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齊墩果酸 (oleanolic acid ,OA) 和熊果酸 ( 烏索酸 ,ursolic acid ,UA)是兩種五環(huán)三萜類(lèi)化合物 ，廣泛存在于自然界。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，齊墩果酸以游離形式和與糖結(jié)合形式廣泛存在于約 60 個(gè)科 190 種植物；熊果酸以游離形式和與糖結(jié)合形式分布于約27 個(gè)科 46 個(gè)屬 62 種植物。 齊墩果酸的消炎、護(hù)肝降酶、增強(qiáng)免疫、抑制血小板聚集、降血糖等作用已被人們認(rèn)識(shí)并利用。熊果酸的抗腫瘤、抗肝炎、抗炎抑菌等多方面的臨床藥理作用也被人們認(rèn)識(shí)，具有廣泛的開(kāi)發(fā)前景。而 OA 和 UA 互為同分異構(gòu)體，性質(zhì)極為相似，在植物中常常共存，給分離檢測(cè)帶來(lái)一定難度。目前，我國(guó)分離測(cè)定植物中這兩種成分多用色譜法。[1]  本方法采用液相色譜法，突破常規(guī)二元流動(dòng)相乙腈/甲醇-水（鹽），使用三元流動(dòng)相乙腈-甲醇-乙酸銨，實(shí)現(xiàn)了基線分離。 色譜條件： 試劑：弗頓HPLC乙腈、弗頓HPLC甲醇、弗頓HPLC水、弗頓HPLC乙酸銨 檢測(cè)器：VWD檢測(cè)器 色譜柱：Weltech Hisep C18-T（25cm×4.6mm×5μm） 流動(dòng)相：甲醇-乙腈-10mM乙酸銨溶液=55：27：18（v：v：v） 柱溫：25℃ 檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm 進(jìn)樣量：5μL 樣品配制： 空白溶液：流動(dòng)相甲醇-乙腈-10mM乙酸銨溶液=55：27：18 （v：v：v） 對(duì)照品溶液：分別精密稱(chēng)取齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品適量，加乙腈溶解稀釋成100ppm即得。 供試品溶液1：將處理過(guò)的樣品用乙腈溶解稀釋成1000ppm即得。 供試品溶液2：精密稱(chēng)取50mg處理過(guò)的樣品至50mL容量瓶中，分別加入5ml 100ppm齊墩果酸、熊果酸對(duì)照溶液，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。  色譜圖： 結(jié)論： 1.弗頓乙腈-甲醇-乙酸銨組成的空白基線平穩(wěn)，且無(wú)干擾峰，極大提高了分析方法的準(zhǔn)確度。 2.采用三元流動(dòng)相乙腈-甲醇-乙酸銨，使齊墩果酸和熊果酸實(shí)現(xiàn)了基線分離。通過(guò)對(duì)實(shí)際樣品檢測(cè)，齊墩果酸和熊果酸相同出峰位置的色譜峰靈敏度較低，無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確判斷；采用加標(biāo)的方式，提高靈敏度，有助于樣品中齊墩果酸和熊果酸的判斷。 參考文獻(xiàn)： 1.Chaoyue Wang 1, Xiang Wang 1, Shanshan Zhao 2, Guanglei Zuo 3, Min Xu 2, Shengqiang Tong 4, Liquid chromatographic and liquid-liquid chromatographic separation of structural isomeric oleanolic acid and ursolic acid using hydroxypropyl-β-cyclodextrin as additive, J Chromatogr A. 2020 Aug 16;1625:461332. |
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