多發(fā)性硬化（MS）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的炎性脫髓鞘性疾病，可分為復(fù)發(fā)緩解型（復(fù)發(fā)后緩解，每次發(fā)作均基本恢復(fù)）和進(jìn)展型（疾病進(jìn)行性加重）。

現(xiàn)有的治療方式對(duì)于復(fù)發(fā)緩解型MS效果較好，但進(jìn)展型MS（PMS）仍缺乏有效的治療方式[1]。

近日，來自意大利圣拉斐爾科學(xué)研究所的Gianvito Martino團(tuán)隊(duì)，在《自然·醫(yī)學(xué)》雜志發(fā)表了首個(gè)評(píng)估鞘內(nèi)移植人胎兒神經(jīng)前體細(xì)胞（hfNPC）治療PMS的可行性、安全性和耐受性的1期臨床試驗(yàn)結(jié)果[2]

經(jīng)過2年的隨訪，研究人員未發(fā)現(xiàn)與hfNPC移植相關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)。此外，探索性療效分析顯示，接受最高劑量hfNPC移植治療的患者腦萎縮發(fā)生率較低，且腦脊液中抗炎和神經(jīng)保護(hù)因子的水平較高。

這些結(jié)果表明hfNPC移植治療PMS患者具有較高的可行性和安全性，且可能起到一定的治療效果，值得在未來更大的隊(duì)列中進(jìn)一步評(píng)估hfNPC移植治療PMS的有效性。

論文首頁截圖

在MS動(dòng)物模型中，研究人員已證明了移植的神經(jīng)前體細(xì)胞可以分化為成熟的神經(jīng)細(xì)胞，并釋放相關(guān)細(xì)胞因子發(fā)揮營養(yǎng)支持和抗炎功能，從而減少腦內(nèi)脫髓鞘病變、星形膠質(zhì)細(xì)胞增生和軸突損傷[3, 4]。

在此基礎(chǔ)上，Gianvito Martino團(tuán)隊(duì)開展了前瞻性、開放標(biāo)簽、劑量探索（3+3設(shè)計(jì)）的1期臨床研究（STEMS，NCT03269071，EudraCT2016-002020-86），初步評(píng)估了hfNPC移植治療PMS的可行性和安全性。

研究的主要納入標(biāo)準(zhǔn)為：年齡在18-55歲，根據(jù)修訂版McDonald 2010標(biāo)準(zhǔn)和2013 Lublin分型診斷為PMS，且對(duì)所有經(jīng)批準(zhǔn)療法無效/不耐受。

被納入研究的受試者將通過腰椎穿刺接受鞘內(nèi)注射hfNPC（由流產(chǎn)的10-12周人胎兒獲得），hfNPC的劑量遞增分為4檔：TC-A，0.7×106/kg；TC-B，1.4×106/kg；TC-C 2.8×106/kg和TC-D 5.7×106/kg。在完成治療后，將對(duì)受試者進(jìn)行為期96周的隨訪。研究的主要終點(diǎn)為鞘內(nèi)注射hfNPC的可行性、安全性和耐受性。

研究流程圖

在2017年5月至2019年5月間，共有15名PMS受試者入選，其中12名受試者最終接受了hfNPC移植治療，2名受試者因禁忌癥（無法接受免疫抑制治療）而退出試驗(yàn)，1名受試者在hfNPC移植前自發(fā)退出試驗(yàn)，末次隨訪時(shí)間為2021年6月。

總體來說，受試者對(duì)hfNPC移植治療的耐受性良好，在接近兩年的隨訪內(nèi)觀察到的不良反應(yīng)大多為1級(jí)或2級(jí)，且不同治療劑量之間不良反應(yīng)的發(fā)生率無明顯差異，也沒有觀察到劑量限制毒性（DLT）。

在整個(gè)研究期間，未觀察到與hfNPC移植治療相關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)（3級(jí)或更高），也沒有任何明確的與hfNPC移植治療相關(guān)的不良反應(yīng)。截止末次隨訪，患者的存活率為100%。

研究中出現(xiàn)的不良反應(yīng)

緊接著，研究人員探索了hfNPC移植治療的效果。

在移植治療的前4年，受試者的臨床擴(kuò)展致殘量表評(píng)分（EDSS）平均每年增加0.24分，在接受移植治療的2年內(nèi)，受試者的EDSS平均每年增加0.13分，雖然相比于移植治療前，MS的進(jìn)展變緩慢，但兩者無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

同時(shí)，其他的臨床評(píng)分（9-HPT評(píng)分和SDMT評(píng)分）以及神經(jīng)生理學(xué)評(píng)估結(jié)果（如運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位、感覺誘發(fā)電位和周圍視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層厚度）在治療前后也無明顯差異，且與hfNPC的治療劑量無明顯相關(guān)性。

受試者神經(jīng)功能和神經(jīng)生理學(xué)評(píng)估結(jié)果

磁共振成像（MRI）評(píng)估顯示，6例（50%）受試者在隨訪期內(nèi)出現(xiàn)新的T2病變（T2病變體積增加1.1±0.82 ml/年，3例病變?cè)鰪?qiáng)掃描出現(xiàn)強(qiáng)化），hfNPC移植劑量與新的T2病變數(shù)目、體積以及增強(qiáng)掃描強(qiáng)化數(shù)目均無明顯相關(guān)性。

值得注意的是，hfNPC低劑量組和高劑量組受試者的灰質(zhì)萎縮速度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.04），接受低劑量hfNPC移植治療的受試者在移植后2年內(nèi)腦萎縮快于高劑量組。無論是總腦體積，還是灰質(zhì)、白質(zhì)體積，萎縮的速率均與hfNPC的劑量呈負(fù)相關(guān)。

低劑量（上圖）hfNPC移植治療的受試者在移植后2年內(nèi)腦萎縮顯著快于高劑量組（下圖）

接下來，研究人員對(duì)受試者的腦脊液成分進(jìn)行了分析。

在移植后3個(gè)月，受試者腦脊液中細(xì)胞數(shù)量和蛋白質(zhì)明顯增加，hfNPC移植劑量與腦脊液蛋白水平呈正比（P=0.06），而與細(xì)胞數(shù)量無明顯相關(guān)性。從5個(gè)受試者腦脊液中可提取到足夠的DNA進(jìn)行分析，其中1個(gè)受試者腦脊液中可檢測到供體來源細(xì)胞DNA的存在。

最后，研究人員對(duì)受試者腦脊液進(jìn)行了組學(xué)分析。

在檢測的46種細(xì)胞因子、趨化因子和生長因子中，有17種在基線和移植后均低于可檢測的范圍（CCL4、CCL11、EGF、G-CSF、IFN-y、IL-1b、IL-5、IL-7、IL-12p40、IL-12p70、IL-17、IL-22、LIF、PDGF-AB、PDGF-BB、RANTES和TGF-B）。

對(duì)所有在基線和移植后3個(gè)月可檢測到的因子進(jìn)行主成分分析發(fā)現(xiàn)，相比于低劑量移植組，高劑量組在移植后各因子的變化程度更大。

低劑量組（左）和高劑量組（右）在移植前后細(xì)胞因子主成分分析

在hfNPC移植后，血管生成素-2、CCL-2、CXCL10、FAS配體、GDNF、GM-CSF、IL-10、IL-15、IL-2、MMP9、SCF、TNF-β和VEGF-C（營養(yǎng)因子和免疫相關(guān)因子）顯著升高，而IL-8水平（促炎）顯著下降。

腦脊液的蛋白質(zhì)組學(xué)分析也顯示，hfNPC移植后腦脊液蛋白質(zhì)圖譜發(fā)生了變化。在低劑量組和高劑量組中檢測到的707和714個(gè)蛋白質(zhì)中，分別有63種和78種蛋白質(zhì)在基線和移植后3個(gè)月的腦脊液中存在顯著差異（P<0.05）。

這些差異蛋白的基因本體論（GO）分析顯示，細(xì)胞外基質(zhì)聚集、細(xì)胞遷移和粘附、軸突發(fā)育等通路，在低劑量組和高劑量組中均明顯富集；此外，低劑量組中還有免疫系統(tǒng)、固有免疫系統(tǒng)和中性粒細(xì)胞脫顆粒等通路明顯富集（高劑量組未富集），而高劑量組中則是神經(jīng)元投射形態(tài)發(fā)生、細(xì)胞對(duì)生長因子的反應(yīng)和突觸聚集等通路明顯富集（低劑量組未富集）。

低劑量（左圖）和高劑量（右圖）組治療前后差異蛋白的GO分析

為了更詳細(xì)地研究腦脊液蛋白質(zhì)組的變化，研究人員進(jìn)行了基因集合富集分析（GSEA）。該分析顯示，在hfNPC移植后，與固有免疫相關(guān)的通路總體上呈下調(diào)趨勢（中性粒細(xì)胞脫顆粒、免疫系統(tǒng)、固有免疫系統(tǒng)），而參與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)發(fā)生和細(xì)胞遷移的通路總體上呈上調(diào)趨勢。

總的來說，STEMS是首個(gè)評(píng)估PMS患者鞘內(nèi)移植hfNPC治療安全性和最大耐受劑量的臨床試驗(yàn)，并證明了該療法的可行性和安全性。

更為重要的事，探索性療效分析顯示hfNPC移植療法可減緩患者的腦萎縮，且增加腦脊液內(nèi)抗炎和神經(jīng)保護(hù)因子的水平，值得進(jìn)行下一階段的臨床研究。

參考文獻(xiàn)

1.The Lancet N: Multiple sclerosis under the spotlight. Lancet Neurol 2021, 20(7):497.

2.Genchi A, Brambilla E, Sangalli F, Radaelli M, Bacigaluppi M, Furlan R, Andolfo A, Drago D, Magagnotti C, Scotti GM et al: Neural stem cell transplantation in patients with progressive multiple sclerosis: an open-label, phase 1 study. Nat Med 2023.

3.Pluchino S, Quattrini A, Brambilla E, Gritti A, Salani G, Dina G, Galli R, Del Carro U, Amadio S, Bergami A et al: Injection of adult neurospheres induces recovery in a chronic model of multiple sclerosis. Nature 2003, 422(6933):688-694.

4.Pluchino S, Gritti A, Blezer E, Amadio S, Brambilla E, Borsellino G, Cossetti C, Del Carro U, Comi G, t Hart B et al: Human neural stem cells ameliorate autoimmune encephalomyelitis in non-human primates. Ann Neurol 2009, 66(3):343-354.