關于RNA甲基化，我們已經介紹很多內容了，今天我們來介紹一篇文章：METTL1 Promotes let-7MicroRNA Processing via m7G Methylation. Mol Cell. 2019 Apr 19. pii:S1097-2765(19)30269-2.

文章主要內容為：RNA甲基化修飾酶METTL1介導miRNAlet-7 的m7GRNA甲基化修飾，并促進miRNAlet-7的成熟，最終發(fā)揮抑制肺癌細胞遷移的作用。

看完題目，我們可能會想起來以前公眾號推文《孫樹漢教授的這篇Hepatology做的啥？》介紹過的這篇文章：METTL14 suppresses themetastatic potential of hepatocellular carcinoma by modulating N6-methyladenosine-dependent primary MicroRNA processing.Hepatology.2017 Feb;65(2):529-543. doi: 10.1002/hep.28885.

在這篇發(fā)表在Hepatology雜志上的文章中，RNA甲基轉移酶METTL14 通過調控miRNA成熟抑制了肝癌的轉移，同樣是RNA甲基轉移酶，同樣是影響miRNA的成熟，同樣是調控腫瘤轉移（遷移），是不是很像？當然，兩篇文章不同的地方有：RNA甲基化酶不同，RNA甲基化修飾的類型也不同，時間點隔了近2年（2017-2019），當然研究的側重點也不同：hepatology這篇文章更偏醫(yī)學基礎科研，Mol Cell文章更偏生命科學領域，大家比較兩篇文章一起看可能效果更好。

下面我們來看MolCell文章這篇文章的研究內容：

1. m7G修飾和METTL1的引入

由于m7G修飾的豐度很低，這一問題促使研究團隊對檢測技術進行改進用于檢測發(fā)生m7G修飾的miRNA，研究團隊結合了BoRed-seq（改進的技術）和RIP-seq兩個技術對肺癌細胞m7G修飾的RNA進行檢測：

然后通過聯(lián)合分析兩種測序的結果并進行RIP-qPCR驗證，并在結直腸癌細胞中進行驗證。

前期研究發(fā)現(xiàn)：RNA甲基化酶METTL1（與輔因子WDR4協(xié)同）介導tRNA的m7G修飾，因此下面就是研究METTL1對前面鑒定到的miRNA（如let-7e-5p）的m7G修飾的影響：

2. METTL1對肺癌細胞遷移的作用是依賴miRNA（如let-7e-5p）的

這一部分包括了：（1）METTL1沉默對細胞遷移的影響；（2）METTL1沉默后基因表達功能富集結果——顯示細胞遷移通路與METTL1表型對應；（3）METTL1通過影響miRNA（如let-7e-5p）靶基因表達發(fā)揮功能：

在這一部分，有一個非常關鍵的問題就是METTL1對細胞遷移的影響是直接影響mRNA，還是通過miRNA（如let-7e-5p）間接影響mRNA的，這部分的工作對應的是文章的figure3：此處實驗包括了熒光素酶報告基因實驗（luciferase assay）和挽救實驗。

3. METTL1通過直接介導miRNA（如let-7e-5p） m7G修飾并調控miRNA成熟發(fā)揮作用

首先通過CLIP檢測METTL1與miRNA（如let-7e-5p）前體的結合，進一步研究發(fā)現(xiàn)METTL1影響miRNA（如let-7e-5p）成熟體的表達（非miRNA前體），并排除METTL1對剪接因子的影響；接下來通過RIP實驗、體外剪接和甲基化轉移酶活性實驗等研究發(fā)現(xiàn)METTL1對miRNA（如let-7e-5p）成熟的影響是直接的、且依賴于m7G修飾的：

4. m7G修飾位點對METTL1調控miRNA（如let-7e-5p）成熟的影響

這一部分的第一個問題是：miRNA（如let-7e-5p）前體的m7G修飾位點在哪里？

實驗方法是靶向質譜，結果發(fā)現(xiàn)let-7e-5p的G11是被m7G修飾的位點。

接下來的問題是：G11的m7G修飾對miRNA（如let-7e-5p）的具體影響方式是什么？

首先是分析G11所在位置是G四元結構（G-quadruplex，G2+N4G2+N4G2+N4G2+），而G四元結構在METTL1影響的miRNA（如let-7e-5p）中都存在，那么G四元結構與m7G修飾的關系是怎樣的？

進一步通過圓二色譜、變性實驗和序列突變等實驗進行研究。在這里，為了對m7G修飾進行干擾，使用了m7G的類似物DAG來研究m7G修飾對G四元結構和莖環(huán)結構平衡以及miRNA（如let-7e-5p）成熟的影響：

最后，我們通過縮略圖的方式比較一下Mol Cell這篇文章與Hepatology文章在研究內容上的區(qū)別：

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