本期為大家?guī)鞰atrigel使用的常見問題，滿滿的干貨，務必仔細閱讀啦

? Matrigel是什么，里面包含哪些成分？

Matrigel是來源于EHS小鼠肉瘤的基底膜基質，其中含有約60%層粘連蛋白、30% IV 膠原和8%的巢蛋白，還含有基底膜聚糖、TGF-?、表皮生長因子、類胰島素生長因子、組織纖溶酶原及其他生長因子。

? Matrigel有哪些種類？

康寧Matrigel主要有常規(guī)標準型（Standard）、高濃度（HC）、無酚紅（Phenol red-free）、生長因子減量型（Growth factor reduced, GFR）和人胚胎干細胞專用（hESC-qualified）幾個類別。

• 標準型Matrigel：濃度范圍大致為8-12mg/ml

• 高濃度Matrigel：濃度范圍大致為18-22mg/ml

• 無酚紅Matrigel：不含酚紅，產品完全融化后顏色透明

• 生長因子減量型Matrigel：Matrigel里包含的生長因子經過減量處理

• 人胚胎干細胞專用Matrigel：經過對hESC培養(yǎng)的測試，可以用于人胚胎干細胞的培養(yǎng)
  
  

? 如何選擇Matrigel？

? Matrigel到貨需要注意什么？

首先確認是否由干冰運輸，到貨時包裝箱中干冰是否足量，查看Matrigel液面是否基本水平，以及瓶身側壁、瓶口有無Matrigel融化的痕跡，以確保運輸質量；若發(fā)現問題，請及時拍照記錄，并聯系經銷商反饋。

? 如何儲存Matrigel？

收到產品并確認到貨情況無異常后，請將Matrigel儲存于-20℃冰箱，長期保存可置于-80℃冰箱。切勿將Matrigel儲存于自動除霜的冰箱中。在第一次融化后請分裝保存，應避免Matrigel反復凍融。

? Matrigel顏色為什么會有不一樣？

無酚紅Matrigel沒有顏色，完全融化后應是透明的；

含酚紅Matrigel顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化，這些顏色變化是正?，F象。因為酚紅存在時，在溫度、pH不同的情況下液體會出現顏色的差異。

? 怎么融化Matrigel？Matrigel融化需要多長時間？

將整瓶Matrigel埋沒在碎冰盒中，再將冰盒置于4℃冰箱中，建議放在冰箱靠后的位置，放置過夜融化。確保碎冰足量。融化后轉動瓶子查看Matrigel是否全部融化，確認無冰晶或膠塊殘留。我們建議過夜融化，高蛋白濃度的Matrigel可能需要更多的時間。請勿將Matrigel瓶直接放在4℃冰箱中融化，也請勿將冰盒及Matrigel放置在冰箱門上或冰箱靠門的位置。以下圖片可供參考：

? 融化后Matrigel應該是什么樣的？

標準型Matrigel融化后應為澄清的液體，無酚紅的為澄清且透明；蛋白濃度越高，融化后液體越粘稠。具體請參考下圖Matrigel融化后的照片，左邊兩瓶是高濃度型，右邊兩瓶是標準型：

? 如何分裝Matrigel？

建議根據您一次的使用量做小量分裝，。請注意與Matrigel接觸的所有耗材如槍頭、管子均需事先預冷，且在冰上無菌操作。分裝后的Matrigel可保存在-20℃或-80℃冰箱。建議保留瓶子的標簽或記錄下貨號（Catalog Number）及批次號（LOT number），以便后續(xù)查詢追蹤相關信息。 

? Matrigel融化時發(fā)現有凝膠，融化不了是怎么回事？

Matrigel對溫度非常敏感，超過10℃即開始成膠，超過22℃成膠速度會更快。如果到貨情況正常，出現此種現象應該是融化操作不規(guī)范或者融化期間環(huán)境溫度升高導致部分凝膠。請一定嚴格按照融化操作規(guī)范執(zhí)行，確保融化時保持低溫環(huán)境。

? 如何稀釋Matrigel？

一般可用預冷的無血清培養(yǎng)基或pH7.4的PBS稀釋。由于批次之間的濃度差異，除354277外，推薦按照特定的工作終濃度稀釋，而不要以比例或稀釋倍數稀釋。

? Matrigel濃度去哪兒查詢？

可以在康寧官網，輸入貨號，選擇quality certificate按鈕?；蛑苯狱c擊網址：https://www./asean/en/products/life-sciences/resource-library.html進入質檢證書查詢頁面，輸入貨號與批號，點擊查找，獲得相應COA文件。該文件中有蛋白濃度的說明；

對于干細胞專用型Matrigel，COA中不包含濃度說明，僅以稀釋系數為實驗參照，如需了解具體濃度信息，請聯系康寧技術支持。 

? Matrigel使用濃度？

• 凝膠濃度：在需要Matrigel凝膠的實驗中，工作濃度需大于3 mg/mL

• 包被濃度：包被實驗時Matrigel無需成膠，因此包被濃度應小于凝膠濃度（即3mg/mL）

• 工作濃度需要根據具體的細胞類型進行預實驗測試。對于侵襲實驗，建議初始濃度設置在200-300 μg/mL之間，再根據特定的實驗體系進行優(yōu)化

• 血管生成實驗濃度：請務必使用大于10 mg/mL的Matrigel產品，康寧提供挑選批次和批次預留的服務，請您在訂購產品時向代理商說明您的要求

• 體內皮下注射實驗濃度：由于是體內實驗，為了避免成膠不完全，建議終濃度在4 mg/mL以上 
  
  

? 什么是稀釋因子(Dilution Factor)？

對于干細胞專用型Matrigel，其COA中不包含濃度說明，但是有稀釋因子說明。稀釋因子的數值也是批次特異性的，每個批次的稀釋因子是根據蛋白質濃度計算的?？梢园凑障♂屢蜃拥臄抵祦泶_定使用的量。比如某一批次的稀釋因子為238 μL，則可將238 μL的hESC-qualified Matrigel原液加入到25ml DMEM/F12中，混勻后可鋪4塊六孔板，每孔使用1ml Matrigel稀釋液進行包被。具體實驗步驟可見相應COA文件。

? 使用Matrigel時需要注意哪些方面？

所有接觸Matrigel的試劑耗材產品都需要預冷，操作過程應全程在冰上操作，確保低溫環(huán)境。Matrigel對溫度十分敏感，一旦超過10℃，即開始凝膠。以下圖片可供參考：

? 如何區(qū)別包被和凝膠？

包被指Matrigel濃度小于成膠濃度（即<3 mg/mL），在細胞培養(yǎng)器皿表面形成薄薄的蛋白層而不凝成膠凍狀物質；凝膠指Matrigel濃度大于等于成膠濃度（即≥3 mg/mL），在細胞培養(yǎng)器皿表面能夠形成膠凍狀物質

? Matrigel凝膠鋪板使用量是多少？

薄膠（Thin Gel）：50μL/cm²，常應用于細胞附著和增殖；厚膠（Thick Gel）：150-200 μL/cm²，常應用于3D細胞培養(yǎng)；各培養(yǎng)器皿的有效培養(yǎng)面積請參考下表：

? Matrigel包被后的培養(yǎng)器皿能存放多久？

包被過的培養(yǎng)器皿最好當天使用，具體情況取決于實驗目的。在需要保存的情況下，Matrigel包被之后的培養(yǎng)器皿可以于37 ℃恒溫箱或4 ℃冰箱中放置最長一周的時間。保存時培養(yǎng)表面需要保持濕潤，請勿將包被工作液從培養(yǎng)器皿中吸出。（稀釋后未用完的Matrigel不建議保留再用）。

? 凝膠后的Matrigel能否融化后再使用？

Matrigel一旦成膠，是很難完全恢復的。可以嘗試將Matrigel埋在碎冰中，放入4℃冰箱，24-48小時后觀察能否融化。請注意，對于該處理方式后融化的Matrigel，其性能是無法保證的。

? 如何從Matrigel中收獲細胞？

推薦使用康寧Dispase或Cell Recovery Solution 產品。Corning Dispase 相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或細胞表面蛋白。此外，Corning Dispase還可用于組織分離。對于代謝研究和RNA抽提，建議在4℃使用Corning Cell Recovery Solution進行非酶反應的細胞收獲，因為Corning Matrigel中含有痕量的RNA，進行RNA分析時，應設置僅含有Matrigel（不接種細胞）的陰性對照組。

? 侵襲實驗中，Matrigel鋪板幾個小時，為什么不會成膠？

在侵襲實驗中，使用Matrigel的目的是包被小室表面，形成一層基質蛋白薄膜來模擬細胞外基質，其使用濃度小于3mg/ml，沒有達到成膠濃度，是不會成膠的。