàn)時(shí)，腫瘤標(biāo)志物的異常起著重要的參考價(jià)值。 ■ 雖然AFP仍然應(yīng)用非常廣泛，但是更多的時(shí)候是通過(guò)與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合使用。通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物能在早期，甚至在更早期進(jìn)行診斷肝癌，從而進(jìn)行更早的干預(yù)，這對(duì)于提高患者的生存率、改善患者的預(yù)后有重要意義。 ■ 腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)已經(jīng)成為臨床工作中的趨勢(shì)，但是在不同地區(qū)、不同醫(yī)院，聯(lián)合檢測(cè)的項(xiàng)目仍然不同，到底哪一種聯(lián)合檢測(cè)既能兼顧患者的經(jīng)濟(jì)利益，又能提高診斷效果，目前仍然沒(méi)有統(tǒng)一結(jié)論。 參考文獻(xiàn)： [1]吳旭,孫航,吳傳新.腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌診斷價(jià)值的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2018,34(04):538-541. [2]蔣智,張建淮,屠道遠(yuǎn).肝癌腫瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床研究,2018(02):270-273. [3]楊貴敏,趙運(yùn)勝,王春華,金亮.肝細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J].臨床肝膽病雜志,2018,34(01):199-203. [4]張麗,謝文衛(wèi),徐正琴,于婷.血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在肝癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2017,38(21):3044-3045. [5]謝軍花.腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在惡性腫瘤診斷中的價(jià)值與應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2017,38(08):1123-1125. [6]趙月清,張瑞軍.腫瘤標(biāo)志物在原發(fā)性肝癌診斷中的作用[J].疾病監(jiān)測(cè)與控制,2017,11(01):27-29. [7]邱虎,余保平.血清腫瘤標(biāo)志物在消化系統(tǒng)腫瘤診斷中的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2017,23(01):72-75+81. [8]柳健,譚詩(shī)云,李明,舒泳翔,王明珠.原發(fā)性肝癌腫瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2016,45(10):12-15+34. [9]張瓊月,陳俊輝.腫瘤標(biāo)志物在早期肝癌診斷中的價(jià)值[J].醫(yī)學(xué)綜述,2016,22(01):76-79. 相關(guān)閱讀 肝癌檢測(cè)還在依賴甲胎蛋白？ 中國(guó)技術(shù)有了更精準(zhǔn)方式近日，中山大學(xué)腫瘤防治中心徐瑞華教授與美國(guó)加州大學(xué)圣地亞哥分校 Kang Zhang（張康）教授團(tuán)隊(duì)的合作論文「Circulating tumour DNA methylation markers for diagnosis and prognosis of hepatocellular carcinoma」在自然出版集團(tuán)旗下 Nature Materials（影響因子 39.737 ）在線發(fā)表。 這項(xiàng)中美合作研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)檢測(cè)少量（4~5ml）外周血中循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）特定位點(diǎn)的甲基化水平，可以對(duì)肝癌進(jìn)行準(zhǔn)確的早期診斷及療效和預(yù)后預(yù)測(cè)。 這一成果可望打破肝癌長(zhǎng)期單一依賴甲胎蛋白（AFP）檢測(cè)的困境，提供全新的高靈敏度的檢測(cè)標(biāo)志物。  研究論文截圖 如何檢測(cè)腫瘤？ 抽血實(shí)現(xiàn)，無(wú)創(chuàng)、實(shí)時(shí)、全面、準(zhǔn)確 研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者外周血中可檢測(cè)到腫瘤細(xì)胞壞死、凋亡所釋放的 ctDNA，由于其攜帶有與原發(fā)腫瘤組織相一致的分子遺傳學(xué)改變，理論上可以利用 ctDNA 對(duì)腫瘤進(jìn)行診斷。 與經(jīng)典的組織活檢技術(shù)相比，液體活檢技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：
如何測(cè)出腫瘤？ ctDNA 甲基化，腫瘤液體活檢新靶標(biāo) 在最近發(fā)表的這項(xiàng)成果中，研究者選擇了 ctDNA 甲基化， 作為液體活檢的靶標(biāo)。 DNA 甲基化是 DNA 重要的修飾途徑之一，在 DNA 甲基化轉(zhuǎn)移酶( Dnmt )作用下將甲基選擇性添加到胞嘧啶上形成 5-胞嘧啶的過(guò)程，可調(diào)控基因的表達(dá)。 研究發(fā)現(xiàn)，與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞基因組的整體甲基化水平降低，抑癌基因啟動(dòng)子 CpG 島甲基化水平升高。在同一類型的腫瘤細(xì)胞中可檢測(cè)到穩(wěn)定和一致的特征性 DNA 甲基化改變，DNA 甲基化作為腫瘤發(fā)生過(guò)程中的早期分子事件之一，常導(dǎo)致相應(yīng)的抑癌基因失活，因此可作為潛在的腫瘤早期診斷的理想標(biāo)志物。 但是，ctDNA 在血液中的含量極微，每毫升血中僅有約 20ng ，且混雜在更大量的正常游離 DNA 背景中，在如此微量的 ctDNA 中檢測(cè)單個(gè)堿基的甲基化水平存在很多困難。 在這項(xiàng)新發(fā)表的工作中，研究者先后攻克了穩(wěn)定提取微量 ctDNA 、提高重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化效率、靶向甲基化 PCR 擴(kuò)增及測(cè)序、海量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理等多個(gè)技術(shù)壁壘，成功地在肝癌患者中實(shí)現(xiàn)了檢測(cè) ctDNA 甲基化作為早診和隨訪及預(yù)后預(yù)測(cè)標(biāo)志物的目標(biāo)。 檢測(cè)準(zhǔn)確度如何？ 敏感性和特異性明顯高于現(xiàn)有肝癌血清標(biāo)志物 研究者首先在全基因組水平上從肝癌組織和正常血液 DNA 的 4 85,000 個(gè) CpG 位點(diǎn)甲基化中篩選出差異性最顯著的位點(diǎn)；設(shè)計(jì)相應(yīng)的鎖式探針（ Padlock probe ），對(duì)近兩千例肝癌和正常人血漿中提取的微量 ctDNA 進(jìn)行了甲基化 PCR 擴(kuò)增和測(cè)序。 確定了這些位點(diǎn)的甲基化水平后，通過(guò)大量的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和計(jì)算，并利用多種人工智能模擬的機(jī)器學(xué)習(xí)方法，最后分別篩選出 10 個(gè)和 8 個(gè)位點(diǎn)建立了診斷模型和生存預(yù)后模型。 該診斷模型在訓(xùn)練組 715 例肝癌患者和 560 例正常人中的診斷敏感性和特異性分別達(dá)到了 85.7% 和 94.3% ，在驗(yàn)證組 383 例肝癌患者和 275 例正常人中的診斷敏感性和特異性分別達(dá)到了 83.3% 和 90.5% ，均明顯高于現(xiàn)有肝癌血清標(biāo)志物 AFP ，并能準(zhǔn)確區(qū)分肝癌患者和慢性肝炎（ HBV/HCV ）和脂肪肝患者，顯示出在肝癌早期診斷中的巨大價(jià)值。
 ctDNA 甲基化診斷模型在訓(xùn)練組（左）和驗(yàn)證組（右）人群中的診斷敏感性和特異性  用于構(gòu)建診斷模型10個(gè)CpG位點(diǎn)在訓(xùn)練組（左）驗(yàn)證組（右）患者ctDNA中的甲基化水平Heatmap圖  ctDNA 甲基化診斷模型診斷肝癌的 AUC（0.969）顯著優(yōu)于 AFP（0.816）  訓(xùn)練組 680 例（左）驗(yàn)證組 369 例（右）不同生存風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的患者預(yù)后具有顯著差異 我國(guó)是肝癌大國(guó)，全世界每年超過(guò)一半的新發(fā)肝癌病例都在中國(guó)。甄選高靈敏度的早診和隨訪標(biāo)志物對(duì)于提升肝癌整體療效意義重大。 ctDNA 甲基化液體活檢技術(shù)的成功，標(biāo)志著我國(guó)在液體活檢這一最具發(fā)展?jié)摿Φ哪[瘤無(wú)創(chuàng)診斷手段領(lǐng)域已經(jīng)與國(guó)際比肩，我們期待這一技術(shù)盡早推向臨床，造福廣大肝癌患者，尤其是亞臨床期的早期肝癌患者。  徐瑞華教授與研究團(tuán)隊(duì)部分成員  Kang Zhang 教授與研究團(tuán)隊(duì)部分成員 大家都在看 ★★★★★ 看完記得分享哦 |
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