新冠檢測，如何控制核酸污染

bluewhale 2021-02-13

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來源：小桔燈網(wǎng)

臨近春節(jié)，《冬春季農(nóng)村地區(qū)新冠肺炎疫情防控工作方案》要求返鄉(xiāng)人員需持7天內(nèi)有效新冠病毒核酸檢測陰性結(jié)果返鄉(xiāng)，返鄉(xiāng)后實行14天居家健康監(jiān)測，期間不聚集、不流動，每7天開展一次核酸檢測。此外，醫(yī)院與食品檢測機構也開展了場地、食品、外包裝等的新冠核酸檢測，以監(jiān)控新冠傳染途徑。

在大規(guī)模新冠核酸檢測中，出現(xiàn)了少量假陽性的誤報。這些假陽性報告會給新冠監(jiān)控帶來錯誤的指導，一旦錯誤采取隔離/封閉措施，極大干擾相關企事業(yè)單位的正常運營。檢測前后及處理花費的人力和物力也浪費社會資源，擠占了原本可用于正確防控的資源。

這些假陽性結(jié)果大部分是由核酸污染造成的，其來源主要有：1、PCR產(chǎn)物污染；2、克隆質(zhì)粒污染；3、樣本污染；4、試劑污染。PCR會將極少量新冠基因進行指數(shù)復制，操作不當時，這些被大量增值的新冠核酸會以氣溶膠形式被釋放出來，污染整個實驗室。在進行質(zhì)?？寺『统樘釙r，高濃度質(zhì)粒容易以氣溶膠形式污染實驗室。采樣樣本處理/放置不當時，被其他樣本或氣溶膠污染。檢測試劑生產(chǎn)或使用不當時，被氣溶膠或其他方式污染。

（見擴展閱讀：美國CDC檢測試劑盒污染；滅活病毒暴露污染樣本；核酸檢測氣溶膠污染）

核酸污染預防：

1、設置合理的實驗室布局，一般可分為1）試劑準備區(qū)，2）樣本制備區(qū)，3）核酸擴增區(qū)，4）產(chǎn)物分析區(qū)，qPCR這類不需要電泳分析的可將產(chǎn)物分析區(qū)與核酸擴增區(qū)合并。

2、每個步驟都在相應的實驗區(qū)進行，每個區(qū)域內(nèi)實驗器材、物品不能共用，每個區(qū)完全隔離和獨立通風，控制空氣流動方向。如條件不足，也必須將擴增區(qū)和分析區(qū)與試劑準備和樣本制備區(qū)隔離。最后廢棄物處理區(qū)必須遠離以上實驗區(qū)。

3、實驗人員、物料須嚴格單向流動，即只能從準備區(qū)到擴展區(qū)和分析區(qū)，避免產(chǎn)生交叉污染。

4、定期進行陰性質(zhì)控檢測，在大規(guī)模檢測時，必須添加陰性樣本，陰性對照品，無模板對照，保證出現(xiàn)污染時可立即發(fā)現(xiàn)。

5、使用封閉擴增的檢測方法，如熒光定量PCR，并在擴增完成后不能打開試管。普通PCR和一些等溫擴增方法需要開蓋，很容易產(chǎn)生氣溶膠污染。（Novoprotein 熒光定量PCR，Cat.E096/E094）

6、實驗管理操作嚴格規(guī)范：在通風櫥/超凈工作臺操作，實驗前/后即時擦拭、清潔、消殺實驗臺，實驗中使用一次性手套，如有污染可能，立即替換手套，移液槍吸取液體輕柔，輕輕吹打，避免飛濺，打開管蓋時動作輕緩，漩渦震蕩后，離心甩下液滴。使用帶濾芯槍頭，避免液體被吸入移液槍，所有實驗物品盡可能提前分裝成小包裝，并預先滅菌和分裝好。實驗廢棄物統(tǒng)一處理。

7、使用dUTP+UDG酶防污染體系：在PCR中使用dUTP部分代替dTTP，使PCR產(chǎn)物中摻入U。在第二次PCR擴增前，使用UDG酶處理PCR反應液，可打斷上一次PCR產(chǎn)物中的U，使其無法污染第二次PCR擴增。（Novoprotein 熱敏UDG，Cat.E063）

核酸污染處理：

發(fā)現(xiàn)核酸污染，立即暫停相關實驗/檢測，對實驗場所、儀器設備進行徹底的清潔/消殺/去核酸處理，更換相關試劑、耗材，實驗人員更換衣物并進行核酸去除。

常用的核酸污染去除方法有：紫外照射、酒精擦拭、通風等。紫外照射可打斷核酸，但對打斷小于200bp的片段效果不佳。酒精無法消化核酸，擦拭抹去表面核酸時容易殘留。通風可將空氣中氣溶膠排出，但無法清除表面殘留，而且需要很長時間。

因傳統(tǒng)的核酸污染去除方法并不能完全去除核酸污染，《醫(yī)療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行）》指出，為避免氣溶膠等核酸污染造成的檢測假陽性，可采用核酸清除劑等試劑清除實驗室殘留核酸。

Novoprotein核酸污染去除劑（Cat.M126）降解所有核酸，完全清除掉核酸污染：

使用不同方法去除核酸污染，再進行qPCR擴增檢測，M126完全消除核酸

M126完全消除DNA及RNA

核酸污染是實驗室、生產(chǎn)車間常見的污染事故，嚴重時會導致實驗室、生產(chǎn)車間封停整頓。在新冠疫情之下，每一個核酸檢測陽性都會被極度重視，并采取更嚴格的處理措施，一旦相關單位被檢測出假陽性，將面臨全面檢測排查和停業(yè)整頓以及人員隔離檢測，會嚴重影響相關單位的運營，也浪費了疾控中心、檢測機構、排查/隔離/封鎖單位的人力和物力。所以必須重視核酸污染，并且采取切實有效的手段預防、控制和處理核酸污染。

相關產(chǎn)品：

熒光定量試劑：E096/E094

熱敏UDG酶：E063

核酸污染清除劑：M126