|
? ? ? ?重組蛋白表達(dá)過程中，包涵體的形成使后續(xù)活性蛋白的收率降低，并且包涵體的復(fù)性及純化過程復(fù)雜，難度大。那么如何避免或減少重組蛋白發(fā)酵表達(dá)過程中包涵體的形成呢？ ? ? ? 包涵體的形成，主要原因是表達(dá)速率過快，過量表達(dá)導(dǎo)致蛋白堆積而成。那么通過降低重組蛋白的表達(dá)速率來減少或抑制包涵體的形成，可以嘗試低溫誘導(dǎo)等方式減少包涵體的形成。 ? ? ? ?蛋白序列中含硫氨基酸增多及脯氨酸的數(shù)量增多，更容易形成包涵體，含硫氨基酸數(shù)量多，二硫鍵若不能正確配對極易形成包涵體，而脯氨酸是D型氨基酸，常需要異構(gòu)酶輔助折疊。所以可以通過定點(diǎn)突變等方式來降低含硫氨基酸和脯氨酸的數(shù)量從而減少包涵體的形成。 ? ? ? ?在蛋白序列上連接一段可溶性表達(dá)的序列，來改變蛋白的氨基酸組成及各種氨基酸占的比例，也可以有效避免或減少包涵體的形成，比如加GST標(biāo)簽有一定的促溶作用。 ? ? ? ? ?蛋白所處環(huán)境也會影響其形成包涵體，比如細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境pH接近蛋白的pI時(shí)也容易形成包涵體，還有滲透壓也會影響細(xì)胞內(nèi)的疏水作用力，也會對蛋白的折疊積累形成影響，那么減少或避免包涵體的形成可以嘗試改變發(fā)酵過程中的pH和培養(yǎng)基中鹽的種類及濃度，來避免或減少包涵體的形成。 |
|
|
