來源：IVD銷售實(shí)戰(zhàn)課堂

作者：體外診斷學(xué)院

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60年代，使用的是放射免疫檢測，優(yōu)點(diǎn)：成本低、靈敏度高，但缺點(diǎn)很明顯，存在放射性污染、有效期短、操作復(fù)雜。

70年代，出現(xiàn)膠體金技術(shù)，雖然操作簡單快速，然而，靈敏度低這一問題，始終無法解決，這也是技術(shù)本身決定的

80年代，出現(xiàn)了酶聯(lián)免疫法和時間分辨法，比如以上海科華為代表的。國產(chǎn)企業(yè)研發(fā)的，酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測產(chǎn)品，成本低且性質(zhì)穩(wěn)定，這也是為什么到目前為止，該方法學(xué)一直沿用至今，而其靈敏度和精確度問題，也決定了他從此不能擔(dān)當(dāng)大任。而時間分辨法雖然一定程度上解決了靈敏度問題，而更多的缺點(diǎn)也暴露出來了，操作復(fù)雜，成本高，反應(yīng)時間長，然而在化學(xué)發(fā)光還沒有問世之前，比如以上海新波為代表的，時間分辨方法學(xué)為主的國產(chǎn)企業(yè)慢慢發(fā)展了起來。如今上海新波也早就被PE完成了戰(zhàn)略收購。

90年代，化學(xué)發(fā)光開始問世，雖然在國內(nèi)的推廣經(jīng)歷了很長的過程，隨著21世紀(jì)的到來，在國外技術(shù)的影響下，化學(xué)發(fā)光開始不斷發(fā)展，尤其是2010年以后，化學(xué)發(fā)光逐步開始了大面積的，時間分辨方法學(xué)替換進(jìn)程，如今在免疫檢測市場，無疑化學(xué)發(fā)光是獨(dú)樹一幟，引領(lǐng)免疫檢測市場，成為免疫診斷主流技術(shù)。

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關(guān)于化學(xué)發(fā)光檢測原理，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析又稱化學(xué)發(fā)光免疫分析,是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析儀器。化學(xué)發(fā)光免疫分析儀包含兩個部分，即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)。化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發(fā)態(tài)的中間體，當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體，回到穩(wěn)定的基態(tài)時，同時發(fā)射出光子,我們可以聯(lián)想以下螢火蟲，一閃一閃的，就是生物化學(xué)反應(yīng)后發(fā)出的的光信號，而化學(xué)發(fā)光的原理也是類似的，無非是原理不同，但道理是一樣的

當(dāng)光子發(fā)出后，化學(xué)發(fā)光免疫分析儀器中核心探測器件也就是光電倍增管，由單光子檢測并傳輸至放大器，并加高壓電流放大，放大器將模擬電流轉(zhuǎn)化為數(shù)字電流，數(shù)字電流將發(fā)光信號由R232數(shù)據(jù)線傳輸給電腦并加以計(jì)算，得出臨床結(jié)果。

而免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)直接標(biāo)記在抗原（化學(xué)發(fā)光免疫分析） 或抗體（免疫化學(xué)發(fā)光分析）上或酶作用于發(fā)光底物。

而關(guān)于免疫反應(yīng)體系這里必須講清楚，抗原抗體反應(yīng)，這個里面是有未知和已知的關(guān)系，如果待測物是測抗原，則抗體是已經(jīng)知道的，如果待測物是測抗體那抗原是已知的。而前面已經(jīng)講了化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，簡單的講就是光信號的強(qiáng)度和待測物濃度是成一定正比關(guān)系的，或者是可以通過，相關(guān)關(guān)系式換算出來的。

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技術(shù)分類是根據(jù)發(fā)光體系也就是發(fā)光劑的不同進(jìn)行分類，可分為：間接化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光、直接化學(xué)發(fā)光、光激化學(xué)發(fā)光。今天我們主要講講前三類目前主流的發(fā)光技術(shù)。

1、間接化學(xué)發(fā)光 

他是用參與催化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶如辣根過氧化物酶（HRP)或堿性磷酸酶（ALP)來標(biāo)記抗原或抗體，在與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原（或抗體）發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后，加入底物（也就是發(fā)光劑）,酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯?，再把它們傳送至?jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算出測定物的濃度。

優(yōu)勢：發(fā)光過程中作為標(biāo)記物的酶基本不被消耗，發(fā)光信號強(qiáng)而穩(wěn)定，且發(fā)光時間較長；檢測方式簡單、成本較低。

關(guān)于間接化學(xué)發(fā)光，我們要明白以下三點(diǎn)：

1、是用酶進(jìn)行標(biāo)記抗原或抗體；

2、標(biāo)記復(fù)合物反應(yīng)過程中加入底物也就是發(fā)光劑后，經(jīng)催化和分解產(chǎn)生發(fā)光；

3、光信號轉(zhuǎn)化為電信號，并由計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理和換算得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。代表廠家：貝克曼、邁瑞、西門子、安圖等。

2、直接化學(xué)發(fā)光 

它是用吖碇酯等直接標(biāo)記抗體（或抗原）,與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原（或抗體）發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測抗原-吖碇酯標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時只需加入氧化劑過氧化氫和氫氧化鈉形成堿性環(huán)境，吖碇酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光。

優(yōu)勢：試劑穩(wěn)定性好，易于保存；標(biāo)記物為小分子，對標(biāo)記的抗原/抗體的空間位點(diǎn)幾乎不造成影響；本底低，靈敏度好，結(jié)果穩(wěn)定。代表廠家：雅培、新產(chǎn)業(yè)、索靈等。

關(guān)于直接化學(xué)發(fā)光，我們需要明白以下三點(diǎn)：

1、用壓吖啶酯等標(biāo)記物標(biāo)記抗原或抗體；

2標(biāo)記復(fù)合物反應(yīng)過程中加入氧化劑過氧化氫和氫氧化鈉形成堿性環(huán)境進(jìn)行分解和發(fā)光。；

3、光信號轉(zhuǎn)化為電信號，并由計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理和換算得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3、電化學(xué)發(fā)光

是以電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)砒錠釕標(biāo)記抗體(或抗原),以三丙胺(TPA)為電子供體,在電場中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng),它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程。

優(yōu)勢:可控的反應(yīng)體系快速檢測時間高精密度和高靈敏度寬廣的檢測范圍。

關(guān)于以羅氏為代表的電化學(xué)發(fā)光，我們需要明白以下三點(diǎn)：

1、用電化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記抗原或抗體；

2、電化學(xué)反應(yīng)過程中因電子產(chǎn)生轉(zhuǎn)移而出現(xiàn)化學(xué)發(fā)光；

3、光信號轉(zhuǎn)化為電信號，并由計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理和換算得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

以上就是我們化學(xué)發(fā)光的三種主流化學(xué)發(fā)光反應(yīng)方法學(xué)介紹

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