保存條件：-80℃。

1.產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是采用大腸桿菌E.coli DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，實驗室最常用的克隆感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率高，可用于藍(lán)白斑篩選。

基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

特點：1．DH5α菌株是實驗室最常用的感受態(tài)細(xì)胞。缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量。2．重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。3．φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的

β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補，可用于藍(lán)白斑篩選。DH5α菌株的缺點是生長緩慢，37℃需培 12-14 小時才能看見克隆。pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。

2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45～60min使菌體復(fù)蘇。

5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12~16h。

3.注意事項：

1．剛化凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率最高，避免反復(fù)化凍。

2．整個動作要輕柔。

*本試劑僅供實驗室研究使用