多種慢性肝?。ㄈ缫倚秃捅透窝?、酒精性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、血吸蟲病、自身免疫性肝病、藥物性肝損傷等）可導(dǎo)致肝纖維化的形成。肝纖維化是發(fā)展為肝硬化的重要病理過程，多年來相關(guān)研究蓬勃開展，已從多方面揭示了肝纖維化的復(fù)雜形成機制，其中肝星狀細胞（HSC）仍是目前肝纖維化研究的熱點和重點。早在1876年，該細胞已被發(fā)現(xiàn)，確定為非Kupffer細胞。其定位于肝竇內(nèi)皮細胞和肝細胞之間的Disse間隙，分散在整個肝臟中，約占所有肝固有細胞的10%。在生理狀態(tài)下，HSC表現(xiàn)為不增殖的靜止表型，在細胞核周圍的細胞質(zhì)中富含視黃酯（維生素A或稱維甲酸）脂滴，是其不同于其他細胞的形態(tài)學(xué)特征，也據(jù)此可用密度梯度離心的方法將其從肝臟中分離。在外界刺激因素的作用下，HSC由靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨癄顟B(tài)，細胞質(zhì)中脂滴逐漸消失，大量形成膠原和其他細胞外基質(zhì)（ECM），這一轉(zhuǎn)變對肝纖維化形成至關(guān)重要。HSC是肝肌成纖維細胞的主要細胞來源。阻斷HSC活化或使活化HSC失活，促進纖溶物質(zhì)的活性增強，是潛在的抗肝纖維化靶點。目前，相關(guān)研究仍不斷開展，關(guān)于HSC活化的調(diào)節(jié)因子、代謝調(diào)節(jié)通路、信息傳遞新介質(zhì)、表觀遺傳學(xué)等的研究報道層出不窮。及時更新有關(guān)HSC活化的新靶點、新通路的信息，對開發(fā)有效的抗纖維化藥物有重要意義。

現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)眾多由其他肝細胞、免疫細胞和血小板等合成分泌的慢性肝臟炎癥因子、活性氧和細胞因子均可激活HSC，近年還發(fā)現(xiàn)微小RNA（miRNA）、長非編碼RNA（lncRNA）和外泌體也參與HSC的活化過程，過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）具有抑制HSC活化的功能。

1  細胞因子與HSC活化

HSC的活化需要外界某些細胞因子的刺激，這些細胞因子包括TGFβ、血小板源性生長因子（PDGF）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和結(jié)締組織生長因子（CTGF）等。

1.1  TGFβ與HSC活化

TGFβ由肝細胞產(chǎn)生，被認為是潛在的纖維形成細胞因子。TGFβ家族包含有大約40個結(jié)構(gòu)相關(guān)的因子，在哺乳動物中表達有3個亞型：TGFβ1、2和3，其中TGFβ1是表達最多的一個亞型。TGFβ生物活性配體由同源或異源二聚體多肽構(gòu)成，合成的前體分子通過內(nèi)切酶水解后成熟。活化的TGFβ二聚體通過細胞膜上的TGFβⅠ型和Ⅱ型受體（TβRⅠ和TβRⅡ）介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶使之活化，調(diào)控下游目標(biāo)蛋白的活性。在纖維化形成過程中，組織和血液中活化TGFβ1的水平升高，過表達的TGFβ1可以結(jié)合HSC表面的受體，上調(diào)ECM表達，誘導(dǎo)纖維形成?；罨疕SC及肌成纖維細胞又可持續(xù)地刺激自身分泌TGFβ1，進一步激活HSC。HSC經(jīng)上述旁分泌和自分泌途徑激活，是肝纖維化形成的重要機制。TGFβ通過經(jīng)典的TGFβ/Smad信號通路介導(dǎo)HSC轉(zhuǎn)分化。在TGFβ的刺激下，調(diào)節(jié)Smad（Smad2、3）募集到TGFβ受體上，通過磷酸化使其活化，活化的Smad復(fù)合物，同時募集轉(zhuǎn)錄共激活分子（如P300/CBP、MSG1）和共抑制分子（TGIF、Ski/SnoN)。隨后，p-Smad2/3與Smad4形成復(fù)合物，然后轉(zhuǎn)定位于核內(nèi)，調(diào)節(jié)下游促纖維化基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致纖維化的形成?；罨腟mad2/3與Smad4形成復(fù)合物促進HSC對Ⅰ型和Ⅲ型膠原的轉(zhuǎn)錄。相反，在自動反饋調(diào)節(jié)過程中，Smad7扮演一個負調(diào)節(jié)因子作用。TGFβ也可以調(diào)節(jié)活化的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，包括細胞外信號調(diào)節(jié)激酶、p38 MAPK和c-jun N-末端激酶，促進HSC活化。CD147是一個存在于HSC表面的糖基化跨膜蛋白，可以由TGFβ1的刺激升高，近期研究顯示，TGFβ1-CD147在調(diào)節(jié)HSC活化過程中發(fā)揮重要作用。肝纖維化患者血清和肝組織高表達CXC趨化因子CXCL6，研究顯示CXCL6可以刺激Kupffer細胞釋放TGFβ，誘導(dǎo)HSC活化。

1.2  PDGF與HSC活化

PDGF是一種血清衍生成分，是平滑肌細胞、成纖維細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞生長所必需的因子，由肝細胞產(chǎn)生。PDGF家族是由4個基因編碼的產(chǎn)物，由5個二聚體亞型組成：PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-CC、PDGF-DD和PDGF-AB異二聚體。這種生長因子家族在成人胚胎發(fā)育和傷口愈合中起著至關(guān)重要的作用。PDGF的功能性受體由PDGFRα/α和PDGFRβ/β同源二聚體和PDGFRα/β異源二聚體組成，與PDGF結(jié)合，激活由2個基因編碼的PDGFRA和PDGFRB受體蛋白-酪氨酸激酶發(fā)揮作用，是HSC和肌成纖維細胞潛在的趨化因子。在人或嚙齒動物肝損傷時， PDGFRβ在HSC中被誘導(dǎo)表達，PDGFRβ基因缺失減輕了四氯化碳（CCl4）和膽管結(jié)扎小鼠模型的肝損傷，抑制了纖維化形成。有文獻報道，普萘洛爾通過抑制PDGFR/Akt磷酸化，抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的LX-2（人HSC細胞株）細胞遷移和纖維化形成。在PDGF-BB處理的HSC來源的外泌體（細胞外囊泡）中富含PDGFRα，其形成依賴于Src同源性2結(jié)構(gòu)域酪氨酸磷酸酶2途徑，參與肝纖維化的發(fā)展。

1.3  VEGF與HSC活化

VEGF由肝竇內(nèi)皮細胞和HSC釋放，誘導(dǎo)HSC增殖和血管新生。研究顯示，給模型小鼠（C57BL/6小鼠膽管結(jié)扎后進行膽囊空腸吻合術(shù)，重建膽道流，產(chǎn)生纖維化逆轉(zhuǎn)模型）注射VEGF中和抗體和對照抗體，發(fā)現(xiàn)VEGF中和抗體阻斷纖維化的進展，但同時也妨礙了肝組織修復(fù)和纖維化逆轉(zhuǎn)。所以拮抗VEGF可能對組織再生和細胞因子信號產(chǎn)生一些不良的抑制，以及抑制正常血管的形成。

1.4  CTGF與HSC活化

CTGF是一種在組織損傷應(yīng)答中，通過多種細胞表達的基質(zhì)細胞蛋白，可作為纖維化的一般標(biāo)志物。CTGF可以調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、黏附、趨化、遷移、凋亡和細胞外基質(zhì)生成，在正常的肝臟中表達水平較低，在纖維化患者肝臟中和肝纖維化動物模型中表達顯著上調(diào)。miR-19-5p主要表達于靜止的小鼠HSC中，其作用靶點為CTGF，直接抑制CTGF的產(chǎn)生。肝纖維化小鼠肝臟或活化的原代小鼠HSC中CTGF表達上調(diào)，與此時miR-19-5p下調(diào)有關(guān)。

2  PPAR與HSC活化

敲除PPARγ后可使原代HSC向肌成纖維轉(zhuǎn)分化，恢復(fù)PPARγ能夠使活化的HSC逆轉(zhuǎn)為靜止表型。特異性干擾HSC 的PPARγ可加劇小鼠對CCl4誘導(dǎo)的肝損傷和纖維化應(yīng)答。PPARδ激動劑KD3010可以緩解CCl4和膽管結(jié)扎誘導(dǎo)的小鼠肝損傷和纖維化。選擇性PPARγ抑制劑GW9662可有效地消除川芎嗪對HSC細胞周期功能的抑制作用。 Elafibranor是一種PPARα-PPARδ激動劑，一項隨機、雙盲、安慰劑對照試驗顯示，持續(xù)服用Elafibranor 1年（120 mg/d），可以逆轉(zhuǎn)非酒精性脂肪性肝炎纖維化，不使其進一步惡化，其作用機制可能與HSC和肝細胞有關(guān)。

3  miRNA與HSC活化

多項研究發(fā)現(xiàn)，miRNA的表觀遺傳調(diào)節(jié)與HSC活化相關(guān)。miRNA是小編碼RNA（長度約22個核苷酸），通過改變mRNA降解，調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因的表達。miRNA可以控制HSC的活化和非活化。從正常肝臟分離的人HSC表達低數(shù)量的miRNA（n=259），細胞經(jīng)培養(yǎng)活化后，miRNA譜中有47個下調(diào)，212個上調(diào)。促纖維化miRNA包括miR-21、miR-221、miR-222、miR-27等。相反，抗纖維化miRNA包括miR-378a、miR-148a、miR-29、miR-15b、miR-16、miR-122、miR-133a、miR-195、miR-150、miR-194等。

近期研究發(fā)現(xiàn)，過表達miR-29J家族主要通過下調(diào)PI3K/AKT信號通路誘導(dǎo)HSC凋亡，減少ECM累積；miR-34家族通過誘導(dǎo)HSC活化促進肝纖維化；miR-199家族和miR-200家族是ECM沉積和促纖維化細胞因子釋放的因素。固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白-1c在抑制HSC活化中發(fā)揮重要作用。在體外培養(yǎng)的HSC（分離自C57BL/6J ob/ob 小鼠）中miR-27a/b-3p可以降低固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白-1c和肝臟X受體α水平，增加α平滑肌肌動蛋白和Ⅰ型膠原的表達。而脂肪源性激素瘦素在體內(nèi)和體外均可以上調(diào)HSC miR-27a/b-3p水平，在肝纖維化中起重要促進作用。抑制miR-203表達與促進HSC增殖相關(guān)，進一步研究發(fā)現(xiàn)，Smad是miR-203的直接相關(guān)靶位。在HSC中的miR-146a-5p通過抑制TGFβ/Smad和LPS/NF-κB/Bambi信號通路抑制肝纖維化。miR-30a在肝纖維化小鼠中顯著下調(diào)，其過表達則能阻斷膽管結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的形成，下調(diào)ECM的生成。在小鼠纖維化肝組織中，miR-30a通過抑制自噬相關(guān)蛋白Beclin1的下游效應(yīng)物，抑制HSC自噬，從而增加HSC中脂滴累積，抑制肝纖維化。

4  長非編碼RNA與HSC活化

除了miRNA， lncRNA也參與肝纖維化形成。有研究觀察到，在肝纖維化小鼠模型中l(wèi)ncRNA-p21的表達顯著降低。過表達lncRNA-p21可抑制體外培養(yǎng)的HSC活化，且可以使活化HSC逆轉(zhuǎn)為靜止表型。在mRNA和蛋白水平，lncRNA-p21均能促進p21的上調(diào)，其通過增加p21的表達，抑制原代HSC的細胞周期進程和增殖。與健康者相比，肝硬化患者血清中l(wèi)ncRNA-p21表達水平顯著降低，在失代償期患者中更加明顯。lncRNA-p21或許可以作為肝硬化患者，尤其是失代償期肝硬化患者診斷及治療的監(jiān)測指標(biāo)。近期另一研究發(fā)現(xiàn)，肝臟富含的肝纖維化相關(guān)lncRNA1（lnc-LFAR1），有促進肝纖維化的作用。體外沉默lnc-LFAR1可抑制HSC活化和減少TGFβ1誘導(dǎo)的肝細胞凋亡。 

5  外泌體與HSC活化

外泌體是直徑約為50~150 nm的細胞源性的細胞外囊泡，由多囊泡體的限制性膜通過向內(nèi)萌芽形成，并且在多囊泡體與細胞質(zhì)膜融合時被釋放到細胞外，通過傳遞特異性成分到靶細胞，促進細胞間信息傳遞。許多細胞成分，包括mRNA、miRNA和蛋白，可能從帶有膜囊泡的細胞中分泌到細胞外，進入血液、尿液或唾液等體液。CCN2被包裹在外泌體中分泌出HSC外，介導(dǎo)HSC間的信息傳遞。外泌體性CCN2可能通過結(jié)合其他外泌體成分，放大或縮小纖維形成信號。由于其可進入體液，故可作為1種非侵入性生物標(biāo)志物，用于評估肝纖維化的程度。外泌體可以介導(dǎo)HSC細胞間miRNA傳遞，Chen等發(fā)現(xiàn)，CCN2在纖維化、脂肪肝、培養(yǎng)活化或經(jīng)酒精處理的原代小鼠HSC中上調(diào)，這種上調(diào)與miR-214的下調(diào)有關(guān)。為了進一步研究miR-214和外泌體關(guān)系，他們分離HSC外泌體，發(fā)現(xiàn)其中存在miR-214，應(yīng)用外泌體抑制劑GW4869預(yù)處理細胞后，此外泌體中miR-214表達降低。后續(xù)實驗發(fā)現(xiàn)，通過外泌體能夠?qū)X-2內(nèi)miR-214傳遞到其他LX-2或人HepG2細胞，導(dǎo)致CCN2下游物質(zhì)包括α平滑肌肌動蛋白或膠原的產(chǎn)生抑制。后續(xù)Chen等確定了HSC源性外泌體在HSC上的受體是整合素和硫酸乙酰肝素蛋白多糖。細胞通過外泌體傳遞信號，可能是細胞之間相互作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。Devhave等發(fā)現(xiàn)原代HSC或LX-2暴露于HCV感染的肝細胞源性外泌體（HCV-exo）中，可致促纖維形成標(biāo)志物增加。HCV-exo運載miR-19和靶向SOCS3到HSC中，促進纖維化標(biāo)志基因的產(chǎn)生。與健康志愿者和非HCV相關(guān)肝纖維化患者相比，在HCV感染的肝細胞和慢性HCV導(dǎo)致肝纖維化的患者血清外泌體中，miR-19a呈高表達。上述研究進一步提示，體液外泌體成分的檢測或可作為非侵入性肝病診斷的手段之一。在以棕櫚酸誘導(dǎo)脂毒性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型中，與賦形劑處理的肝細胞相比，用棕桐酸處理肝細胞得到的外泌體與LX-2共培養(yǎng)，可使后者纖維化發(fā)展相關(guān)基因的表達明顯增強，提示外泌體可能在調(diào)節(jié)肝細胞和HSC間的串話中起重要作用。CCl4誘導(dǎo)肝損傷時，在HSC中肝細胞源性外泌體介導(dǎo)的TLR3活化，通過增加γδ T淋巴細胞產(chǎn)生IL-17A加重肝纖維化，提示外泌體在細胞間傳遞信息，可能參與調(diào)控細胞免疫。

6  展望

本文受篇幅所限，無法將已知的所有影響HSC活化的因子及信號通路作系統(tǒng)性總結(jié)，僅對影響HSC的幾種主要細胞因子和PPARγ的近期研究結(jié)果以及近年的研究熱點——miRNA、lncRNA、外泌體等與HSC活化的關(guān)系進行了綜述，旨在介紹治療肝纖維化的潛在新靶點。纖維化的形成機制十分復(fù)雜，僅著眼于單一的環(huán)節(jié)或靶點抗肝纖維化恐難以收效，這可能是至今仍未有基于某一基因或蛋白質(zhì)功能開發(fā)治療肝纖維化的化學(xué)藥物和生物藥物的原因之一。將作用于HSC活化的不同靶點的化學(xué)藥物或中藥成分合理組成復(fù)方，可能將在肝纖維化治療學(xué)上有所突破。