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要做mtt實驗，藥不溶于水，干怎么配呢？ 用dmso的話，怎么控制它的量，怎么過濾 用DMSO稀釋，配成1mg/ml，再10倍的稀釋（可以用培養(yǎng)液稀釋到10負(fù)n次方）這樣千分之一的DMSO對細(xì)胞的毒性很小，不用過濾。 后面的稀釋液用無菌的就可以了。 你的意思是，用dmso直接配成1mg/ml的儲備液，在用培養(yǎng)基稀釋 不過濾也能保證無菌嗎？ 是的。因為DMSO是劇毒所以細(xì)菌之類的在里面長不起來。 請問： 1）用DMSO稀釋，配成1mg/ml，（這時DMSO濃度是100%），再10倍的稀釋（這時是10%），取20ul到20ul 中，（這時是1%）吧？還是再同樣稀釋到 0.1%？ 2）所有的有機(jī)提取物或說是不溶于水的物質(zhì)都可以用DMSO 溶嗎？如果是按上述方法逐級稀釋的話，藥物濃度也就跟著下來了，初篩的話藥濃要達(dá)多少的？是終濃度是100ug/ml嗎？可以直接加1mg的藥然后加100ul的DMSO，再加900ul 的稀釋液進(jìn)行稀釋嗎？這樣終濃也是1%的，而且藥濃是100ug/ml，這樣可以嗎 ？ 3）稀釋液是用培養(yǎng)基是吧，有人也說可以用PBS緩沖液 或三蒸水，我也不知道大家用的都是什么的，請指教 4）有機(jī)溶劑的溶解可以用別的嗎？不過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，好象對于不同細(xì)胞株，不同有機(jī)試劑對他們的影響不近相同，不知道有沒有比較好的通用的溶劑和濃度能滿足不同的藥物溶解和對細(xì)胞毒害作用小的要求。 多謝，多謝。 DMSO不太行的話可以試試超聲,我們這里就是這么做的 看看有機(jī)溶劑，比如說乙醇，適不適合你的藥物， 1 如果是在sigma 買的藥：那里會有關(guān)于要物的詳細(xì)信息。如果不容水通常用DMSO 或者乙醇溶。 如果自己合成的藥物最好自己嘗試了。 一般不容水的藥物在DMSO 和乙醇中的溶解量是4mg/ml 左右，配藥的濃度 不要太高度。所以你配藥時可配制10－2 ，10－3MOL/L 的母液。 2 具體操作：先確定你要配制母液的濃度：如 10－3 M。稱藥后加DMSO溶解就可以了。 稱取2到5mg 的藥物。 需要加入的DMSO的體積ml=藥物的質(zhì)量mg× 10－3，再除以藥物的分子量。 3 藥物配好后混勻，必須達(dá)到透明的程度。10ul 分裝，高濃度分裝比較好。 4 藥物的稀釋10ul 加990ul稀釋液,得到10－5M. 取100ul ,加900ul.得到藥物的濃度是10－6M. 依次類推，直到你需要的濃度。 5 稀釋液最好是無血清的培養(yǎng)基。 6 DMSO 配好的藥物，如果短時間給藥2h，不用過濾消毒。長時間給藥24h，要考慮到無菌，保險起見，加藥前要過濾。最好是算好你要用的藥量，一次過濾的多一點(diǎn)。 |
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