犬泌尿道感染發(fā)病率正呈逐年上升的趨勢，嚴(yán)重威脅著寵物犬的健康，尤其是城市中的寵物犬，甚至影響到寵物主人的日常生活等方面。目前，針對犬泌尿道感染的研究主要集中在臨床癥狀、治療方法，很少有研究報(bào)道致使犬泌尿道感染的主要致病因素----細(xì)菌。本研究通過在臨床發(fā)現(xiàn)并確診的犬泌尿道感染的病例，實(shí)驗(yàn)分離得到引起犬泌尿道感染的細(xì)菌，進(jìn)一步觀察和分析細(xì)菌的生物學(xué)特性；通過藥敏實(shí)驗(yàn)研究這些菌群的耐藥性，為犬泌尿道感染的臨床診斷、治療藥物的使用提供了一些思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)對象的選擇

所有病例均來自江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物教學(xué)醫(yī)院收治的犬只，共23只，其中雌性13只，雄性10只。記錄的病例收治時(shí)間從2012年10月至2014年8月。選擇提出病例的標(biāo)準(zhǔn)是：

a）尿液致病菌培養(yǎng)陽性。

b）收治期間在尿道之外無其他病原微生物感染（皮膚感染病例除外）

c）使用相應(yīng)的培養(yǎng)基培養(yǎng)，并通過尿液或尿沉渣顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)病原微生物成分，結(jié)果為陰性的病例將被排除，不作為實(shí)驗(yàn)對象。

1.1.2 抗生素紙片

氨芐西林/舒巴坦（Ampicillin/Sulbatam,A/S)、阿米卡星(Amikacin,AK)、氨芐西林(Ampicillin,AM)、氨曲南(Aztreonam,ATM)、頭孢曲松(Ceftriaxone，CRO)、頭孢唑啉(Cefazolin,CFZ)、環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin,CP)、復(fù)方新諾明（Trimethoprim/sulfa-methoxazole,TMP-SMZ或T/S）等抗生素紙片為英國Oxiod公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 病例記錄

從病例記錄中所收集的數(shù)據(jù)主要包括動物個(gè)體的資料（如：性別、年齡、品種等），發(fā)病時(shí)間，伴發(fā)疾病，一個(gè)月之內(nèi)所進(jìn)行的所有治療（指在確診為泌尿道感染之前的一個(gè)月內(nèi)），臨床癥狀，實(shí)驗(yàn)室檢查的異常結(jié)果，細(xì)菌的分離培養(yǎng)結(jié)果，治療方法與治療效果。假如在患病動物接受特異性抗感染治療后所進(jìn)行的連續(xù)兩次尿培養(yǎng)結(jié)果陰性（間隔為一周），則治療效果被記錄為感染被清除。

1.2.2 尿液的收集及細(xì)菌分離鑒定

采用無菌膀胱穿刺和導(dǎo)尿的方法進(jìn)行尿液的收集；采用分區(qū)劃線接種尿液；將分離純化出的細(xì)菌分離出來，接種至新的培養(yǎng)基，根據(jù)菌落形態(tài)，鏡檢和生化試驗(yàn)結(jié)果，綜合以上三方面鑒定結(jié)果，參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》和《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》對分離菌株進(jìn)行初步分類；最終通過細(xì)菌的生化特性進(jìn)行鑒定。

1.2.3采用K-B藥敏片法

參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》。質(zhì)量控制菌為大腸埃希菌ATCC25922，肺炎克雷伯菌ATCC700603。根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會2007年標(biāo)準(zhǔn)操作和判斷結(jié)果。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1動物個(gè)體情況

研究中共有23只動物符合要求。23只犬中，9只為純種犬共5個(gè)品種。最常見的涉及的品種為北京犬(n=3)。其它涉及的品種包括西施犬(n=2)，斗牛犬(n=2)，貴賓犬(n=1)，德牧(n=1)。雜種北京犬是最常見的患病雜交犬(n=5)。見表1-1。

2.2 細(xì)菌分離株菌落特征及培養(yǎng)性狀

通過對收集患泌尿道感染犬尿液的細(xì)菌分離、菌落形態(tài)觀察及不同表征細(xì)菌的純化，得到主要致病菌8株。分別命名分離純化的致病菌，依次編號為B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8。將純化后的待檢測菌株菌株在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h后，按革蘭氏染色法、3％KOH簡易法來區(qū)別8個(gè)細(xì)菌菌株，結(jié)果表明：有5株細(xì)菌呈革蘭氏陰性反應(yīng)，3株呈革蘭氏陽性反應(yīng)。經(jīng)細(xì)菌革蘭氏染色、芽孢染色在油鏡下觀察8株菌，結(jié)果顯示：5個(gè)菌株為桿狀或短桿狀或棒狀，3個(gè)菌株為球形，鏈狀或簇狀。同時(shí)，記錄供試菌株在NA/LB培養(yǎng)機(jī)上30oC培養(yǎng)48h后所呈現(xiàn)的不同表征情況，具體結(jié)果如下：

2.3分離菌株的生化特征

對8株供試菌株進(jìn)行生化性狀測定，包括接觸酶、氧化酶、糖發(fā)酵、水解試驗(yàn)、氮素利用和其他，其結(jié)如表1-4。

由表可以看出，8個(gè)菌株除B2后均能分解葡萄糖，只有B3、B4氧化酶試驗(yàn)為陽性，其余為陰性。只有B6能產(chǎn)生吲哚，多數(shù)菌株不能運(yùn)動，對碳素和氮素化合物的分解利用能力，亦無一定的規(guī)律性，不同菌株表現(xiàn)出了明顯的差異性。

通過結(jié)合菌體特征分析、菌落形態(tài)的特點(diǎn)，具體參照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》及《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》進(jìn)行細(xì)菌菌種的鑒定，8株菌B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8分別與金黃色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus )、肺炎克雷伯氏菌(K.peneumoniae)、屎腸球菌(Enterococcus Faecium)、銅綠假單胞菌(P.Aeruginosa)、變形桿菌(proteusbacillus vulgaris)、大腸桿菌(E. coli)、陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae)、鏈球菌(Streptococcus)共8個(gè)菌屬非常接近。

2.4 犬泌尿道感染細(xì)菌的分布

根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)從泌尿道感染的患犬的尿液當(dāng)中分離得到的致病菌株主要為大腸桿菌，占82.6%，其他致病細(xì)菌，如肺炎克雷伯菌、變形桿菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌、鏈球菌分別為8.7-21.7%。結(jié)果見表1-5。

2.5 G-桿菌對抗菌藥物的耐藥率

主要G-桿菌對氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、頭孢唑啉、環(huán)丙沙星耐藥率較高；大腸桿菌對氨曲南的耐藥性也較高。而對頭孢曲松、阿米卡星則耐藥率較低；對多粘菌素B耐藥率基本為0（見表2-1）。

2.6 G+球菌對抗菌藥物的耐藥率

主要G+球菌對萬古霉素的敏感率為100%，對紅霉素、利福平耐藥率較低，而對其他抗菌藥物，如青霉素G、鏈霉素、苯唑西林的耐藥率基本> 50%。而對于復(fù)方氨甲惡唑，分離出的3種G+球菌則表現(xiàn)出不同的耐藥率（見表2-2）。

3 小結(jié)

犬泌尿道感染已成為犬臨床最常見的疾病之一，由于其臨床癥狀和體征不典型，而主要以發(fā)熱等全身癥狀為主，容易被誤診、漏診。該病易反復(fù)感染，并最終可能導(dǎo)致終末期腎衰竭。因此早期診斷，盡早發(fā)現(xiàn)泌尿系統(tǒng)感染致病菌則至關(guān)重要。

本研究表明，犬泌尿道感染患犬中公犬與母犬比例為1:1.3，母犬的發(fā)病率略高于公犬，這可能與不同性別間泌尿道結(jié)構(gòu)有關(guān)，導(dǎo)致母犬更容易發(fā)生泌尿道感染。除了性別分布不同之外，本研究還發(fā)現(xiàn)，隨年齡的增長，犬泌尿道感染也隨之增長。分析原因，發(fā)現(xiàn)這可能與犬年齡增大，導(dǎo)致免疫力下降；多數(shù)主人對犬日常生活注意不夠，日積月累后，致使犬泌尿道感染幾率增大，而且持續(xù)感染增加。有研究發(fā)現(xiàn)，臨床中合并有腎實(shí)質(zhì)病變、免疫功能低下等尿路感染高危因素患犬即使無尿路癥狀也應(yīng)高度警惕尿路感染，及時(shí)行尿培養(yǎng)檢查明確診斷。

本研究通過采集犬泌尿道感染犬膀胱內(nèi)尿液，無菌條件下分離培養(yǎng)，利用生化反應(yīng)鑒定分離純化出的細(xì)菌。共鑒定出革蘭氏陰性致病菌5株，革蘭氏陽性致病菌3株，分別為大腸桿菌，肺炎克雷伯菌、變形桿菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌、鏈球菌等8株，其中大腸桿菌(82.6%)是主要致病菌。

據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在犬泌尿道感染的菌群中，大腸桿菌所占比例最高，表明大腸桿菌相比與其他致病性細(xì)菌，是引起犬泌尿道感染的最常見病原菌。導(dǎo)致這些致病菌的感染，符合一些臨床現(xiàn)象，很多是由于疏忽造成，但這對犬來說可以造成極大的致病力。例如：現(xiàn)在臨床上仍有很多情況，超量長時(shí)間使用抗生素。導(dǎo)致消化道與體表的微生物菌群的平衡被打破，大量繁殖的細(xì)菌既增大了動物被感染原污染的幾率；有些動物在診斷與治療中進(jìn)行過插管導(dǎo)尿或留置導(dǎo)尿管，這是細(xì)菌進(jìn)入泌尿道的最重要途徑。那么，對于臨床診療應(yīng)該更加注重操作所造成的后果，降低犬泌尿道感染的幾率；同時(shí)，選取更有效的抗生素進(jìn)行治療。

針對這種現(xiàn)狀，本研究根據(jù)從犬泌尿道感染分離出的致病菌，對其經(jīng)行了常用藥物耐藥性試驗(yàn)（藥物敏感試驗(yàn)）。結(jié)果顯示，主要G-桿菌對多黏菌素B顯示100%敏感，但目前，該藥物主要用于人尿路等感染的治療，且價(jià)格昂貴，寵物臨床的應(yīng)用還未見報(bào)道；同時(shí)，本藥可損害腎臟，在確定腎臟損傷情況下，需要慎用。主要G-桿菌對氨芐西林和氟喹諾酮類的耐藥率則較高，長期以來喹諾酮類抗菌藥物是犬泌尿道感染經(jīng)驗(yàn)用藥的首選，而本次研究結(jié)果表明，在不依據(jù)藥敏實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，而盲目使用喹諾酮類抗菌藥物治療泌尿道感染并不是可取的方案。阿米卡星耐藥率也較低，尤其是對大腸桿菌和克雷伯菌，這可能與阿米卡星具有較強(qiáng)耳毒性及腎毒性，在臨床犬泌尿道感染較少被應(yīng)用有關(guān)。因此，多黏菌素類抗菌藥物是復(fù)雜性犬泌尿道感染的首選藥物，但需要在作出全面的檢查和評估腎臟功能的情況下應(yīng)用，同時(shí)不應(yīng)與其他有腎毒性或神經(jīng)肌肉阻滯作用的藥物聯(lián)合應(yīng)用，以免發(fā)生意外。對于感染程度低或單純細(xì)菌造成的尿路感染，可以通過實(shí)驗(yàn)室藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇合適的抗生素進(jìn)行治療，如阿米卡星、頭孢類抗生素等。

主要G+球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果提示，在革蘭陽性球菌的經(jīng)驗(yàn)用藥選擇上青霉素已不適合臨床治療，可考慮呋喃妥因或萬古霉素，其中呋喃妥因的價(jià)格低廉且敏感性高，宜作為首選；萬古霉素價(jià)格較高，對細(xì)菌殺傷力強(qiáng)，為避免篩選出更多耐藥菌株，僅在重癥感染時(shí)選用。另外上述兩種抗菌藥物均有一定腎臟毒性, 建議用藥過程中注意監(jiān)測腎臟功能及藥物用量依患者腎小球清除率酌情而定?？傊?，由于抗菌藥物的不斷更新及細(xì)菌耐藥性的不斷變化，臨床寵物醫(yī)生在進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)性治療時(shí)應(yīng)及時(shí)了解致病菌及其耐藥情況，盡可能根據(jù)尿培養(yǎng)結(jié)果和藥敏實(shí)驗(yàn)選擇合適的抗菌藥物，減少細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，從而提高臨床治療效果。