試劑盒操作流程（按1mg抗體標(biāo)記量）：

實(shí)驗(yàn)前，將試劑盒各組分平衡到室溫；

1.抗體的固定分離

1）取出抗體固定磁珠，吸頭（用剪刀剪去吸頭尖部，使吸口變大）吹打成懸濁液，立即取出適量磁珠懸濁液（此時(shí)磁珠為50%懸濁液，按照100ul懸濁液對(duì)應(yīng)1mg抗體），加到1.5ml離心管中，將離心管放入磁力架上，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干磁珠保護(hù)液；

2）將離心管移出磁力架，加入1ml PBS緩沖液，吹打成懸濁液，重新放入磁力架靜置，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干PBS；

3）重復(fù)上步驟2-3次；

4）將磁珠離心管移出磁力架，待標(biāo)記抗體（抗血清，腹水或者細(xì)胞上清）用PBS調(diào)整為約2mg/ml濃度，加入磁珠離心管中，蓋緊管蓋，放在離心管旋轉(zhuǎn)搖床上搖晃30分鐘；

5）將離心管重新放回磁力架，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干液體；

6）重復(fù)步驟2 三次；

2. 生物素標(biāo)記抗體

1）將離心管移出磁力架，加入適量抗體標(biāo)記緩沖液（1mg抗體加入200ul標(biāo)記緩沖液），同時(shí)取出活性生物素（干粉），用助溶劑調(diào)整成10mM濃度，按照1mg抗體取13.5ul生物素加入上述離心管。

2）將離心管固定在離心管旋轉(zhuǎn)搖床上室溫反應(yīng)1個(gè)小時(shí)或者4℃反應(yīng)過夜；

3）將離心管重新放回磁力架，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干液體；

4）將離心管移出磁力架，加入1ml PBS緩沖液，吹打成懸濁液，重新放入磁力架靜置，待磁珠被全部吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸干PBS；

5）重新以上步驟2-3次；

6）將離心管移出磁力架，按照1mg抗體對(duì)應(yīng)400ul抗體洗脫液，吹打磁珠10次，將離心管重新放回磁力架，待磁珠全部被吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸取全部的洗脫標(biāo)記抗體，轉(zhuǎn)移到新的離心管，立即加入100ul抗體穩(wěn)定液，即得到生物素標(biāo)記的抗體。

3. 生物素標(biāo)記抗體的保存

加入等體積抗體保存液，-20℃保存。

4. 生物素標(biāo)記抗體的標(biāo)記效率計(jì)算

請(qǐng)參考Frdbio? HABA法生物素標(biāo)記效率檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)：ARL0021T1)

5. 生物素標(biāo)記抗體的使用

一般來(lái)說(shuō)生物素標(biāo)記的抗體不能直接使用，需要配合鏈霉親和素標(biāo)記復(fù)合物使用，比如：FITC鏈霉親和素(FITC- conjugated Streptavidin)，HRP鏈霉親和素(HRP- conjugated Streptavidin)

注意事項(xiàng)：

1） 本試劑盒只針對(duì)抗體（非IgM亞型）的生物素標(biāo)記。若標(biāo)記其他非抗體蛋白試劑，可選擇貨號(hào)ARL0020K的生物素標(biāo)記試劑盒。

2） 本試劑盒中活性生物素為高活性試劑，請(qǐng)-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿凍存。

3）本試劑盒中組分抗體洗脫液若有沉淀析出，為正?，F(xiàn)象，離心取上清即可。

4）試劑盒組份在運(yùn)輸過程中可能造成顛倒，會(huì)使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請(qǐng)離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。

5）活性生物素需現(xiàn)用現(xiàn)配，干粉溶解后不能長(zhǎng)期保存；

6）抗體洗脫后，需盡快加入抗體穩(wěn)定液；

7）本試劑盒中的磁力架中磁鐵為特殊材質(zhì)，避免長(zhǎng)時(shí)間放在磁鐵和鐵磁性材質(zhì)附近，避免磁力消失。

8）  本試劑盒中部分試劑為高活性試劑，對(duì)皮膚和身體有一定的危害，請(qǐng)全程戴手套操作；