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      科學(xué)網(wǎng)

       panhoy 2015-03-19

           mRNAmessenger RNA)信使RNA,是由編碼區(qū)(CDS)、上游的5’非編碼區(qū)和下游3’非編碼區(qū)組成,真核生物mRNA5’端帶有7-甲基鳥苷-三磷酸帽子結(jié)構(gòu),3’端有多腺苷酸尾巴,但NCBImRNA序列實際上是cDNA序列,即經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄得到的與RNA序列互補(bǔ)的DNA序列,一般不包括3’多腺苷酸尾巴。一個cDNA序列被稱為一個轉(zhuǎn)錄子,第一個堿基所在的位置為轉(zhuǎn)錄起始位點(TSS),cDNA都是由外顯子組成,但編碼蛋白質(zhì)的外顯子只有一個,即CDScoding sequence),這段序列也就是一個ORF區(qū),也就是這個cDNAORF序列。參與特定基因轉(zhuǎn)錄及其調(diào)控的TSS上游序列稱為啟動子(Promoter),如原核生物在轉(zhuǎn)錄起始位點上游-10有一段TATAAT的保守序列,有助于局部解鏈,在-35有一段TTGACA序列提供RNA聚合酶識別信號,真核生物上游-25-30TATA決定起始位點,-75位置CAATRNA聚合酶,這些都是啟動子,啟動子的范圍非常大,可以包含轉(zhuǎn)錄起始位點上游2000bp,有些特定基因的轉(zhuǎn)錄區(qū)內(nèi)部也存在著轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點,因此也屬于啟動子范圍。

          克隆可以簡單理解為復(fù)制品,例如假設(shè)通過提取mRNA,反轉(zhuǎn)錄后得到cDNA序列,然后將這段序列轉(zhuǎn)入載體,再通過劃線不斷的繁殖,就會得到許多裝有這段cDNA序列的克隆,實驗室為了方便,在給得到的這些克隆起名時,一般會取cDNA序列的名,但實際上在這個克隆里面不僅包括了這個cDNA,還包括了載體的DNA。

          STSsequence-tagged site)序列標(biāo)記位點,是基因組上定位明確、作為界標(biāo)并能通過PCR擴(kuò)增被唯一操作的短的、單拷貝DNA序列,一般長度為200-500bp,一個DNA序列要成為STS,首先序列必須已知,能用PCR方法檢測,第二STS必須在基因組上具有唯一的定位點。通過STS可以判斷在不同條件下測序得到的DNA序列的準(zhǔn)確性。

          ESTexpressed sequence tag)表達(dá)序列標(biāo)簽,是從一個隨機(jī)選擇的cDNA克隆,進(jìn)行5’端和3’端單一次測序挑選出來獲得的短的cDNA序列。全基因組測序發(fā)現(xiàn)基因即昂貴又費(fèi)時,因為基因組中只有2%序列編碼蛋白質(zhì),因此可以對真正編碼蛋白質(zhì)的mRNA構(gòu)建cDNA文庫,對cDNA進(jìn)行測序,得到EST序列,從而發(fā)現(xiàn)新基因。

      下面以大鼠CTGF基因為例子,小寫字母是轉(zhuǎn)錄子前后200bp啟動子相關(guān)序列,大寫字母表示的是cDNA序列,也就是轉(zhuǎn)錄子,其中藍(lán)色標(biāo)記的部分為CDS序列,湖藍(lán)色的為轉(zhuǎn)錄起始位點,即TSS,加粗帶下劃線的為起始密碼子

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      GCCGCGCCCCGACCATGCTCGCCTCCGTCGCGGGTCCCGTTAGCCTCGCCTTGGTGCTCCTCCTCTGCACCCGGCCTGCCACCGGCCAGGACTGCAGCGC

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      http://blog.sciencenet.cn/blog-247480-482935.html  此文來自科學(xué)網(wǎng)胡小文博客
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