1 2008 ... id='C3'>中心法則提出，遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄為RNA，再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質(zhì).表觀遺傳學(xué)指出，基因表達(dá)的每個(gè)環(huán)節(jié)都是被嚴(yán)密調(diào)控的，相同的核苷酸序列，可表達(dá)出可遺傳的不同遺傳信息，其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)[1, 2]，它存在于基因的啟動(dòng)子區(qū)時(shí)，會(huì)抑制基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步影響細(xì)胞的分化生長(zhǎng).DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)有促進(jìn)基因表達(dá)的功能，它在白血病細(xì)胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達(dá)[5-7].由于RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜、性質(zhì)的不穩(wěn)定及研究方法的限制等，人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學(xué)中的重要作用，直到2011年發(fā)現(xiàn)首個(gè)RNA化學(xué)修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)的去甲基酶[8]，才發(fā)現(xiàn)RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾也是表觀遺傳學(xué)的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2011 ... id='C3'>中心法則提出，遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄為RNA，再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質(zhì).表觀遺傳學(xué)指出，基因表達(dá)的每個(gè)環(huán)節(jié)都是被嚴(yán)密調(diào)控的，相同的核苷酸序列，可表達(dá)出可遺傳的不同遺傳信息，其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)[1, 2]，它存在于基因的啟動(dòng)子區(qū)時(shí)，會(huì)抑制基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步影響細(xì)胞的分化生長(zhǎng).DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)有促進(jìn)基因表達(dá)的功能，它在白血病細(xì)胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達(dá)[5-7].由于RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜、性質(zhì)的不穩(wěn)定及研究方法的限制等，人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學(xué)中的重要作用，直到2011年發(fā)現(xiàn)首個(gè)RNA化學(xué)修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)的去甲基酶[8]，才發(fā)現(xiàn)RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾也是表觀遺傳學(xué)的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2015 ... id='C3'>中心法則提出，遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄為RNA，再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質(zhì).表觀遺傳學(xué)指出，基因表達(dá)的每個(gè)環(huán)節(jié)都是被嚴(yán)密調(diào)控的，相同的核苷酸序列，可表達(dá)出可遺傳的不同遺傳信息，其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)[1, 2]，它存在于基因的啟動(dòng)子區(qū)時(shí)，會(huì)抑制基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步影響細(xì)胞的分化生長(zhǎng).DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)有促進(jìn)基因表達(dá)的功能，它在白血病細(xì)胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?；⒘姿峄?、泛素化等抑制或激活基因表達(dá)[5-7].由于RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜、性質(zhì)的不穩(wěn)定及研究方法的限制等，人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學(xué)中的重要作用，直到2011年發(fā)現(xiàn)首個(gè)RNA化學(xué)修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)的去甲基酶[8]，才發(fā)現(xiàn)RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾也是表觀遺傳學(xué)的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2013 ... id='C3'>中心法則提出，遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄為RNA，再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質(zhì).表觀遺傳學(xué)指出，基因表達(dá)的每個(gè)環(huán)節(jié)都是被嚴(yán)密調(diào)控的，相同的核苷酸序列，可表達(dá)出可遺傳的不同遺傳信息，其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)[1, 2]，它存在于基因的啟動(dòng)子區(qū)時(shí)，會(huì)抑制基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步影響細(xì)胞的分化生長(zhǎng).DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)有促進(jìn)基因表達(dá)的功能，它在白血病細(xì)胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達(dá)[5-7].由于RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜、性質(zhì)的不穩(wěn)定及研究方法的限制等，人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學(xué)中的重要作用，直到2011年發(fā)現(xiàn)首個(gè)RNA化學(xué)修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)的去甲基酶[8]，才發(fā)現(xiàn)RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾也是表觀遺傳學(xué)的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2000 ... id='C3'>中心法則提出，遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄為RNA，再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質(zhì).表觀遺傳學(xué)指出，基因表達(dá)的每個(gè)環(huán)節(jié)都是被嚴(yán)密調(diào)控的，相同的核苷酸序列，可表達(dá)出可遺傳的不同遺傳信息，其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)[1, 2]，它存在于基因的啟動(dòng)子區(qū)時(shí)，會(huì)抑制基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步影響細(xì)胞的分化生長(zhǎng).DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)有促進(jìn)基因表達(dá)的功能，它在白血病細(xì)胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?；⒘姿峄?、泛素化等抑制或激活基因表達(dá)[5-7].由于RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜、性質(zhì)的不穩(wěn)定及研究方法的限制等，人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學(xué)中的重要作用，直到2011年發(fā)現(xiàn)首個(gè)RNA化學(xué)修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)的去甲基酶[8]，才發(fā)現(xiàn)RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾也是表觀遺傳學(xué)的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2007 ... id='C3'>中心法則提出，遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄為RNA，再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質(zhì).表觀遺傳學(xué)指出，基因表達(dá)的每個(gè)環(huán)節(jié)都是被嚴(yán)密調(diào)控的，相同的核苷酸序列，可表達(dá)出可遺傳的不同遺傳信息，其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)[1, 2]，它存在于基因的啟動(dòng)子區(qū)時(shí)，會(huì)抑制基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步影響細(xì)胞的分化生長(zhǎng).DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)有促進(jìn)基因表達(dá)的功能，它在白血病細(xì)胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達(dá)[5-7].由于RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜、性質(zhì)的不穩(wěn)定及研究方法的限制等，人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學(xué)中的重要作用，直到2011年發(fā)現(xiàn)首個(gè)RNA化學(xué)修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)的去甲基酶[8]，才發(fā)現(xiàn)RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾也是表觀遺傳學(xué)的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 7 2011 ... id='C3'>中心法則提出，遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄為RNA，再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質(zhì).表觀遺傳學(xué)指出，基因表達(dá)的每個(gè)環(huán)節(jié)都是被嚴(yán)密調(diào)控的，相同的核苷酸序列，可表達(dá)出可遺傳的不同遺傳信息，其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)[1, 2]，它存在于基因的啟動(dòng)子區(qū)時(shí)，會(huì)抑制基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步影響細(xì)胞的分化生長(zhǎng).DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)有促進(jìn)基因表達(dá)的功能，它在白血病細(xì)胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達(dá)[5-7].由于RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜、性質(zhì)的不穩(wěn)定及研究方法的限制等，人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學(xué)中的重要作用，直到2011年發(fā)現(xiàn)首個(gè)RNA化學(xué)修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)的去甲基酶[8]，才發(fā)現(xiàn)RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾也是表觀遺傳學(xué)的重要環(huán)節(jié)[9]. ... ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C9'>由于檢測(cè)方法的局限，m6A的研究長(zhǎng)時(shí)間沒有取得重大進(jìn)步.高效液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測(cè)其動(dòng)態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測(cè)出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中，尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中，并且在大腦的發(fā)育中，m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細(xì)胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中，mRNA上m6A含量也是動(dòng)態(tài)變化的[43].這些m6A的動(dòng)態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調(diào)控功能. ... ... [8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測(cè)出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中，尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中，并且在大腦的發(fā)育中，m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細(xì)胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中，mRNA上m6A含量也是動(dòng)態(tài)變化的[43].這些m6A的動(dòng)態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調(diào)控功能. ... ... id='C23'>目前發(fā)現(xiàn)的m6A的去甲基酶只有哺乳動(dòng)物細(xì)胞的FTO[8]及ALKBH5[31].它們同屬于二價(jià)鐵和α-酮戊二酸依賴的雙加氧酶AlkB家族，人體中發(fā)現(xiàn)有9個(gè)AlkB家族蛋白，包括ALKBH1-8和FTO.降低FTO在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量會(huì)引起RNA上m6A水平的升高.FTO主要定位在細(xì)胞核中.ALKBH5與RNA的相互作用力比FTO強(qiáng)，因?yàn)橹苯佑妹庖吖渤恋淼姆椒ň桶l(fā)現(xiàn)了其作用的RNA底物.此外在小鼠的睪丸中ALKBH5有很高的表達(dá)量，敲除ALKBH5的小鼠精子發(fā)育出現(xiàn)異常. ... ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的，它將直接證明m6A在植物中也是動(dòng)態(tài)可逆發(fā)揮重要的調(diào)控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多，目前相關(guān)研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛，有可能識(shí)別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA，也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60]，還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現(xiàn)和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細(xì)致的工作.目前我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了擬南芥中的m6A的一個(gè)去甲基酶，可以調(diào)控?cái)M南芥的開花時(shí)間(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表). ... 1 2010 ... id='C3'>中心法則提出，遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄為RNA，再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質(zhì).表觀遺傳學(xué)指出，基因表達(dá)的每個(gè)環(huán)節(jié)都是被嚴(yán)密調(diào)控的，相同的核苷酸序列，可表達(dá)出可遺傳的不同遺傳信息，其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)[1, 2]，它存在于基因的啟動(dòng)子區(qū)時(shí)，會(huì)抑制基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步影響細(xì)胞的分化生長(zhǎng).DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5hmC)有促進(jìn)基因表達(dá)的功能，它在白血病細(xì)胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?；⒘姿峄?、泛素化等抑制或激活基因表達(dá)[5-7].由于RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜、性質(zhì)的不穩(wěn)定及研究方法的限制等，人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學(xué)中的重要作用，直到2011年發(fā)現(xiàn)首個(gè)RNA化學(xué)修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)的去甲基酶[8]，才發(fā)現(xiàn)RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾也是表觀遺傳學(xué)的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2011 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... 2 1990 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 1 1988 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... 3 1975 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... [13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 1 1976 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... 1 1975 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... 1 1975 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... 2 1977 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 1 1978 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... 2 1980 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... 2 1981 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... 2 2002 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... 2 1969 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 1 1968 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... 2 1987 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學(xué)修飾中[10]，m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A)，相當(dāng)于平均每條mRNA含有3-5個(gè)m6A [11-13].自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以來，它在病毒[14, 15]、哺乳動(dòng)物細(xì)胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類，m6A還發(fā)現(xiàn)于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA，snRNA)[26]以及長(zhǎng)非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)中.由于m6A不會(huì)干擾堿基互補(bǔ)配對(duì)，在反轉(zhuǎn)錄時(shí)不會(huì)產(chǎn)生突變，致使其檢測(cè)比較困難，長(zhǎng)久以來研究比較緩慢.直到第一個(gè)RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現(xiàn)，揭示m6A是動(dòng)態(tài)可逆的，預(yù)示著具有調(diào)控基因表達(dá)的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領(lǐng)域——RNA表觀遺傳學(xué)(亦稱表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 3 1997 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... ... id='C18'>在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究發(fā)現(xiàn)，METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個(gè)十分穩(wěn)定的異源二聚體，METTL3作為催化中心，METTL4主要結(jié)合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關(guān)的蛋白，對(duì)METTL3-METTL14復(fù)合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點(diǎn)的定位有重要作用，敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現(xiàn)，KIAA1429也是甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的重要成分[55]，但是具體功能還未有詳細(xì)報(bào)道. ... 1 2014 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... 1 2014 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... 2 2014 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... 6 2013 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... ... id='C9'>由于檢測(cè)方法的局限，m6A的研究長(zhǎng)時(shí)間沒有取得重大進(jìn)步.高效液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測(cè)其動(dòng)態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測(cè)出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中，尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中，并且在大腦的發(fā)育中，m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細(xì)胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中，mRNA上m6A含量也是動(dòng)態(tài)變化的[43].這些m6A的動(dòng)態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調(diào)控功能. ... ... , 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測(cè)出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中，尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中，并且在大腦的發(fā)育中，m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細(xì)胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中，mRNA上m6A含量也是動(dòng)態(tài)變化的[43].這些m6A的動(dòng)態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調(diào)控功能. ... ... id='C23'>目前發(fā)現(xiàn)的m6A的去甲基酶只有哺乳動(dòng)物細(xì)胞的FTO[8]及ALKBH5[31].它們同屬于二價(jià)鐵和α-酮戊二酸依賴的雙加氧酶AlkB家族，人體中發(fā)現(xiàn)有9個(gè)AlkB家族蛋白，包括ALKBH1-8和FTO.降低FTO在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量會(huì)引起RNA上m6A水平的升高.FTO主要定位在細(xì)胞核中.ALKBH5與RNA的相互作用力比FTO強(qiáng)，因?yàn)橹苯佑妹庖吖渤恋淼姆椒ň桶l(fā)現(xiàn)了其作用的RNA底物.此外在小鼠的睪丸中ALKBH5有很高的表達(dá)量，敲除ALKBH5的小鼠精子發(fā)育出現(xiàn)異常. ... ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的，它將直接證明m6A在植物中也是動(dòng)態(tài)可逆發(fā)揮重要的調(diào)控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多，目前相關(guān)研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛，有可能識(shí)別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA，也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60]，還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現(xiàn)和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細(xì)致的工作.目前我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了擬南芥中的m6A的一個(gè)去甲基酶，可以調(diào)控?cái)M南芥的開花時(shí)間(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表). ... 5 2012 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... ... id='C9'>由于檢測(cè)方法的局限，m6A的研究長(zhǎng)時(shí)間沒有取得重大進(jìn)步.高效液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測(cè)其動(dòng)態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測(cè)出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中，尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中，并且在大腦的發(fā)育中，m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細(xì)胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中，mRNA上m6A含量也是動(dòng)態(tài)變化的[43].這些m6A的動(dòng)態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調(diào)控功能. ... ... id='C10'>2012年，兩個(gè)課題組[32, 33]分別同時(shí)開發(fā)了m6A的高通量測(cè)序技術(shù)(m6A-seq或MeRIP)，極大推動(dòng)了m6A的研究.該技術(shù)是將mRNA切成100個(gè)核苷酸(100 nt)左右的片段，采用m6A抗體親和富集沉淀的方法，將富集出來的攜帶有m6A的RNA片段和對(duì)照(input)分別建庫，可以得到分辨率在200 nt左右的全轉(zhuǎn)錄組m6A分布圖.研究發(fā)現(xiàn)，在人和老鼠中，轉(zhuǎn)錄組m6A分布在mRNA和non-coding RNA (ncRNA)，主要富集在3′非翻譯區(qū)(3′UTR)，其次是長(zhǎng)的外顯子(exon)上.m6A也在內(nèi)含子(intron)上出現(xiàn)，說明m6A是在剪接前或剪接時(shí)被加到轉(zhuǎn)錄本上.從人類到老鼠細(xì)胞，從正常細(xì)胞到癌癥細(xì)胞，到受外界各種刺激的細(xì)胞，測(cè)序結(jié)果顯示很多m6A位點(diǎn)都是保守的，但也有很多m6A位點(diǎn)是物種特異、細(xì)胞系特異，以及細(xì)胞受到外界脅迫會(huì)出現(xiàn)特異的m6A位點(diǎn). ... ... id='C12'>擬南芥上的m6A與動(dòng)物細(xì)胞中的含量水平相當(dāng)[32, 35, 43].2014年擬南芥Can-0和Hen-16兩個(gè)品種轉(zhuǎn)錄組RNA上m6A的高通量測(cè)序[43]結(jié)果顯示，與哺乳動(dòng)物細(xì)胞相比，m6A在mRNA上的分布具有特異性，m6A不僅集中在終止密碼子及3′UTR，還集中在起始密碼子(start codon)附近，意味著m6A可能在植物中存在獨(dú)特的功能.此外，研究發(fā)現(xiàn)在起始密碼子附近含有m6A的基因很多都是葉綠體相關(guān)蛋白基因，并且一些光合作用相關(guān)的基因mRNA上也含有m6A，這說明m6A也與光合作用相關(guān).在植物中m6A的保守序列與哺乳動(dòng)物相同，都是RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U).擬南芥中位于3′UTR區(qū)的m6A傾向于與基因表達(dá)量負(fù)相關(guān)，而在5′端的m6A與基因表達(dá)正相關(guān).植物上mRNA的起始密碼子附近的m6A功能需要我們進(jìn)一步探索. ... 6 2012 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... ... , 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... ... id='C9'>由于檢測(cè)方法的局限，m6A的研究長(zhǎng)時(shí)間沒有取得重大進(jìn)步.高效液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測(cè)其動(dòng)態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測(cè)出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中，尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中，并且在大腦的發(fā)育中，m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細(xì)胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中，mRNA上m6A含量也是動(dòng)態(tài)變化的[43].這些m6A的動(dòng)態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調(diào)控功能. ... ... [33].m6A在各種癌細(xì)胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中，mRNA上m6A含量也是動(dòng)態(tài)變化的[43].這些m6A的動(dòng)態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調(diào)控功能. ... ... id='C10'>2012年，兩個(gè)課題組[32, 33]分別同時(shí)開發(fā)了m6A的高通量測(cè)序技術(shù)(m6A-seq或MeRIP)，極大推動(dòng)了m6A的研究.該技術(shù)是將mRNA切成100個(gè)核苷酸(100 nt)左右的片段，采用m6A抗體親和富集沉淀的方法，將富集出來的攜帶有m6A的RNA片段和對(duì)照(input)分別建庫，可以得到分辨率在200 nt左右的全轉(zhuǎn)錄組m6A分布圖.研究發(fā)現(xiàn)，在人和老鼠中，轉(zhuǎn)錄組m6A分布在mRNA和non-coding RNA (ncRNA)，主要富集在3′非翻譯區(qū)(3′UTR)，其次是長(zhǎng)的外顯子(exon)上.m6A也在內(nèi)含子(intron)上出現(xiàn)，說明m6A是在剪接前或剪接時(shí)被加到轉(zhuǎn)錄本上.從人類到老鼠細(xì)胞，從正常細(xì)胞到癌癥細(xì)胞，到受外界各種刺激的細(xì)胞，測(cè)序結(jié)果顯示很多m6A位點(diǎn)都是保守的，但也有很多m6A位點(diǎn)是物種特異、細(xì)胞系特異，以及細(xì)胞受到外界脅迫會(huì)出現(xiàn)特異的m6A位點(diǎn). ... 1 1979 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... 7 2008 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C12'>擬南芥上的m6A與動(dòng)物細(xì)胞中的含量水平相當(dāng)[32, 35, 43].2014年擬南芥Can-0和Hen-16兩個(gè)品種轉(zhuǎn)錄組RNA上m6A的高通量測(cè)序[43]結(jié)果顯示，與哺乳動(dòng)物細(xì)胞相比，m6A在mRNA上的分布具有特異性，m6A不僅集中在終止密碼子及3′UTR，還集中在起始密碼子(start codon)附近，意味著m6A可能在植物中存在獨(dú)特的功能.此外，研究發(fā)現(xiàn)在起始密碼子附近含有m6A的基因很多都是葉綠體相關(guān)蛋白基因，并且一些光合作用相關(guān)的基因mRNA上也含有m6A，這說明m6A也與光合作用相關(guān).在植物中m6A的保守序列與哺乳動(dòng)物相同，都是RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U).擬南芥中位于3′UTR區(qū)的m6A傾向于與基因表達(dá)量負(fù)相關(guān)，而在5′端的m6A與基因表達(dá)正相關(guān).植物上mRNA的起始密碼子附近的m6A功能需要我們進(jìn)一步探索. ... ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... ... [35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... ... id='C20'>植物中m6A相關(guān)的蛋白酶研究較少，只在擬南芥中研究了它的甲基化轉(zhuǎn)移酶組分MTA (At4g10760，METTL3同源蛋白)和FIP37(At3g54170，WTAP同源蛋白)(圖1).擬南芥MTA最早被命名為EMB1706(Embryo-Defective1706)，是在篩選胚胎發(fā)育損傷的基因時(shí)發(fā)現(xiàn)并命名.MTA主要分布在分裂組織中，特別是生殖器官，頂端分生組織及新生的根毛等，相應(yīng)的m6A在這些組織中含量較高，花苞中含量最高.在擬南芥中敲除MTA會(huì)使種子停留在球形胚階段不能繼續(xù)發(fā)育[35].在mta突變體中部分回補(bǔ)胚發(fā)育期的特定啟動(dòng)子ABI3啟動(dòng)的MTA，可以使mta突變體種子度過胚胎發(fā)育初期繼續(xù)發(fā)育，而進(jìn)入之后的成長(zhǎng)階段后不再表達(dá)MTA，使擬南芥植株的m6A水平下降.可以看到m6A水平的下降會(huì)導(dǎo)致擬南芥頂端優(yōu)勢(shì)的降低，花序節(jié)間長(zhǎng)度變短，蓮座葉變得更小但是更濃密.毛狀體分叉數(shù)目增多，而毛狀體分叉是植物核內(nèi)復(fù)制的指示標(biāo)，說明m6A可能與調(diào)控DNA的復(fù)制相關(guān). ... ... id='C21'>FIP37與MTA有相互作用[35-37].FIP37也表達(dá)在活躍分裂的組織中，如頂端分生組織、幼嫩的葉、成長(zhǎng)的花器官等.FIP37的缺失導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄組在靠近終止密碼子的位置及3′UTR區(qū)域的m6A發(fā)生缺失，5′UTR及蛋白編碼區(qū)的影響較小.FIP37的缺失還會(huì)使擬南芥頂端分生組織過度分化.FIP37與動(dòng)物當(dāng)中的WTAP的功能有所區(qū)別.WTAP定位在核斑點(diǎn)中，影響mRNA的剪接，而FIP37均勻地分布在除核仁以外的核質(zhì)中，沒有發(fā)現(xiàn)其影響RNA的剪接. ... ... id='C39'>m6A在細(xì)胞應(yīng)對(duì)各種外界刺激時(shí)發(fā)揮重要作用.一些外界刺激如熱擊會(huì)改變YTHDF2在細(xì)胞中的定位，由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，保護(hù)特定基因mRNA 5′UTR區(qū)的m6A不被FTO去甲基化，從而發(fā)生cap-independent translation[76].在擬南芥中敲除MTA和FIP37都會(huì)導(dǎo)致跟刺激相關(guān)的很多通路基因發(fā)生變化[35, 37].ECT1也會(huì)響應(yīng)各種刺激，表達(dá)水平上升[72].所以可以看出，m6A在細(xì)胞應(yīng)對(duì)外界刺激時(shí)，發(fā)揮不可忽視的作用. ... 3 2016 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子，m6A像密碼子之上多出的旁注，要解析m6A所攜帶的信息，需要開發(fā)m6A的檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)和研究m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結(jié)合蛋白(讀碼器)的功能.目前，人們已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中找到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的四個(gè)組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30]，兩個(gè)去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31]，和一系列結(jié)合蛋白，并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測(cè)序技術(shù)[32, 33].在植物中，m6A同樣被很早發(fā)現(xiàn)，1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現(xiàn)了m6A，1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現(xiàn)在燕麥胚芽鞘mRNA內(nèi)部存在m6A，1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現(xiàn)m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后，主要還停留在對(duì)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C21'>FIP37與MTA有相互作用[35-37].FIP37也表達(dá)在活躍分裂的組織中，如頂端分生組織、幼嫩的葉、成長(zhǎng)的花器官等.FIP37的缺失導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄組在靠近終止密碼子的位置及3′UTR區(qū)域的m6A發(fā)生缺失，5′UTR及蛋白編碼區(qū)的影響較小.FIP37的缺失還會(huì)使擬南芥頂端分生組織過度分化.FIP37與動(dòng)物當(dāng)中的WTAP的功能有所區(qū)別.WTAP定位在核斑點(diǎn)中，影響mRNA的剪接，而FIP37均勻地分布在除核仁以外的核質(zhì)中，沒有發(fā)現(xiàn)其影響RNA的剪接. ... ... id='C39'>m6A在細(xì)胞應(yīng)對(duì)各種外界刺激時(shí)發(fā)揮重要作用.一些外界刺激如熱擊會(huì)改變YTHDF2在細(xì)胞中的定位，由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，保護(hù)特定基因mRNA 5′UTR區(qū)的m6A不被FTO去甲基化，從而發(fā)生cap-independent translation[76].在擬南芥中敲除MTA和FIP37都會(huì)導(dǎo)致跟刺激相關(guān)的很多通路基因發(fā)生變化[35, 37].ECT1也會(huì)響應(yīng)各種刺激，表達(dá)水平上升[72].所以可以看出，m6A在細(xì)胞應(yīng)對(duì)外界刺激時(shí)，發(fā)揮不可忽視的作用. ... 1 1976 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 1 1979 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 2 1985 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... ... , 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 1 1995 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 1 1977 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標(biāo)記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法，研究發(fā)現(xiàn)m6A出現(xiàn)在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42]，并且這個(gè)保守序列是mRNA上m6A特有的，并沒有出現(xiàn)在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進(jìn)一步拓展成RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U)[11, 32, 33, 40]，后來的全轉(zhuǎn)錄組m6A高通量測(cè)序結(jié)果也證實(shí)了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉(zhuǎn)移酶和結(jié)合蛋白也都傾向于識(shí)別這個(gè)序列.但是由于這個(gè)保守序列的數(shù)量遠(yuǎn)大于m6A的數(shù)量，所以m6A的形成并不是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)單地識(shí)別這個(gè)保守序列，應(yīng)該存在更復(fù)雜的機(jī)理指導(dǎo)m6A的生成. ... 3 2014 ... id='C9'>由于檢測(cè)方法的局限，m6A的研究長(zhǎng)時(shí)間沒有取得重大進(jìn)步.高效液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測(cè)其動(dòng)態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測(cè)出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中，尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中，并且在大腦的發(fā)育中，m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細(xì)胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中，mRNA上m6A含量也是動(dòng)態(tài)變化的[43].這些m6A的動(dòng)態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調(diào)控功能. ... ... id='C12'>擬南芥上的m6A與動(dòng)物細(xì)胞中的含量水平相當(dāng)[32, 35, 43].2014年擬南芥Can-0和Hen-16兩個(gè)品種轉(zhuǎn)錄組RNA上m6A的高通量測(cè)序[43]結(jié)果顯示，與哺乳動(dòng)物細(xì)胞相比，m6A在mRNA上的分布具有特異性，m6A不僅集中在終止密碼子及3′UTR，還集中在起始密碼子(start codon)附近，意味著m6A可能在植物中存在獨(dú)特的功能.此外，研究發(fā)現(xiàn)在起始密碼子附近含有m6A的基因很多都是葉綠體相關(guān)蛋白基因，并且一些光合作用相關(guān)的基因mRNA上也含有m6A，這說明m6A也與光合作用相關(guān).在植物中m6A的保守序列與哺乳動(dòng)物相同，都是RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U).擬南芥中位于3′UTR區(qū)的m6A傾向于與基因表達(dá)量負(fù)相關(guān)，而在5′端的m6A與基因表達(dá)正相關(guān).植物上mRNA的起始密碼子附近的m6A功能需要我們進(jìn)一步探索. ... ... [43]結(jié)果顯示，與哺乳動(dòng)物細(xì)胞相比，m6A在mRNA上的分布具有特異性，m6A不僅集中在終止密碼子及3′UTR，還集中在起始密碼子(start codon)附近，意味著m6A可能在植物中存在獨(dú)特的功能.此外，研究發(fā)現(xiàn)在起始密碼子附近含有m6A的基因很多都是葉綠體相關(guān)蛋白基因，并且一些光合作用相關(guān)的基因mRNA上也含有m6A，這說明m6A也與光合作用相關(guān).在植物中m6A的保守序列與哺乳動(dòng)物相同，都是RRACH (R=G/A，G > A；H=A、C、U).擬南芥中位于3′UTR區(qū)的m6A傾向于與基因表達(dá)量負(fù)相關(guān)，而在5′端的m6A與基因表達(dá)正相關(guān).植物上mRNA的起始密碼子附近的m6A功能需要我們進(jìn)一步探索. ... 2 2013 ... id='C11'>酵母只在減數(shù)分裂期才會(huì)出現(xiàn)m6A，說明m6A對(duì)于酵母的減數(shù)分裂十分重要.2013年酵母中進(jìn)行了分辨率更高(約50 nt)的m6A高通量測(cè)序[44].并且用敲除IME4甲基化轉(zhuǎn)移酶的酵母作為負(fù)對(duì)照，得到更加確信的結(jié)果.測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)m6A在酵母中與人和老鼠模式相同，主要富集在3′UTR區(qū).在酵母中計(jì)算甲基化的轉(zhuǎn)錄本得到的保守序列中心也是GAC. ... ... id='C31'>釀酒酵母中確認(rèn)的Mrb1也是YTH結(jié)構(gòu)域蛋白[44].裂殖酵母中的YTH蛋白是Mmi1[70].它在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的器官里通過抑制減數(shù)分裂相關(guān)的基因來阻止酵母的生殖生長(zhǎng)[71].人們很早就觀察到了這個(gè)現(xiàn)象，但不知具體機(jī)理.現(xiàn)在人們由Mmi1是YTH家族的一員可以推知，Mmi1有可能是通過結(jié)合m6A發(fā)揮作用的. ... 1 2014 ... id='C13'>2014年水稻中mRNA上m6A的測(cè)序也被報(bào)道[45].研究也發(fā)現(xiàn)m6A不僅集中在翻譯終止點(diǎn)附近，也集中在翻譯起始位點(diǎn).水稻的愈傷組織和葉片相比，m6A大部分的位點(diǎn)比較保守，但仍有相當(dāng)一部分呈現(xiàn)組織特異性. ... 1 2015 ... id='C14'>為了追求更高的分辨率，2014年開發(fā)了光交聯(lián)輔助m6A測(cè)序技術(shù)(photo-crosslinking-assisted m6Asequencing strategy，PA-m6A-seq)[46]，在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)摻加4-硫代尿苷(4-thiouridine，4SU)，365 nm紫外光照下帶有4SU的RNA可以與m6A抗體發(fā)生交聯(lián)，從而在m6A位點(diǎn)附近引入突變，將m6A的位置定位到單堿基水平.但是該方法須引入4SU，目前只能在細(xì)胞中使用. ... 1 2015 ... id='C15'>2015年發(fā)展了m6A堿基分辨率交聯(lián)共沉淀技術(shù)(m6A individual-nucleotide-resolution cross-linkingand immunoprecipitation，miCLIP)[47]，用254 nm波長(zhǎng)紫外光誘導(dǎo)m6A抗體與RNA交聯(lián)，逆轉(zhuǎn)錄時(shí)會(huì)產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄停止或突變，從而確定m6A精確位點(diǎn).但是這種方法抗體的依賴性高，不同質(zhì)量的抗體會(huì)得到不同的效率. ... 1 1994 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... 1 1992 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... 1 2011 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... 1 2002 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... 2 2014 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... ... id='C18'>在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究發(fā)現(xiàn)，METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個(gè)十分穩(wěn)定的異源二聚體，METTL3作為催化中心，METTL4主要結(jié)合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關(guān)的蛋白，對(duì)METTL3-METTL14復(fù)合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點(diǎn)的定位有重要作用，敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現(xiàn)，KIAA1429也是甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的重要成分[55]，但是具體功能還未有詳細(xì)報(bào)道. ... 2 2014 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細(xì)胞核裂解液中包含的甲基化轉(zhuǎn)移酶體外對(duì)腺嘌呤進(jìn)行甲基化的實(shí)驗(yàn).1994年人們分離出來與m6A甲基化相關(guān)的30、200和875 kDa復(fù)合物[48]，1997年從200 kDa甲基化酶復(fù)合物中鑒定出70 kDa的第一個(gè)哺乳動(dòng)物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現(xiàn)它與已知的酵母中的調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49]，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)確為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶組分[23].此外先后在多個(gè)物種中找到METTL3的同源蛋白，如擬南芥中的MTA[35]，果蠅中的IME4[50]，均發(fā)現(xiàn)m6A甲基化對(duì)生物體生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控功能.對(duì)METTL3家族進(jìn)行進(jìn)化分析[51]和實(shí)驗(yàn)[52]發(fā)現(xiàn)了m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物第二個(gè)活性組分，它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現(xiàn)MTA時(shí)，通過酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物中第三個(gè)組分.人們又通過WTAP發(fā)現(xiàn)了能與其相互作用的KIAA1429為第四個(gè)組分[30]. ... ... id='C18'>在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究發(fā)現(xiàn)，METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個(gè)十分穩(wěn)定的異源二聚體，METTL3作為催化中心，METTL4主要結(jié)合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關(guān)的蛋白，對(duì)METTL3-METTL14復(fù)合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點(diǎn)的定位有重要作用，敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現(xiàn)，KIAA1429也是甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的重要成分[55]，但是具體功能還未有詳細(xì)報(bào)道. ... 1 2016 ... id='C18'>在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究發(fā)現(xiàn)，METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個(gè)十分穩(wěn)定的異源二聚體，METTL3作為催化中心，METTL4主要結(jié)合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關(guān)的蛋白，對(duì)METTL3-METTL14復(fù)合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點(diǎn)的定位有重要作用，敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現(xiàn)，KIAA1429也是甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的重要成分[55]，但是具體功能還未有詳細(xì)報(bào)道. ... 1 2014 ... id='C18'>在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究發(fā)現(xiàn)，METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個(gè)十分穩(wěn)定的異源二聚體，METTL3作為催化中心，METTL4主要結(jié)合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關(guān)的蛋白，對(duì)METTL3-METTL14復(fù)合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點(diǎn)的定位有重要作用，敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現(xiàn)，KIAA1429也是甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的重要成分[55]，但是具體功能還未有詳細(xì)報(bào)道. ... 1 2012 ... id='C19'>在酵母中，甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物是MIS復(fù)合物，定位在核仁中[56]，由Ime4(METTL3同源蛋白)，Mum2(WTAP同源蛋白)，Slz1(sporulation specific with a leucine zipper motif protein 1)和其他未知蛋白成分組成.Mum2、Slz1是酵母中跟減數(shù)分裂有關(guān)的兩個(gè)蛋白，他們與Ime4都有相互作用.敲除Mum2會(huì)顯著影響Ime4的甲基化能力，但敲除Slz1并沒有直接影響Ime4的甲基化能力.哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞內(nèi)沒有Slz1的同源蛋白，它們的甲基化轉(zhuǎn)移酶主要定位在核小斑而不是核仁中. ... 1 2012 ... id='C24'>擬南芥中沒有FTO的同源蛋白，但是有13個(gè)AlkB家族同源蛋白[57].可以用ALKBH5與這13個(gè)潛在的去甲基酶作序列對(duì)比，預(yù)測(cè)擬南芥中RNA的去甲基酶(圖2). ... 2 2000 ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的，它將直接證明m6A在植物中也是動(dòng)態(tài)可逆發(fā)揮重要的調(diào)控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多，目前相關(guān)研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛，有可能識(shí)別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA，也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60]，還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現(xiàn)和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細(xì)致的工作.目前我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了擬南芥中的m6A的一個(gè)去甲基酶，可以調(diào)控?cái)M南芥的開花時(shí)間(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表). ... ... [58, 61].所以想要發(fā)現(xiàn)和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細(xì)致的工作.目前我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了擬南芥中的m6A的一個(gè)去甲基酶，可以調(diào)控?cái)M南芥的開花時(shí)間(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表). ... 1 2006 ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的，它將直接證明m6A在植物中也是動(dòng)態(tài)可逆發(fā)揮重要的調(diào)控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多，目前相關(guān)研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛，有可能識(shí)別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA，也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60]，還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現(xiàn)和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細(xì)致的工作.目前我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了擬南芥中的m6A的一個(gè)去甲基酶，可以調(diào)控?cái)M南芥的開花時(shí)間(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表). ... 1 2013 ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的，它將直接證明m6A在植物中也是動(dòng)態(tài)可逆發(fā)揮重要的調(diào)控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多，目前相關(guān)研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛，有可能識(shí)別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA，也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60]，還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現(xiàn)和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細(xì)致的工作.目前我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了擬南芥中的m6A的一個(gè)去甲基酶，可以調(diào)控?cái)M南芥的開花時(shí)間(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表). ... 1 2016 ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的，它將直接證明m6A在植物中也是動(dòng)態(tài)可逆發(fā)揮重要的調(diào)控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多，目前相關(guān)研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛，有可能識(shí)別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA，也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60]，還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現(xiàn)和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細(xì)致的工作.目前我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了擬南芥中的m6A的一個(gè)去甲基酶，可以調(diào)控?cái)M南芥的開花時(shí)間(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表). ... 2 2014 ... id='C27'>目前人們發(fā)現(xiàn)的m6A的結(jié)合蛋白主要是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中YTH結(jié)構(gòu)域家族蛋白[62-64].YTH結(jié)構(gòu)域家族蛋白是真核細(xì)胞中一個(gè)非常保守的蛋白家族，生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)在人類、小鼠、果蠅、酵母、擬南芥、水稻中都存在YTH家族蛋白，植物中尤為豐富[65]. ... ... id='C28'>第一個(gè)證明的m6A的結(jié)合蛋白是人類基因YTHDF2[62]，它是一個(gè)細(xì)胞質(zhì)定位的蛋白.YTHDF2在細(xì)胞中有超過3000個(gè)含m6A的目標(biāo)RNA，其中大多是mRNA，小部分為非編碼RNA.YTHDF2對(duì)RNA的識(shí)別區(qū)域也呈現(xiàn)出一個(gè)保守的共有序列G (m6A) C.YHTDF2蛋白含有兩個(gè)功能域，C端含YTH結(jié)構(gòu)域直接結(jié)合m6A，N端可以使mRNA重新定位到P小體，促進(jìn)其降解. ... 1 2016 ... id='C30'>YTHDC1是細(xì)胞核內(nèi)m6A結(jié)合蛋白，并且對(duì)m6A的結(jié)合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導(dǎo)m6A調(diào)控mRNA的剪接[63, 66]，YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進(jìn)其與mRNA的結(jié)合，同時(shí)抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結(jié)合，使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結(jié)合蛋白R(shí)BM15和RBM15B招募甲基化酶復(fù)合物進(jìn)行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進(jìn)XIST介導(dǎo)的X染色體基因轉(zhuǎn)錄本沉默通路[69]. ... 2 2015 ... id='C27'>目前人們發(fā)現(xiàn)的m6A的結(jié)合蛋白主要是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中YTH結(jié)構(gòu)域家族蛋白[62-64].YTH結(jié)構(gòu)域家族蛋白是真核細(xì)胞中一個(gè)非常保守的蛋白家族，生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)在人類、小鼠、果蠅、酵母、擬南芥、水稻中都存在YTH家族蛋白，植物中尤為豐富[65]. ... ... id='C29'>YTHDF1與YTHDF2不同，它的功能是促進(jìn)mRNA的翻譯[64].YTHDF1也定位在細(xì)胞質(zhì)中，與翻譯起始因子EIF3互相作用促進(jìn)翻譯效率.YTHDF1表達(dá)量的降低，會(huì)使其底物mRNA與多聚核糖體的結(jié)合減弱，導(dǎo)致蛋白被翻譯的效率降低. ... 2 2014 ... id='C27'>目前人們發(fā)現(xiàn)的m6A的結(jié)合蛋白主要是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中YTH結(jié)構(gòu)域家族蛋白[62-64].YTH結(jié)構(gòu)域家族蛋白是真核細(xì)胞中一個(gè)非常保守的蛋白家族，生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)在人類、小鼠、果蠅、酵母、擬南芥、水稻中都存在YTH家族蛋白，植物中尤為豐富[65]. ... ... id='C32'>對(duì)其他YTH結(jié)構(gòu)域蛋白，及其他新的m6A的結(jié)合蛋白的研究將是理解m6A如何發(fā)揮功能的關(guān)鍵.YTH結(jié)構(gòu)域蛋白在植物中尤其豐富，擬南芥中就有13個(gè)成員(圖3)，分別為ECT1-12和CPSF30[65]. ... 1 2015 ... id='C30'>YTHDC1是細(xì)胞核內(nèi)m6A結(jié)合蛋白，并且對(duì)m6A的結(jié)合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導(dǎo)m6A調(diào)控mRNA的剪接[63, 66]，YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進(jìn)其與mRNA的結(jié)合，同時(shí)抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結(jié)合，使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結(jié)合蛋白R(shí)BM15和RBM15B招募甲基化酶復(fù)合物進(jìn)行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進(jìn)XIST介導(dǎo)的X染色體基因轉(zhuǎn)錄本沉默通路[69]. ... 1 2014 ... id='C30'>YTHDC1是細(xì)胞核內(nèi)m6A結(jié)合蛋白，并且對(duì)m6A的結(jié)合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導(dǎo)m6A調(diào)控mRNA的剪接[63, 66]，YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進(jìn)其與mRNA的結(jié)合，同時(shí)抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結(jié)合，使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結(jié)合蛋白R(shí)BM15和RBM15B招募甲基化酶復(fù)合物進(jìn)行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進(jìn)XIST介導(dǎo)的X染色體基因轉(zhuǎn)錄本沉默通路[69]. ... 1 2016 ... id='C30'>YTHDC1是細(xì)胞核內(nèi)m6A結(jié)合蛋白，并且對(duì)m6A的結(jié)合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導(dǎo)m6A調(diào)控mRNA的剪接[63, 66]，YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進(jìn)其與mRNA的結(jié)合，同時(shí)抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結(jié)合，使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結(jié)合蛋白R(shí)BM15和RBM15B招募甲基化酶復(fù)合物進(jìn)行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進(jìn)XIST介導(dǎo)的X染色體基因轉(zhuǎn)錄本沉默通路[69]. ... 1 2016 ... id='C30'>YTHDC1是細(xì)胞核內(nèi)m6A結(jié)合蛋白，并且對(duì)m6A的結(jié)合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導(dǎo)m6A調(diào)控mRNA的剪接[63, 66]，YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進(jìn)其與mRNA的結(jié)合，同時(shí)抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結(jié)合，使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結(jié)合蛋白R(shí)BM15和RBM15B招募甲基化酶復(fù)合物進(jìn)行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進(jìn)XIST介導(dǎo)的X染色體基因轉(zhuǎn)錄本沉默通路[69]. ... 1 2011 ... id='C31'>釀酒酵母中確認(rèn)的Mrb1也是YTH結(jié)構(gòu)域蛋白[44].裂殖酵母中的YTH蛋白是Mmi1[70].它在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的器官里通過抑制減數(shù)分裂相關(guān)的基因來阻止酵母的生殖生長(zhǎng)[71].人們很早就觀察到了這個(gè)現(xiàn)象，但不知具體機(jī)理.現(xiàn)在人們由Mmi1是YTH家族的一員可以推知，Mmi1有可能是通過結(jié)合m6A發(fā)揮作用的. ... 1 2006 ... id='C31'>釀酒酵母中確認(rèn)的Mrb1也是YTH結(jié)構(gòu)域蛋白[44].裂殖酵母中的YTH蛋白是Mmi1[70].它在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的器官里通過抑制減數(shù)分裂相關(guān)的基因來阻止酵母的生殖生長(zhǎng)[71].人們很早就觀察到了這個(gè)現(xiàn)象，但不知具體機(jī)理.現(xiàn)在人們由Mmi1是YTH家族的一員可以推知，Mmi1有可能是通過結(jié)合m6A發(fā)揮作用的. ... 2 2005 ... id='C33'>擬南芥中將YTH結(jié)構(gòu)域命名為ECT (evolutionarily conserved C-terminal region ECT domain)結(jié)構(gòu)域[72].因?yàn)樵谘芯繑M南芥應(yīng)對(duì)各種外界刺激時(shí)的一個(gè)關(guān)鍵蛋白CIPK1(Calcineurin B-Like-InteractingProtein Kinase1)時(shí)發(fā)現(xiàn)了有兩個(gè)蛋白與其有特異的相互作用，并且含有一個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域就是ECT結(jié)構(gòu)域.這兩個(gè)蛋白分別為ECT1和ECT2.研究表明ECT1、ECT2通過與CIPK1相互作用，在擬南芥接受外界刺激時(shí)將鈣離子信號(hào)傳遞到細(xì)胞核內(nèi)，具有重要作用.但是，這其中m6A發(fā)揮的功能還沒有研究. ... ... id='C39'>m6A在細(xì)胞應(yīng)對(duì)各種外界刺激時(shí)發(fā)揮重要作用.一些外界刺激如熱擊會(huì)改變YTHDF2在細(xì)胞中的定位，由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，保護(hù)特定基因mRNA 5′UTR區(qū)的m6A不被FTO去甲基化，從而發(fā)生cap-independent translation[76].在擬南芥中敲除MTA和FIP37都會(huì)導(dǎo)致跟刺激相關(guān)的很多通路基因發(fā)生變化[35, 37].ECT1也會(huì)響應(yīng)各種刺激，表達(dá)水平上升[72].所以可以看出，m6A在細(xì)胞應(yīng)對(duì)外界刺激時(shí)，發(fā)揮不可忽視的作用. ... 1 2014 ... id='C34'>另外一個(gè)與YTH結(jié)構(gòu)域相關(guān)的擬南芥中的研究是CPSF30(30 kDa cleavage and polyadenylation specificity factor 30)[73]，它是一個(gè)定位在細(xì)胞核中的蛋白，調(diào)控mRNA的3′端的剪接，通過水楊酸通路對(duì)擬南芥應(yīng)對(duì)外界刺激具有重要作用.然而CPSF30并不包含YTH結(jié)構(gòu)域，它與包含YTH結(jié)構(gòu)域的70 kDa的CPSF30由同一個(gè)基因編輯，卻是不同的剪接體.但是正常的擬南芥中不含YTH結(jié)構(gòu)域的CPSF30這種剪接占到絕大部分.接下來，搞清在什么時(shí)刻含有YTH結(jié)構(gòu)域的剪接體成為主要剪接體，以及它將發(fā)揮什么作用，是個(gè)重要的工作. ... 1 2015 ... id='C37'>m6A調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化.在老鼠胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell，ESCs)中敲除METTL3，會(huì)使細(xì)胞處于初始多能性狀態(tài)，而不向活化多能性狀態(tài)轉(zhuǎn)化，從而抑制進(jìn)一步分化.相反，在老鼠另一個(gè)更易分化的外胚層干細(xì)胞(mouse epiblast stem cells，mEpiSCs)細(xì)胞系中，敲除METTL3會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞穩(wěn)定性減弱，使細(xì)胞快速分化或者細(xì)胞死亡[74]. ... 1 2013 ... id='C38'>m6A調(diào)節(jié)細(xì)胞的節(jié)律[75].很多跟晝夜節(jié)律相關(guān)的基因上都含有m6A，通過敲除細(xì)胞中的甲基化酶METTL3，降低m6A的水平會(huì)導(dǎo)致真核細(xì)胞生物鐘周期變長(zhǎng). ... 1 2015 ... id='C39'>m6A在細(xì)胞應(yīng)對(duì)各種外界刺激時(shí)發(fā)揮重要作用.一些外界刺激如熱擊會(huì)改變YTHDF2在細(xì)胞中的定位，由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，保護(hù)特定基因mRNA 5′UTR區(qū)的m6A不被FTO去甲基化，從而發(fā)生cap-independent translation[76].在擬南芥中敲除MTA和FIP37都會(huì)導(dǎo)致跟刺激相關(guān)的很多通路基因發(fā)生變化[35, 37].ECT1也會(huì)響應(yīng)各種刺激，表達(dá)水平上升[72].所以可以看出，m6A在細(xì)胞應(yīng)對(duì)外界刺激時(shí)，發(fā)揮不可忽視的作用. ...
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