隨著免疫細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的快速發(fā)展,免疫治療已成為腫瘤患者放、化療和手術(shù)后輔助治療的重要手段之一。

過繼免疫治療(adoptive cellular immunotherapy,ACI)是近年來引起關(guān)注的免疫治療方法。ACI 是通過將具有抗腫瘤活性,能直接或間接介導(dǎo)抗腫瘤效應(yīng)的免疫細(xì)胞注腫瘤宿主體內(nèi)的一種治療方法。ACI 應(yīng)用的免疫細(xì)胞主要為 T 細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞 (natural killer cell,NK) 、NK 細(xì)胞樣 T 淋巴細(xì)胞(NKT 細(xì)胞)、抗原修飾的自體CTL(rAAV-DC)免疫治療、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(tumor-infiltration lymphocyte,TIL) 和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer cell,CIK)，以及最近研究較熱的抗原嵌合受體修飾的T細(xì)胞 （CAR-T）等。無論是臨床應(yīng)用哪種免疫細(xì)胞治療疾病，都必須要遵循<自體免疫細(xì)胞(T細(xì)胞、NK)治療技術(shù)管理規(guī)范> ,保證醫(yī)療質(zhì)量，為臨床免疫細(xì)胞治療提供安全有效的細(xì)胞產(chǎn)品。
為保證細(xì)胞產(chǎn)品出庫無毒，無害、安全有效。必須從細(xì)胞制備前期、培養(yǎng)期及臨床回輸前期各個環(huán)節(jié)做好嚴(yán)格的質(zhì)量監(jiān)控。

1.細(xì)胞制備前期需要注意的事項(xiàng)：

1.1細(xì)胞培養(yǎng)所用原料耗材的統(tǒng)一訂購，確保培養(yǎng)培養(yǎng)體系的穩(wěn)定性。務(wù)必做細(xì)胞培養(yǎng)成分和添加物（培養(yǎng)液、細(xì)胞因子、血清等）以及制備過程所用耗材的來源和質(zhì)量認(rèn)證，應(yīng)符合臨床使用的質(zhì)量要求。由于采用不同的細(xì)胞分離和擴(kuò)增技術(shù)(培養(yǎng)基體系)，可能得到的結(jié)果有較大差異。

1.2.按2003年中國藥品食品監(jiān)督管理局發(fā)布的《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》，規(guī)定人體細(xì)胞培養(yǎng)中“不得使用同種異體人血清或血漿。原則上鼓勵采用無血清培養(yǎng)基、自體血清或者自體血漿。如果必須使用動物血清，應(yīng)考慮每批血清都應(yīng)對潛在的外源因子（包括人的病原體）進(jìn)行檢查、篩查。”
因此我們實(shí)驗(yàn)室要做到針對細(xì)胞培養(yǎng)的每批耗材試劑進(jìn)行定期抽檢，確保每批耗材試劑做到無菌，無熱源，無外源病原體。

2細(xì)胞培養(yǎng)期要注意的事項(xiàng)：

2.1確保血液來源的檢測：血液樣本實(shí)驗(yàn)前無菌處理，留樣做檢測，確保無菌，無病原體.以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。

2.2血液細(xì)胞的采集運(yùn)輸，要注意血液運(yùn)輸?shù)娜萜?、溫?用冰袋和海綿隔離，血樣樣本不要直接接觸冰塊)、時間（不超過24小時）、并做好相關(guān)記錄。

2.3細(xì)胞的培養(yǎng)過程，要嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)程來制備，細(xì)胞培養(yǎng)人員要具有較強(qiáng)的無菌意識，并貫徹整個細(xì)胞培養(yǎng)過程中。免疫細(xì)胞培養(yǎng)大致時間14-18天，培養(yǎng)過程中要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)技術(shù)流程SOP來執(zhí)行。

血液中各類細(xì)胞的分選方法，培養(yǎng)基及因子的添加量要準(zhǔn)確；補(bǔ)液換液前對細(xì)胞計(jì)數(shù)，觀察培養(yǎng)基顏色變化情況，進(jìn)行合理的補(bǔ)液，保持細(xì)胞合適的生長密度，確保培養(yǎng)體系的穩(wěn)定性，以達(dá)到細(xì)胞預(yù)期的生長數(shù)量；同時做好補(bǔ)液記錄，對細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行編號，實(shí)驗(yàn)分組操作，避免交叉污染，分工明確，以便出現(xiàn)問題有據(jù)可查。

2.4細(xì)胞的質(zhì)控：細(xì)胞培養(yǎng)期間，每天觀察細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)，每三天取樣檢查細(xì)菌、內(nèi)毒素、真菌，如有異常及時復(fù)查，棄掉污染細(xì)胞。細(xì)菌污染時培養(yǎng)基多出現(xiàn)渾濁，在鏡下觀察時多出現(xiàn)黑色跳動小點(diǎn)。真菌多為霉菌污染時，初期為鏡下可見圓形漂浮或貼輔的空心圓泡，后期可見明顯霉斑，鏡下可見菌絲為樹枝狀。細(xì)胞污染后培養(yǎng)箱的處理較為重要，培養(yǎng)箱應(yīng)拆下內(nèi)部組件，徹底清洗，用過氧乙酸擦拭后再用新潔爾滅擦拭，然后用酒精擦拭，紫外照射30min，最后用75%的酒精（40℃，CO2為零）培養(yǎng)箱內(nèi)部熏蒸3~4h；污染嚴(yán)重時要將其放入烘箱內(nèi)100~200℃烘3~4h安裝后再照紫外。每次做新一批細(xì)胞培養(yǎng)時要將培養(yǎng)箱徹底擦拭；培養(yǎng)基因子等不能照紫外的試劑，經(jīng)傳遞窗帶進(jìn)無菌間后用酒精棉球擦拭三遍；方可帶入超凈臺。

3細(xì)胞回輸前期注意事項(xiàng)：

3.1臨床回輸免疫細(xì)胞前細(xì)胞的安全性檢測：要確保培養(yǎng)的細(xì)胞成品，無菌、無內(nèi)毒素、無支原體、無真菌污染，所有檢測結(jié)果真實(shí)、權(quán)威。在患者使用前，取培養(yǎng)液及或沉淀物用丫啶橙染色或革蘭染色，追加一次污染檢測。

3.2細(xì)胞的有效性檢測：細(xì)胞回輸劑量、存活率、形態(tài)，純度。回輸劑量要達(dá)到臨床治療應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)，存活率大于90%，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測效應(yīng)細(xì)胞及表達(dá)特定表型的細(xì)胞（CD3+/CD56+/CD8+/CD4+）占總細(xì)胞的比例，是否達(dá)到臨床應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)；分泌某種殺傷腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)因子（IFN-γ）的能力是否達(dá)到臨床應(yīng)用水平。

綜上，免疫細(xì)胞制備需要具有較強(qiáng)專業(yè)素質(zhì)的培養(yǎng)人員，更需要注入細(xì)心，耐心和恒心培養(yǎng)出高質(zhì)量的安全有效的免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品，為臨床細(xì)胞治療提供強(qiáng)有力的保障，為廣大患者帶來福音。