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現(xiàn)在市場上色譜柱種類繁多，不同類型的色譜柱分離對象不同，因此，必須學會精準選擇液相色譜柱，在選擇色譜柱之前一定的認識和了解色譜柱的一些基本知識。今天，小析姐就從分離模式選擇、樣品信息、色譜柱參數(shù)等方面與大家聊一聊如何精準選擇液相色譜柱。 如果想了解更多色譜產品及應用案例，也可以關注默克Supelco?并從中尋找答案。（注：看視頻，還可以領精美禮品，領取條件查看文末活動規(guī)則） 液相色譜柱種類繁多，在精準選擇液相色譜柱之前，首先必須選擇HPLC的分離模式，根據(jù)使用的固定相和流動相的組合不同，可以得到下列各種各樣的分離模式。了解待檢樣品的結構、分子量、溶解性、離子化、極性、pH值等物理化學性質，再參照下圖選擇適合的分離模式和精準的液相色譜柱固定相：色譜柱性能影響因素有很多，例如，硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑，化學性質包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端，下面依次介紹各參數(shù)對色譜柱性能的影響，并根據(jù)以上參數(shù)精準地選擇液相色譜柱。硅膠純度對強極性化合物的分離最為重要，殘留金屬離子濃度、硅膠的雜質會影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，易發(fā)生拖尾。增加色譜柱長度，可以在一定程度上提高柱效，但也會升高壓力和導致峰展寬；含量測定、溶出檢測等對于分離的要求較低，可選用較短的色譜柱，減少運行時間。內徑大，提高載樣量，但也會增加橫向擴散，同樣會導致峰展寬。內徑小的色譜柱靈敏度較高，峰型更窄，但是載樣量較小。如果載樣量滿足要求，需要更高更尖銳的峰提高靈敏度，可以選擇更小內徑，但壓力較大，對系統(tǒng)要求較高。大內徑（3-21.2mm）載樣量高、耐污染、壽命長。粒徑球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結構均勻，不規(guī)則形柱床結構不均勻、流動相線速度不均勻，容易譜帶展寬；當使用粘度較大流動相時，球形顆?？山档椭鶋海娱L色譜柱壽命。
相同鍵合基團鍵合技術選擇性相同；全多孔填料更為常見，鍵合相種類更多；核殼型填料可以在較大的粒徑下得到更高柱效，從而降低使用壓力。粒徑指柱填料顆粒直徑的大小，實際上色譜柱上所標的粒徑是一個平均值，通常1.5-10μm。粒徑小的色譜柱分離度較好，但色譜柱壓力更大，如果5μm粒徑的色譜柱分離度稍有不足，則同型號3μm色譜柱的分離度一般會提供令人滿意的選擇性。表面積是指顆粒外表面與內部孔面積的總和，以m2/g表示，高表面積對于多組分樣品的分離具有較強的保留能力、柱容量和分離度；表面積低的柱填料能迅速達到平衡狀態(tài)，對于梯度洗脫尤為重要。孔徑是指填料顆粒的孔或腔的平均尺寸，范圍是120～300?，多孔色譜填料與目標物的作用絕大部分（＞95%）是發(fā)生在填料顆粒的內部，即孔內的，所以孔對于色譜填料也是最重要的參數(shù)之一，一款填料孔徑大小(Pore Size)和孔徑分布(Pore Size Distribution)，在絕大多數(shù)的色譜分離純化中，起到關鍵性作用。大孔徑的填料顆?？梢匝娱L大分子溶質在填料表面的滯留時間，達到充分分離，改善峰形，所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子；較小孔徑提供較高的表面積，可用于較大的載荷量，并保留小的有機化合物，可用于小分子有機物到聚合物的分離。樣品分子直徑小于平均孔徑才能進入微粒內部，所選色譜柱孔徑至少是樣品流體學直徑的4倍，一般根據(jù)樣品的分子量選擇適合的孔徑。分子量＞2000，選擇孔徑300?，300?全多孔色譜柱可用于分離蛋白質和多肽。載碳量越高，固定相傳質效應增加，高載碳量，有利于不易保留化合物的分離，水解穩(wěn)定性好，重現(xiàn)性好；低載碳量，有利于分析有一定保留的化合物，降低溶劑損耗、減少運行時間。硅膠鍵合相填料中有部分未封端的殘留硅羥基，封端可以減輕待測組分與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應，改善保留和峰形，這對于堿性化合物尤其重要。而不同的封端技術也會直接影響色譜柱的效能。小析姐在后續(xù)也會繼續(xù)分享液相色譜中關于流動相（種類、比例、模式）和儀器參數(shù)（分離模塊、檢測模塊）的相關知識，請持續(xù)關注的液相方法開發(fā)系列的內容。在默克Supelco?留言區(qū)寫下您對視頻印象最深的一句話或者您對Supelco?的祝福及建議，留言點贊數(shù)量前10名的用戶將獲得Supelco?限量U盤。（內容來源：默克 網(wǎng)絡 由小析姐整理編輯）
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