臨床實驗室的規(guī)范化建設和標準化管理是技術應用的先決條件。目前開展高通量測序（NGS）檢測的實驗室主要依據(jù)是參照《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》。實驗室的總體設計與要求參考《分子病理診斷實驗室建設指南（試行）》、《個體化醫(yī)學檢測質(zhì)量保證指南》、《腫瘤個體化治療檢測技術指南》、《個體化醫(yī)學檢測實驗室管理辦法》、《測序技術的個體化醫(yī)學檢測應用技術指南（試行）》進行、《高通量測序技術臨床規(guī)范化應用北京專家共識（腫瘤部分）》、《國家衛(wèi)生計生委關于印發(fā)醫(yī)學檢驗實驗室基本標準和管理規(guī)范（試行）的通知》等相關規(guī)范。^[1-6]

高通量測序?qū)嶒炇矣址QNGS實驗室，以高通量測序技術為主要檢測手段，完成臨床疾病篩查或輔助診斷等項目。

實驗室建設符合臨檢中心的相關規(guī)定。依據(jù)衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)［2010］194號文件《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》，實驗室在通過省級衛(wèi)生行政部門相應技術審核和登記備案后，方可開展臨床檢測工作。

實驗室擬開展的NGS檢測項目必須基于醫(yī)學科學證據(jù)，有明確的臨床預期用途，例如疾病鑒別診斷或輔助診斷、治療藥物選擇、預后判斷等。檢測申請單、結果分析、解釋和臨床決策必須基于醫(yī)學科學證據(jù)。

實驗室應配備滿足臨床檢測項目需求的儀器設備。選擇國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）批準的高通量測序儀及配套服務器，高通量測序檢測試劑盒，自動分析軟件，實驗室樣本信息管理系統(tǒng)等。

實驗室應優(yōu)先選擇國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）批準的試劑，或經(jīng)過審核后具有嚴格標準操作規(guī)程（SOP）的自配試劑（LDT），所建立的LDTs試劑禁止商品化或在其他實驗室使用。

所采用的測定方法特異性好，靈敏度、準確度、精密度符合國家衛(wèi)生計生委臨床檢驗中心、IFCC、WHO等推薦的方法性能。

所用標準品或標準參考物符合國家衛(wèi)生計生委臨床檢驗中心推薦的標準和要求。

實驗室應具有可滿足開展檢測要求的有關的臨床病理學、分子生物學相關專業(yè)教育背景、工作經(jīng)驗的醫(yī)學和生物學等專業(yè)人員。

實驗室人員必須參加充分的內(nèi)外部理論和技能培訓并通過考核，同時具有臨檢中心《臨床基因擴增實驗室技術人員培訓合格證》。

數(shù)據(jù)分析人員應具有臨床醫(yī)學、分子生物學或遺傳學知識背景并經(jīng)生物信息學培訓。

最終報告簽發(fā)人員應具備醫(yī)學分子生物學知識背景，熟練使用相關數(shù)據(jù)庫，掌握本領域的指南，了解相關研究的最新進展。

必須建立嚴格的實驗室管理制度、建立標準化操作程序（SOP）、建立質(zhì)量管理系列文件等，確保實驗室日常運行符合國家衛(wèi)生部的要求，確保檢測結果準確、確保實驗室衛(wèi)生安全，確保實驗室長期穩(wěn)定運行。

NGS臨床應用必須在無菌無塵環(huán)境下進行操作。

《高通量測序技術臨床檢測規(guī)范化應用北京專家共識（第一版通用部分）》表示：高通量測序操作步驟多、程序復雜，分為“濕實驗（wet bench）”和“干實驗（dry bench）”兩個階段：

“濕實驗”包括樣本預處理、核酸提取、基因組的片段化、建庫、擴增、靶序列富集、混樣、測序前準備及測序等；

“干實驗”包括測序后的數(shù)據(jù)質(zhì)量分析、比對、變異識別、注釋和結果報告與解釋等環(huán)節(jié)。^[5]

圖1.腫瘤診斷技術流程圖^[9]

NGS的實驗室比常規(guī)PCR實驗室有更高的要求，NGS項目檢測中腫瘤診斷與治療的要求最為嚴格。實驗室需根據(jù)擬開展的檢測項目數(shù)量、檢測技術流程、測序平臺和工作量大小來制定實驗室分區(qū)設計的方案。

根據(jù)常規(guī)NGS操作步驟，NGS實驗室大致可分為以下區(qū)域：

（1）試劑儲存和準備區(qū);

（2）樣本前處理區(qū)；

（3）樣本制備區(qū);

（4）文庫制備區(qū);

（5）雜交捕獲區(qū)/多重PCR區(qū)域（第一擴增區(qū)）：

（6）純化一區(qū)；

（7）文庫擴增區(qū)（第二擴增區(qū)）;

（8）純化二區(qū)；

（9）測序區(qū);

（10）潔凈走廊及污染走廊區(qū)域。^[1],[7-8]

圖2.腫瘤NGS診斷實驗室平臺主要區(qū)域及流轉(zhuǎn)示意圖^[9]

只有規(guī)范設置實驗區(qū)域， 才能降低或者避免實驗中可能出現(xiàn)的污染^[10]。

NGS實驗室的規(guī)范化建設和標準化管理極大保障并推動了技術的臨床轉(zhuǎn)化應用。

參考文獻

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[9] 李金明主編. 高通量測序技術. 北京：科學出版社, 2018.12.

[10] 上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院. 第二代測序技術在腫瘤診療中的應用及其價值與風險[A]. 檢驗醫(yī)學, 1673-8640（2017）04-0245-05. 10.3969/j.issn.1673-8640.2017.04.001.