養(yǎng)殖魚類脂肪肝病的診斷和防治研究概況

北京漁經(jīng)王金秀 2016-03-10

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近年來，由于集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖的普遍推廣，環(huán)境條件引起的非寄生性魚病病情日趨嚴(yán)重，其中餌料能量過高、營養(yǎng)失衡，投喂過度，飼料變質(zhì)和濫用藥物等造成魚類肝損害和脂肪肝病，已經(jīng)成為鯉魚、草魚、羅非魚等大規(guī)模養(yǎng)殖對(duì)象的常見疾病。具有脂肪肝病變的魚類臨床癥狀復(fù)雜，易誘發(fā)其他肝性疾病，成品魚肌肉脂肪含量也會(huì)明顯升高，導(dǎo)致品質(zhì)下降，養(yǎng)殖戶蒙受經(jīng)濟(jì)損失。本文針對(duì)魚類脂肪肝病的病因、診斷方法、預(yù)防和治療技術(shù)，系統(tǒng)梳理國內(nèi)外研究成果，為魚類脂肪肝病的深入研究及藥物開發(fā)提供參考。

1　魚類脂肪肝病的病因

魚類脂肪肝病按其誘因大致可分為營養(yǎng)性和藥源性2種，前者主要由魚體內(nèi)脂類代謝障礙引起發(fā)病，后者則屬于養(yǎng)殖用藥及其代謝物對(duì)肝的直接或間接應(yīng)激性損傷。

1.1　營養(yǎng)性病因

鯉魚、草魚、鱘魚等淡水魚和羅非魚、大黃魚等海水魚是脂肪肝病的易發(fā)魚種，主要原因是這些經(jīng)濟(jì)種類的人工集約化養(yǎng)殖范圍較廣，養(yǎng)殖密度大，飼料投喂不夠規(guī)范。

飼料中脂肪含量過高會(huì)造成魚類肝脂含量偏高，肝臟出現(xiàn)異常，肝細(xì)胞脂肪浸潤等，特別是熔點(diǎn)低的脂肪消化吸收率更高；而脂肪中所含脂肪酸種類和量也影響魚肝細(xì)胞膜對(duì)脂肪的交換能力，不飽和脂肪酸比例升高可增加肝細(xì)胞膜流動(dòng)性，減少脂肪堆積；過高碳水化合物和蛋白質(zhì)成分的飼料會(huì)造成魚類攝入過多糖類、蛋白質(zhì)，堆積脂肪；缺乏必要的維生素如膽堿、維生素B、維生素E、肌醇等都會(huì)導(dǎo)致魚體內(nèi)脂肪代謝功能受損，誘發(fā)肝病。

飼料投喂過度、魚類不同生長階段和混養(yǎng)投喂不規(guī)范也是引發(fā)魚類脂肪肝病的主要原因。養(yǎng)殖戶過分追求魚類生長速度快、規(guī)格大，每天多次不間斷投喂，導(dǎo)致魚體營養(yǎng)攝入超過正常需求，生長過快并出現(xiàn)肥胖現(xiàn)象。且魚在不同生長階段身體所需營養(yǎng)不盡相同，養(yǎng)殖戶不及時(shí)調(diào)整配合飼料的成分，就會(huì)造成蛋白質(zhì)、碳水化合物等成分不足或過多，代謝紊亂。同時(shí)，集約化養(yǎng)殖通常采取混養(yǎng)模式，如果不同種類規(guī)格的魚的營養(yǎng)需求差距較大，共同投喂飼料必然導(dǎo)致不同魚的脂肪、蛋白質(zhì)等成分?jǐn)z入不足或過多。這些不當(dāng)?shù)娘暳贤段狗绞蕉紩?huì)造成魚體內(nèi)肝臟脂肪堆積，引發(fā)肝病。

1.2　藥物性病因

在養(yǎng)殖過程中經(jīng)常會(huì)使用抗菌類藥物控制魚病暴發(fā)，而化學(xué)藥物使用不當(dāng)和濫用也會(huì)引起肝功能損害，誘發(fā)魚類脂肪肝病。如呋喃唑酮可引起急性肝壞死，氯霉素、鏈霉素等抗生素?fù)p傷肝功能，磺胺類和孔雀石綠等藥物會(huì)在魚體內(nèi)蓄積，對(duì)肝、腎造成潛在危害，上述一些藥物已經(jīng)列入國家禁用獸藥清單中。與化藥相比，使用中草藥如鐵莧菜、大黃、五倍子、黃芩等進(jìn)行細(xì)菌性魚病防治具有成本低、毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)，但效果仍有差距。養(yǎng)殖過程中在追求藥效的同時(shí)如果不注意科學(xué)用藥，特別是化學(xué)藥物使用過于頻繁且種類繁多，雖然大多數(shù)情況下不足以引起急性中毒，但對(duì)肝功能產(chǎn)生的應(yīng)激性損傷很容易引起脂肪代謝障礙，導(dǎo)致脂肪肝。

2　魚類脂肪肝病的臨床診斷

魚類脂肪肝病的表現(xiàn)形式多種多樣，俗稱也較多，常見的脂肪肝、白肝病、花肝病、綠肝病、肝腫大等被觀察到有明顯肝細(xì)胞脂肪浸潤的病癥，均可認(rèn)為是脂肪肝或是脂肪肝與其他病癥的綜合表現(xiàn)形式。

2.1　表觀診斷

發(fā)病初期魚類一般無明顯體表癥狀，行為特征上反應(yīng)也不明顯，有病魚表現(xiàn)為離群獨(dú)游，活動(dòng)遲鈍，不攝食；隨著病情的加重，魚類呈現(xiàn)不同程度的行動(dòng)遲緩、食欲不振、餌料系數(shù)增大、生長緩慢和顏色變淡、體形肥胖等現(xiàn)象；當(dāng)病情進(jìn)一步加重，魚類肝細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)遭到破壞，直接影響肝臟的代謝能力，降低魚類機(jī)體免疫力，使病魚易受外源致病因子感染而發(fā)生大規(guī)模死亡。

2.2　剖檢觀察

對(duì)病魚進(jìn)行病理剖檢常可見肝、脾、胰、腸等器官被脂肪粘連在一起，肝色異常，由粉紅色變?yōu)辄S褐色，肝表層有脂肪覆蓋，肝組織脆弱，彈性差?；贾靖尾〉亩砹_斯鱘、奧尼羅非魚、紅姑魚等均出現(xiàn)肝胰臟、膽囊和腸管表面脂肪覆蓋明顯，組織空泡化，肝臟顏色變化為白色、土黃色、花色，甚至為綠色，并柔軟易碎，部分出現(xiàn)白色壞死病灶，海水魚和淡水魚患病肝臟的病理表觀類似。

2.3　顯微觀察

病魚的肝細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下一般呈現(xiàn)排列不規(guī)則、肝細(xì)胞索不明顯、細(xì)胞核偏離、肝內(nèi)積累脂肪顆粒等現(xiàn)象；而由于脂肪的細(xì)胞代謝主要是在線粒體中進(jìn)行，通過滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向細(xì)胞外運(yùn)輸，在電子顯微鏡下通常能觀察到病魚肝細(xì)胞線粒體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與細(xì)胞漿內(nèi)有大量微細(xì)至大顆粒狀的脂滴出現(xiàn)。

2.4　檢測(cè)指標(biāo)

脂肪酸及其代謝產(chǎn)物三酰甘油（TC）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHOL）、谷丙轉(zhuǎn)苷酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST或GOT）等指標(biāo)常被用來輔助認(rèn)定脂肪肝病。研究表明，大黃魚肝臟脂肪中n-3多不飽和脂肪酸（n-3PUFA）和n-6多不飽和脂肪酸（n-6PUFA）的含量比例在正常肝臟中最高，在輕微脂肪肝中降低了約4倍，嚴(yán)重脂肪肝中降低了約8倍。

3　魚類脂肪肝病模型的構(gòu)建

建立肝病模型是探知肝臟疾病的病因、病理生理和判斷藥物療效的有用工具。在醫(yī)學(xué)及獸醫(yī)學(xué)中，肝病模型研究已經(jīng)十分普遍，按其致病機(jī)理可分為化學(xué)性肝損傷、免疫性肝損傷、感染性肝損傷、酒精性肝損傷、營養(yǎng)代謝性肝損傷、手術(shù)性肝損傷等6大類，而魚類脂肪肝病模型通常集中在化學(xué)性和營養(yǎng)代謝性肝損傷模型構(gòu)建。

3.1　營養(yǎng)代謝性脂肪肝模型

采用不良的養(yǎng)殖方法構(gòu)建營養(yǎng)代謝性脂肪肝模型所需時(shí)間通常較長，但脂肪肝復(fù)制率高。與哺乳動(dòng)物8周～12周的建模時(shí)長相比，魚類由于缺乏皮下脂肪層，脂肪的主要貯存位點(diǎn)是肝臟，因此脂肪肝建模時(shí)間要少于哺乳動(dòng)物，通常6周～8周即可構(gòu)建模型，并且模型構(gòu)建期間可動(dòng)態(tài)追蹤到脂肪肝的形成過程，有利于進(jìn)一步的細(xì)致研究。具體做法是利用高脂飼料和普通飼料分別喂養(yǎng)動(dòng)物一段時(shí)間，比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血清和肝臟生化、肝組織病理學(xué)指標(biāo)的差異。研究發(fā)現(xiàn)，8周后小鼠的肝指數(shù)、血清甘油三脂、總膽固醇、谷草轉(zhuǎn)氨酶和肝勻漿丙二醛等指標(biāo)顯著升高，而肝勻漿超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶明顯降低，并可見彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，大量炎性細(xì)胞浸潤；而4周后斑馬魚血液和肌肉中就出現(xiàn)膽固醇、甘油三酯含量升高，肝細(xì)胞腫脹，肝內(nèi)脂滴沉積增多；鯉魚則在6周后表現(xiàn)出谷丙轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶升高，血清白蛋白降低；羅非魚也在養(yǎng)殖8周后出現(xiàn)肝指數(shù)升高，嚴(yán)重的還有脂肪沉積導(dǎo)致肝細(xì)胞死亡情況發(fā)生。

根據(jù)癥狀出現(xiàn)前后連續(xù)測(cè)定的指標(biāo)數(shù)據(jù)，可以構(gòu)建特定魚類的脂肪肝形成模型，為臨床診斷提供參考。

3.2　化學(xué)性脂肪肝模型

在動(dòng)物飼料投喂中加入化學(xué)藥物，一方面起到加快建模的作用，另一方面用來模擬現(xiàn)實(shí)中化學(xué)藥物濫用造成的肝損傷。單純依靠營養(yǎng)代謝建立脂肪肝模型，雖然更能模擬病癥的發(fā)生機(jī)制，但時(shí)間較長、成本較高，實(shí)際試驗(yàn)過程中常利用或輔以化學(xué)物質(zhì)加快模型建立的進(jìn)程。目前，常用的化學(xué)藥物有四氯化碳、D-半乳糖胺、甲基亞硝胺、對(duì)乙酰氨基酚、丙基硫氧嘧啶等。用含2g/kg丙基硫氧嘧啶的高糖高脂肪飼料喂養(yǎng)大鼠10d，肝臟中開始有脂肪蓄積，隨造模時(shí)間的延長脂肪蓄積越多，在30d時(shí)轉(zhuǎn)為重度脂肪肝；通過草魚腹腔注射硫代乙酰胺300mg/kg并投喂含油脂的飼料，2周后草魚出現(xiàn)生長率下降，血清轉(zhuǎn)氨酶比值升高，血清SOD酶和肝臟GSH-PX酶活性分別降低和升高情況，6周后肝細(xì)胞腫脹且邊界模糊，部分有炎癥細(xì)胞浸潤，并都出現(xiàn)肝纖維化，據(jù)此建立草魚肝損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停欢斗哦一鶃喯醢凤曫B(yǎng)4周后，斑馬魚肝細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死，肝臟網(wǎng)狀纖維合成分泌增多，6周后肝臟纖維過度沉積，纖維結(jié)節(jié)形成，斑馬魚肝纖維模型成功構(gòu)建。

除了能夠加快建模外，建立化學(xué)性脂肪肝模型還可用來模擬外界化學(xué)藥物造成的肝損傷。例如，飼料中添加高濃度生長促進(jìn)劑喹乙醇，導(dǎo)致斑馬魚肝臟細(xì)胞因超負(fù)荷工作被破壞，脂肪變性，細(xì)胞核固縮；氯霉素類抗生素和磺胺類藥物會(huì)導(dǎo)致草魚急性中毒，出現(xiàn)肝腫大，表面出血點(diǎn)，轉(zhuǎn)氨酶升高。

通過不同濃度的藥物誘導(dǎo)，測(cè)定肝臟生化指標(biāo)，據(jù)此構(gòu)建魚類藥物性肝損傷模型，有助于模擬常用藥物作用過程，為藥物篩選和用量奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

4　魚類脂肪肝病的防治

4.1　西藥治療

西藥中常用的抗脂肪肝活性因子包括膽堿、蛋氨酸、甜菜堿、磷脂、肉堿、賴氨酸和肌醇等，通過在飼料中補(bǔ)充包含上述物質(zhì)的藥物，有利于提高動(dòng)物對(duì)脂質(zhì)的吸收利用效率，降低肝脂含量，促進(jìn)生長。例如，在尼羅羅非魚飼料中添加0.2g/kg～3g/kg的甜菜堿，魚體肌肉中脂肪含量明顯降低；蛋氨酸、膽堿和大豆卵磷脂能夠起到提高肝臟中甘油三酯向肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)的作用，降低草魚肝胰臟脂質(zhì)積累；大西洋鮭攝食含3.7g/kg肉堿的飼料，肝臟中脂肪酸氧化速率加快，肌肉和內(nèi)臟脂肪含量均顯著降低，而肉堿在魚體肝臟中可由賴氨酸和蛋氨酸合成，共同作用降低了內(nèi)臟和魚體的含脂率。

4.2　中藥治療

近年來，抗脂中草藥的研究也越來越多，人參、丹參、澤瀉、決明子、姜黃、何首烏、絞股藍(lán)、靈芝、枸杞、山楂、柴胡、虎杖、茵陳、銀杏葉、姜、大蒜等具有保肝利膽效果的中草藥已被廣泛應(yīng)用于治療人類的各類肝病。在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，中草藥防治魚類脂肪肝的相關(guān)研究也有較多報(bào)道。如垂盆草提取液中的黃酮類成分具有抗肝損傷的作用，廣泛應(yīng)用于治療慢性病毒性肝炎，飼料添加1.2g/kg垂盆草提取物可改善由于持續(xù)的高脂飲食引起的草魚肝細(xì)胞脂肪變性，促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝，顯著治療草魚脂肪肝疾??；虎杖苷是蓼科植物虎杖的根部提取物，對(duì)于清除自由基，防治肝損傷有很好的效果，在基礎(chǔ)日糧中添加10g/kg的虎杖苷可以明顯提高建鯉機(jī)體的抗氧化功能，降低氧自由基和脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能的完整，緩解CCl4對(duì)建鯉肝組織損害；在餌料中添加黃岑可以增強(qiáng)肝功能和造血功能；當(dāng)歸提取物可清除自由基和提升抗氧化能力，對(duì)建鯉肝臟組織有保護(hù)和抗氧化作用。除單體外，中草藥組方對(duì)防治魚類脂肪肝病的作用效果更加明顯。按4∶5∶3的比例在飼料中添加龍膽灣肝散、排毒肝膽散和三黃散可減輕患病魚肝臟脂肪沉積；絞股藍(lán)聯(lián)合三七、虎杖、茵陳、澤灣、白術(shù)可治療鯉魚脂肪肝病；適量三黃粉、多維復(fù)合制劑和大蒜素、多維復(fù)合制劑對(duì)草魚肝膽疾病有顯著治療效果。

4.3　其他種類活性物質(zhì)

最新研究表明，人工合成具備抗氧化能力的新型活性物質(zhì)如竹青素、多糖、殼聚糖等也對(duì)魚類脂肪肝癥狀有一定緩解。竹青素能有效激活魚類脂質(zhì)代謝，用添加了3g/kg竹青素的新型生態(tài)環(huán)保飼料飼養(yǎng)大黃魚，各項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)與傳統(tǒng)冰鮮小雜魚蝦喂養(yǎng)的大黃魚組對(duì)照，試驗(yàn)組大黃魚的肝臟、腹肌、背肌中的脂肪含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），脂肪肝癥狀得到明顯緩解；而低分子殼聚糖能顯著提高羅非魚肝組織抗超氧陰離子自由基和SOD濃度，降低羅非魚的肝脂含量，其中5g/kg低分子殼聚糖的降肝脂效果最為顯著。

5　展望

目前對(duì)于人工集約化養(yǎng)殖魚類脂肪肝病暴發(fā)原因、臨床癥狀等已經(jīng)有了大量研究和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，但魚類與哺乳動(dòng)物肝臟模型的研究進(jìn)展相比還存在較大差距，營養(yǎng)性和藥物性脂肪肝的誘發(fā)機(jī)制有待進(jìn)一步探討。今后，應(yīng)針對(duì)魚類肝臟脂肪的產(chǎn)生和代謝機(jī)理展開深入研究，構(gòu)建常見經(jīng)濟(jì)魚類營養(yǎng)代謝性和化學(xué)性脂肪肝模型，為深入研究抗脂肪肝藥物特別是中草藥組方中活性成分的作用機(jī)制，開發(fā)新型高效抗脂肪肝活性物質(zhì)，為人工集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖的健康發(fā)展提供有力的科技支撐。

李　丹，劉龍騰

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