|
羊肚菌(Morchella spp．)是一類大型珍稀野生名貴食藥兼用真菌，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值 J，其干品在市場(chǎng)上價(jià)格很高，產(chǎn)品供不應(yīng)求。目前羊肚菌人工栽培唯一成功的是1982年Ower等發(fā)明的羊肚菌( esculenta)人工栽培方法 。自20世紀(jì)80年代至今已有很多羊肚菌栽培成功的報(bào)道 。但是羊肚菌人工栽培存在著既要促使子實(shí)體原基形成，又要激發(fā)雙核化菌絲體形成的雙重困難，栽培難度很大 。因此，商品化生產(chǎn)羊肚菌子實(shí)體至今尚未取得突破性成果，羊肚菌人工栽培仍處于試驗(yàn)研究階段，對(duì)其開(kāi)發(fā)利用還停留在野生資源的采集階段。為此，筆者研究了不同培養(yǎng)基配方對(duì)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)及菌核和子實(shí)體形成的影響，旨在為羊肚菌的人工栽培及商品化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
1 材料與方法
1．1 材料
1．1．1 菌種。菌種M1、M2、M3均由陜西省微生物研究所大型真菌課題組純化并鑒定。
1．1．2 培養(yǎng)基。母種培養(yǎng)基：馬鈴薯20％ ，葡萄糖2％ ，蛋白胨1％ ，瓊脂2％ ，121℃ 滅菌30 rnin。原種培養(yǎng)基：木屑65．0％ ，麩皮20．0％ ，松針?lè)?0．0％ ，蔗糖1．0％ ，石膏1．0％ ，KH2PO4 0．1％ ，VBl10 mg／kg，121 ℃滅菌30 rain。
1．1．3 栽培種配方。按原種培養(yǎng)基的比例，將蔗糖、石膏、KH：PO 和V ，均分別溶于核桃樹(shù)浸出液、羊肚菌子實(shí)體浸出液、香樟木浸出液、新鮮蒜苗浸出液和當(dāng)年發(fā)生過(guò)羊肚菌的基腳土浸出液，充分溶解后分別用其拌料，料水比均為1：1
(W／V)，121℃下滅菌30 min，制成5種栽培種培養(yǎng)基，分別將其稱為配方A、B、C、D和E。
1．2 方法
1．2．1 菌種的活化。取4℃ 下保存的斜面菌種M1、M2和M3各1支，分別接于PDA斜面上，每個(gè)菌種接3支，無(wú)菌操作。接好的斜面置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到菌絲長(zhǎng)滿試管。
1．2．2 原種、栽培種的制備。將上述原種、栽培種的配方按常規(guī)方法配料、裝瓶，高壓蒸汽滅菌2 h，待冷卻后無(wú)菌操作接人菌株M1、M2和M3菌株的母種斜面，置于25℃ 、弱光下培養(yǎng)，待菌絲滿瓶后轉(zhuǎn)接栽培種，1瓶原種接10瓶栽培種，然后于25℃ 、弱光下培養(yǎng)，菌絲滿瓶后10 d左右轉(zhuǎn)接栽培袋。
1．2．3 栽培原料的制備。以上5個(gè)配方分別按比例調(diào)配好，裝入20 cm×40 em的聚乙烯塑料袋中，高壓蒸汽滅菌2h，待冷卻后在無(wú)菌條件下分別接入菌株M1、M2和M3的原種，每瓶接5袋，然后置于培養(yǎng)間，自然溫度培養(yǎng)，觀察其菌絲生長(zhǎng)和菌核產(chǎn)生的情況，并待菌絲滿袋后7 d左右進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室仿生栽培試驗(yàn)。
1．2．4 栽培條件及方法。實(shí)驗(yàn)室仿生栽培試驗(yàn)在人工氣候箱中進(jìn)行。栽培方法如下：選擇20 cm×20 cm x10 cm通氣性好的塑料筐若干，筐底部鋪1層枯樹(shù)葉后澆透水，再撒1薄層石灰粉，分別將發(fā)好的菌袋脫袋后小心掰碎放于筐內(nèi)，最后分別覆蓋1～2 cm厚的羊肚菌基腳土(以覆腐殖土為對(duì)照)，再在土表噴霧狀水，覆蓋1層塑料膜以保溫和保濕。所覆蓋的羊肚菌基腳土是在當(dāng)年生長(zhǎng)過(guò)羊肚菌的地方，收集30
cm以內(nèi)不超過(guò)5 em厚的表土層，保持原有的溫度，及時(shí)加以覆蓋。
1．2．5 栽培后的管理。參照文獻(xiàn)[5]進(jìn)行。羊肚菌屬于低溫型菌類，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段的菌絲在3—25℃之間都能生長(zhǎng)，但人工氣候箱內(nèi)的溫度需控制在15—18℃ 。生殖生長(zhǎng)階段子實(shí)體在溫度10～20℃都能生長(zhǎng)發(fā)育，但以13—16℃最適宜。此外，羊肚菌是變溫結(jié)實(shí)性菌類，保持4～l6℃ 的溫差刺激有利于子實(shí)體的形成。
羊肚菌是喜濕的菌類，整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程中保濕十分重要。羊肚菌菌絲生長(zhǎng)要求培養(yǎng)基含水量為70％ ～80％ ，應(yīng)將栽培料含水量控制在65％ 左右為宜，子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育要求空氣相對(duì)濕度在85％ ～95％ 。
羊肚菌的菌絲生長(zhǎng)發(fā)育對(duì)光線要求不嚴(yán)，但原基和子實(shí)體的形成需要散射光，因此在菌核形成后期，應(yīng)給予適當(dāng)?shù)墓庹仗幚怼９饩€過(guò)強(qiáng)、過(guò)弱都會(huì)影響子實(shí)體的形成。
2 結(jié)果與分析
2．1 不同培養(yǎng)基上羊肚菌菌絲生長(zhǎng)情況和菌核的培養(yǎng)特征
2．1．1 菌絲的生長(zhǎng)情況。M1、M2和M3 3種菌株在設(shè)定的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，但不同菌種在不同培養(yǎng)基上菌絲顏色明顯不同。M1和M2生長(zhǎng)初期為淺棕色，尖端近白色，后期變?yōu)樽丶t色。M3生長(zhǎng)初期近灰白色，后期變?yōu)樽攸S色。菌絲有光澤，鏡檢透明，表面光滑，有隔，無(wú)鎖狀聯(lián)合，隔中有隔膜小孑L，菌絲呈竹節(jié)狀，銳角分枝。
從表1可以看出，與菌株M1和M2相比，M3菌株的菌絲生長(zhǎng)速度快，滿袋早，長(zhǎng)勢(shì)也強(qiáng)；栽培原料不同，菌絲的生長(zhǎng)速度差異不明顯。在供試的5個(gè)配方中，以配方B和E表現(xiàn)最好，菌絲生長(zhǎng)最快，平均生長(zhǎng)速度可達(dá)8．52和8．60mm／d，滿袋早且生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)；3種菌種在配方A、C和D栽培料中都能生長(zhǎng)，但差異不明顯。這是因?yàn)檠蚨蔷訉?shí)體中可能含有某些活性物質(zhì)，羊肚菌基腳土中可能存在促進(jìn)羊肚菌子實(shí)體形成的共生微生物，二者均對(duì)羊肚菌菌絲的生長(zhǎng)起了積極的促進(jìn)作用。
表1 不同培養(yǎng)基上羊肚菌菌絲的生長(zhǎng)情況
注：+較差；++ 一般：+++ 優(yōu)良。
2．1．2 菌核的培養(yǎng)特征。菌核在形成的初期呈白色，較小，以后逐漸聚集變硬，并轉(zhuǎn)為淡黃色，最后變成棕褐色。從表2可以看出，菌株不同，其菌核的形成特征也存在差異。M1菌株15 d時(shí)即可形成菌核，且密度大；M2菌株則要在21 d以后方可形成，而且密度小；M3菌株在5種配方上都沒(méi)有形成菌核。從菌核形成的密度和質(zhì)量來(lái)看，B、E配方較適合M1菌株的生長(zhǎng)，產(chǎn)生菌絲早且生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)。因此，M1菌株具有進(jìn)
一步分化形成子實(shí)體的潛力。
表2 不同 配方培養(yǎng)基上羊肚菌菌核的培養(yǎng)特征
注：+密度??；++ 密度較大；+++ 密度大；一無(wú)菌核形成。
2．2 不同培養(yǎng)基上羊肚菌菌核及子實(shí)體的形成情況
2．2．1 覆土后不同菌株形成的差異。從表3可以看出，不同菌株在不同培養(yǎng)基上菌核的生成情況存在顯著差異。盡管在前期的試驗(yàn)過(guò)程中，M3菌株在5種培養(yǎng)基上都沒(méi)有形成菌核，但在覆土處理之后，該菌株表現(xiàn)出比Ml菌株更為明顯的優(yōu)勢(shì)；培養(yǎng)12 d以后，在E配方上即有一層白色的“菌霜”形成；進(jìn)一步培養(yǎng)之后，“菌霜”消失，出現(xiàn)白色小菌核；之后，該菌種陸續(xù)在其他4種培養(yǎng)基上產(chǎn)生菌核，且菌核的密度明顯比相同培養(yǎng)條件下其他菌種產(chǎn)生的菌核大，直徑也較大。
表3 不同培養(yǎng)基覆土后羊肚菌菌核的培養(yǎng)特征
注：+ 密度??；++ 密度較大；+++密度大。
2．2．2 覆土后子實(shí)體形成的差異。進(jìn)一步培養(yǎng)之后發(fā)現(xiàn)，M3菌株在培養(yǎng)基D中出現(xiàn)了3個(gè)原基，高0．8～1．0 cm，呈指狀。M3菌株在其余4種培養(yǎng)基上均未見(jiàn)原基的形成，M1、M2菌株在各個(gè)配方上均沒(méi)有原基產(chǎn)生。M3菌株在培養(yǎng)基D中形成的原基經(jīng)過(guò)后期的培養(yǎng)，并未見(jiàn)子實(shí)體的形成。這可能與培養(yǎng)基D中存在促進(jìn)原基形成的有效成分，而原基未能形成子實(shí)體可能與雙核菌絲的形成存在障礙有關(guān)。此外，該試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，M3菌株在初期培養(yǎng)過(guò)程中未見(jiàn)有菌核的形成，但在覆土處理之后產(chǎn)生了菌核。因此推測(cè)，羊肚菌基腳土中可能存在促使其生成菌核的有效成分，而覆土之后能有效地產(chǎn)生菌核，可能是羊肚菌子實(shí)體形成的必要條件之一。
3 結(jié)論與討論
經(jīng)過(guò)100多年的不懈努力，羊肚菌的研究取得了一定的進(jìn)展，但其生活史、生理和生態(tài)等方面的知識(shí)，仍然知之甚少，其營(yíng)養(yǎng)類型尚存在一定的爭(zhēng)議，其結(jié)實(shí)過(guò)程和結(jié)實(shí)機(jī)制尚不明了，羊肚菌商業(yè)化栽培至今尚未成功。事實(shí)上，在人工培養(yǎng)條件下，從純菌絲體很容易得到2、3級(jí)菌種，選擇適宜的2、3級(jí)菌種配方，可以產(chǎn)生菌核，但在轉(zhuǎn)入生殖生長(zhǎng)方面存在著巨大的障礙。因此，目前羊肚菌栽培的研究中有相同的菌種出菇率不同、相同的環(huán)境長(zhǎng)勢(shì)不同、相同的方法產(chǎn)量不同、即使完全滿足其生長(zhǎng)要求也不一定出菇等的現(xiàn)象發(fā)生，這可能也是人工栽培中許多研究者得出的結(jié)論不能可靠地加以重復(fù)和驗(yàn)證的根本原因。
現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料表明，覆以原發(fā)生過(guò)羊肚菌的地表土，能有效地增加其出菇率，可能與覆土中含有刺激羊肚菌結(jié)實(shí)的有益微生物有關(guān)。研究羊肚菌發(fā)生的土壤微生物區(qū)系，找出有助于結(jié)實(shí)的關(guān)鍵微生物，采用覆土技術(shù)模擬其野生環(huán)境，可能是羊肚菌栽培取得成功的有效途徑之一。在該研究中，用羊肚菌基腳土加以覆蓋，雖未見(jiàn)有羊肚菌子實(shí)體的生成，但形成了一定數(shù)量的原基。因此，在現(xiàn)有基礎(chǔ)上，如何誘導(dǎo)雙核化菌絲體的形成可能是今后研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)，也是羊肚菌人工栽培取得成功的關(guān)鍵。
參考文獻(xiàn)
[1]陳向東，朱戎，蘭進(jìn)．羊肚菌研究進(jìn)展[J]．食用菌學(xué)報(bào)，20O2，9(2)：56
— 61．
[2]OWER R，MILLS C G，MALACHOWSKI J A．Cultivation ofMorcheUa：US，
4594809[P]．1986—06—17．
[3]OWER R，MILLS C G，MALACHOWSKI J A．Cultivation ofMorchella：US，
4757640[P]．1989—07 —19．
[4]趙琪，康平德，戚淑威，等．羊肚菌資源現(xiàn)狀及可持續(xù)利用對(duì)策[J]．西
南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，23(1)：266—268．
[5]朱斗錫．羊肚菌工廠化栽暗技術(shù)的探討[J]．浙江食用菌，2010，18(1)：
4 —44
[6]王林海，黎冬華，張艷欣，等．我國(guó)芝麻主產(chǎn)區(qū)莖點(diǎn)枯病病原菌生物學(xué)
特}生分析[J]．華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2011(4)：232～238．
[7]曹麗霞，徐利敏，云曉鵬，等．內(nèi)蒙古地區(qū)向目葵主要病蟲(chóng)害發(fā)生現(xiàn)狀
及研究建議[J]．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，20o9(6)：83—85．
[8]王翠霞，徐金茹，習(xí)雨琳，等．冬瓜枯萎病菌核糖體rDNA ITS區(qū)的克隆
與序列分析[J]．華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2010(1)：80—83．
[9]妥德寶，安昊，張君，等．國(guó)內(nèi)外向曰葵施肥栽培技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與發(fā)展
趨勢(shì)[J]．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2010(6)：1-2．
[10]張吉清，崔友林，段燦星，等．大豆炭腐病病原菌鑒定[J]．華北農(nóng)學(xué)報(bào)，
2oo9(5)：192—196．
[11]孔慶全，趙存虎，賀小勇，等．綠豆地膜覆蓋栽培效益分析[J]．內(nèi)蒙古
農(nóng)業(yè)科技，2010(6)：34．
羊肚菌相關(guān)栽培技術(shù)：
羊肚菌種植
羊肚菌菌種制作技術(shù)
羊肚菌的栽培技術(shù)
羊肚菌栽培配方、方法
揭開(kāi)羊肚菌的神秘面紗（上）（視頻采訪）
揭開(kāi)羊肚菌的神秘面紗（下）（視頻采訪）
|
