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組織病理染色是醫(yī)學(xué)科研中經(jīng)常用到的一門技術(shù)，而且整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中有很多細(xì)節(jié)需要科研人（狗）去留意。因此，我們將開啟“組織病理染色系列”分享，帶著大家一起熟悉并掌握病理染色的方方面面！組織病理染色實(shí)驗(yàn)整體包括兩個(gè)核心部分：組織切片的獲取和組織切片染色，而組織切片又主要包括石蠟切片和冰凍切片，今天我們將針對石蠟切片，詳細(xì)介紹組織石蠟切片的制備步驟，并總結(jié)各步驟的目的和注意事項(xiàng)。 整體來說，組織石蠟切片的制備過程涉及8大步驟：取材與固定 → 修整與沖洗 → 脫水+透明+浸蠟 → 包埋 → 切片 → 展片 → 撈片 → 烤片（可選）。下面我們來看每一個(gè)具體的步驟~ Step. 1 取材與固定 步驟：取出目標(biāo)組織塊，將其放入固定液（常用福爾馬林或4%多聚甲醛）中，固定液的量一般為組織體積的5倍以上。固定時(shí)間根據(jù)固定液的種類一般為12-24h（對于體積大的組織，可適當(dāng)延長時(shí)間）。 目的：保持組織原有形態(tài)、并使組織變得堅(jiān)硬便于后續(xù)切片。 Step. 2 修整與沖洗 步驟：按需求修整組織塊，放入包埋盒中，用流動(dòng)自來水沖洗30分鐘。 目的：洗去固定液。 Step. 3 脫水+透明+浸蠟 步驟：可使用全自動(dòng)脫水機(jī)或自行操作，程序設(shè)置：75%乙醇30min → 80%乙醇30min → 90%乙醇30min×2 → 95%乙醇30min×2 → 100%乙醇20min×2 → 二甲苯20min×2 → 組織石蠟 90min×3 。 目的： ①脫水——去除組織中的水分，使組織變?yōu)橛H脂性，便于后續(xù)浸蠟； ②透明——去除脫水劑，為浸蠟做準(zhǔn)備； ③浸蠟——去除透明劑，為包埋做準(zhǔn)備。 Step. 4 包埋 步驟：準(zhǔn)備包埋蠟，一般選用硬蠟（56-58℃或60-62℃為宜），倒入金屬框中，將組織包埋盒埋于熱蠟中，放于冰臺上冷卻4-6小時(shí)。待蠟塊完全凝固后取出。 目的：使組織塊保持固定形狀和硬度，便于切片。 Step. 5 切片 準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)備好切片所需的切片機(jī)、冰臺、刀片、毛筆、鑷子、載玻片、展片機(jī)或恒溫水浴箱（45-50℃）、染色架。提前將蠟塊置于冰臺10-30分鐘以增加硬度，便于切片。切去組織周圍多余石蠟，可將蠟塊切成梯形。 切片：將蠟塊固定于切片機(jī)上，左手執(zhí)毛筆，右手轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)。先修出組織塊并將切面修整平齊。然后設(shè)置切片厚度為5-7μm，切片?？梢郧谐蓡螐?，也可以連續(xù)切片形成蠟帶。 Step. 6 展片 左手拿毛筆輕輕托起切片，右手用鑷子夾起切片一角，正面向上平鋪在溫水中，切片在表面張力的作用下會自然展開，必要時(shí)用鑷子輕輕撥開。這一步容易弄破切片，要小心操作！ Step. 7 撈片 用載玻片豎直插入水中，靠近切片，輕輕帶出，使切片貼附在玻片上，標(biāo)記信息后放置在染色架上。 Step. 8 烤片（可選） 將玻片放在60℃恒溫烘箱中半個(gè)小時(shí)，烤干備用。 Summary Preparation of FFPE Sections 這是總流程圖！薄薄切片在展片的時(shí)候容易弄破，多練習(xí)一定會切出滿意的片子的  知道石蠟切片怎么制備之后，就可以進(jìn)行染色了，后續(xù)我們會繼續(xù)介紹常見的病理染色的實(shí)驗(yàn)步驟、原理和圖解分析哦！ |
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