色原底物ESPMT化學(xué)名稱為N-乙基-N-磺丙基-3-甲基苯胺鈉鹽,也簡稱TOPS,屬于新型Trinder’試劑中的一種,廣泛應(yīng)用于葡萄糖、甘油三酯、膽固醇等生化指標(biāo)的檢測。比如ESPMT用于肌酐的肌氨酸氧化酶(SOX)法測定。 血清和尿中都含有肌酐,它是腎功能常用的常用指標(biāo),也是健康體檢的必檢項目。肌酐(creatinine,Cre),化學(xué)式是C4H7N3O,是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物,主要由腎小球濾過排出體外。每20克肌肉代謝克產(chǎn)生1mg肌酐。 ![]() 色原底物ESPMT測定肌酐 ESPMT測定肌酐原理: 肌酐在肌酐酶(肌酐亞氨基水解酶)的催化下水解成肌酸,肌酸在肌酸酶CRH(肌酸脒基水解酶)催化下水解成肌氨酸和尿素,然后用肌氨酸氧化酶SOX將肌氨酸氧化成甘氨酸、甲醛以及過氧化氫。生成的過氧化氫即可以用ESPMT與4-AAP在過氧化物酶存在下進(jìn)行測定,生成的顯色產(chǎn)物含量與肌酐濃度成正比,與光度計測得的吸光度成正比。 試劑準(zhǔn)備: 試劑1,由肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、抗壞血酸氧化酶、過氧化氫酶、ESPMT組成;試劑2,由肌酐胺基水解酶、過氧化物酶、4-氨基安替比林(4-APP)組成;校準(zhǔn)品:肌酐溶液。 試劑要求: 1. 試劑溶液應(yīng)為清澈透明的液體,無沉淀、懸浮物和絮狀物。 2. 液體試劑的凈含量應(yīng)不少于標(biāo)示值。 3. 試劑以去離子水為空白對照,在37攝氏度546nm波長條件下,吸光度應(yīng)小于0.2A。 4. 當(dāng)樣本濃度為60umoL/L時,吸光度變化應(yīng)不小于0.016A。 5. 試劑檢測范圍應(yīng)在10-7000umoL/L,線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900,當(dāng)樣本濃度不大于390μmol/L時,線性絕對偏差應(yīng)不大于±39.0μmol/L;當(dāng)樣本濃度大于390μmol/L時,線性相對偏差應(yīng)不大于±10.0%。變異系數(shù)小于0.03,相對偏差小于0.05。 以色原底物ESPMT測定肌酐是比較常用的方法,由于過程中會生產(chǎn)肌氨酸和尿素,也可以通過尿素檢測的方法來測量,靈敏度不如SOX法。 |
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