免疫檢查點抑制劑（CPI）是近幾年來癌癥治療領(lǐng)域的突破性進展，改變了許多癌癥患者的預(yù)后[1, 2]，但仍有相當一部分患者對抗PD-1/PD-L1治療抵抗[3]。

俗話說的好，“打虎親兄弟，上陣父子兵”，若能夠為CPI找一個強有力的幫手，或許能夠解決這部分耐藥的腫瘤。

這不，好消息來了，來自西班牙納瓦拉大學(xué)的Ignacio Melero領(lǐng)銜的團隊在著名期刊《癌癥發(fā)現(xiàn)》上發(fā)表了雙特異性抗體PD-L1×4-1BB（GEN1046）的臨床前實驗和I/IIa期臨床試驗（NCT03917381）初步結(jié)果[4]。

研究發(fā)現(xiàn)，對于晚期難治性實體腫瘤患者（很多對CPI耐藥），GEN1046安全性較好，且有效率達到65.6%（40/61）。這一結(jié)果提示GEN1046可用于治療對CPI耐藥的患者，填補CPI耐藥患者治療的臨床空白。

論文首頁

4-1BB（CD137）是一種表達于活化的CD4+、CD8+T細胞和NK細胞表面的受體，激活后可活化CD8+T細胞，增加T細胞總數(shù)并增強其功能[5]。

雖然4-1BB強激動性單抗（Urelumab）具有一定的臨床應(yīng)用潛力，但由于具有顯著的肝毒性，因此其臨床應(yīng)用受限[6]。而另一個4-1BB弱激動性單抗（Utomilumab），盡管肝毒性較小，但作為單藥治療的抗腫瘤活性很弱[7]。

GEN1046是一個基于DuoBody?技術(shù)平臺，通過單克隆全人源PD-L1和人源化4-1BB抗體的Fab臂交換產(chǎn)生的PD-L1×4-1BB雙特異性抗體。

GEN1046構(gòu)建示意圖

研究人員首先在體外研究了GEN1046與靶點的結(jié)合能力，發(fā)現(xiàn)在0.01-1μg/mL范圍內(nèi)同時結(jié)合PDL1和4-1BB的能力最強。

GEN1046雙特異性抗體還有一特殊之處，即GEN1046的4-1BB激動特性只有在結(jié)合至PD-L1+細胞后才會產(chǎn)生，但在無4-1BB結(jié)合時也能阻斷PD-1/PD-L1通路。這意味著GEN1046的PD-L1特異性Fab臂能作為經(jīng)典CPI發(fā)揮作用，同時減少了4-1BB受體非選擇性激活所帶來的副作用。

GEN1046的4-1BB激動特性只有在結(jié)合至PD-L1+細胞后才會產(chǎn)生

相比于PD-L1單抗、4-1BB單抗（或兩單抗結(jié)合）、PD-L1xctrl抗體以及ctrlx4-1BB抗體（或兩抗體結(jié)合），GEN1046在體外可顯著促進CD8+T細胞的增殖，并增加促炎細胞因子的分泌（如IFNγ）。

緊接著，研究人員構(gòu)建了人PD-L1（hPD-L1）和4-1BB雙敲入轉(zhuǎn)基因C57BL/6小鼠（hPD-L1/h4-1BB dKI小鼠），并將hPD-L1轉(zhuǎn)染的MC38腫瘤細胞（MC38-hPD-L1）植入小鼠，建立體內(nèi)腫瘤模型。然后對小鼠給予GEN1046 5mg/kg（每周2次）治療，共給藥3周，以在體內(nèi)評估GEN1046的抗腫瘤活性。

經(jīng)治療后，研究人員驚喜地發(fā)現(xiàn)，所有荷瘤小鼠均對治療有反應(yīng)，且相較于對照組，干預(yù)組小鼠無進展生存期（PFS）顯著延長。在6只療效達到完全緩解的小鼠中，再次接種MC38-hPD-L1腫瘤細胞不能使這些小鼠產(chǎn)生腫瘤，這表明經(jīng)GEN1046治療的小鼠可產(chǎn)生免疫記憶。

GEN1046小鼠體內(nèi)實驗結(jié)果

為了進一步表征小鼠體內(nèi)的抗腫瘤免疫反應(yīng)，研究人員對接種MC38-hPD-L1腫瘤細胞的hPD-L1/h4-1BB dKI小鼠的腫瘤和脾臟進行了免疫表型鑒定，并檢測了血液內(nèi)T細胞和相關(guān)細胞因子的含量。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相比于PD-L1單抗治療和對照組的小鼠，GEN1046可誘導(dǎo)小鼠腫瘤內(nèi)和脾臟內(nèi)CD3+T細胞浸潤增加，其中大部分是CD8+T細胞，且外周血中IFNγ、TNFα、IL-2和CXCL10濃度增加，這些結(jié)果都表明GEN1046在體內(nèi)具有很強的激活CD8+T細胞的能力。

研究人員還在食蟹猴中進行了毒理學(xué)實驗，在GEN1046的劑量達到30mg/kg（Q3W，治療兩周期）后，食蟹猴耐受性良好，未觀察到天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）或丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）升高。

臨床前的藥效學(xué)及安全性研究均表明GEN1046的治療潛力，因此，研究人員在晚期實體瘤患者中開展了臨床試驗。

共有61例晚期實體腫瘤患者（包括12例結(jié)直腸癌、9例卵巢癌、6例胰腺癌、6例NSCLC等）參與了此次I/IIa期臨床試驗（NCT03917381），并以9個遞增劑量水平（25-1200mg Q3W）接受GEN1046治療，主要目的是評估GEN1046的藥代動力學(xué)及安全性。患者入組前均接受過多種抗癌治療，23例（37.7%）患者既往接受過PD-(L)1抑制劑治療。

藥代動力學(xué)分析顯示，GEN1046在輸液結(jié)束后很快即可達到峰濃度，在劑量低于200mg Q3W時在體內(nèi)無明顯蓄積。首次給藥后，不同劑量水平的半衰期為2.3-10.3天。

與臨床前研究結(jié)果相一致，GEN1046可顯著增加患者外周血中CD8+T細胞和NK細胞數(shù)，并使得IFNγ、CXCL10等細胞因子濃度增加。

GEN1046可顯著增加患者外周血中CD8+T細胞數(shù)及相關(guān)細胞因子濃度

藥物的安全性分析顯示，GEN1046的總體耐受性良好。共有6例（9.8%）患者出現(xiàn)劑量限制毒性（DLT：25mg，N=1；80mg，N=1; 140mg，N=2；200mg，N=1；800mg，N=1），包括中性粒細胞減少伴發(fā)熱（4級，N=2），免疫性腎炎（3級，N=1）和轉(zhuǎn)氨酶升高（3級，N=3）。所有DLT經(jīng)治療后均恢復(fù)且無后遺癥。

43例（70.5%）患者發(fā)生了治療相關(guān)不良事件（AE），最常見的AE為轉(zhuǎn)氨酶升高、甲狀腺功能減退和疲勞。

大多數(shù)AE為1-2級，17例（27.9%）患者出現(xiàn)至少一次3-4級AE。6例（9.8%）患者出現(xiàn)3級轉(zhuǎn)氨酶升高，所有患者均未出現(xiàn)4-5級轉(zhuǎn)氨酶升高和與治療相關(guān)的膽紅素升高。除1例患者發(fā)生4級甲狀腺功能減退外，其他均為1-2級。

截至2021年2月12日，4例（6.6%）患者仍在接受GEN1046治療，患者中位隨訪時間為9.4個月，疾病控制率為65.6%（40/61）。4例患者達到部分緩解，包括1例三陰性乳腺癌患者（100mg劑量下）、1例卵巢癌患者（80mg劑量下）和2例NSCLC患者（80和200mg劑量下）；36例患者病情穩(wěn)定。

61例患者經(jīng)GEN1046治療后效果

在患者體內(nèi)，同樣可以觀察到GEN1046給藥后外周血中CD8+效應(yīng)T細胞數(shù)增加，以及IFNγ、CXCL9-11等細胞因子濃度增加。

GEN1046雙特異性抗體為提高CPI的臨床療效提供了一種全新的解決途徑，在阻斷PD-1/PD-L1通路的同時有條件的激活4-1BB，增強T細胞的功能，達到加強療效的效果。

本研究報道的GEN1046臨床前和I/IIa期臨床試驗結(jié)果清楚地表明，GEN1046在體內(nèi)外均具有顯著的激活CD8+效應(yīng)T細胞進而殺死腫瘤細胞的能力，同時在患者中具有良好的安全性與耐受性。尤其是對于CPI治療耐受的患者，GEN1046對這些患者仍具有治療作用。

在本研究的基礎(chǔ)上，研究人員將擴大規(guī)模，進一步探索GEN1046治療的安全性和有效性，并探索GEN1046與其他治療方式聯(lián)用的策略，開啟免疫治療的另一個時代的序幕。