要速讀文獻(xiàn),首先要熟悉的是文獻(xiàn)中各種Fig.,等你什么時(shí)候一眼就能看懂,比如下面這張圖: 這是自噬研究中最常見(jiàn)的圖,要怎么樣才能一眼就能看懂呢?首先我們要了解這張圖上所涉及的自噬研究的工具。 左邊這個(gè)熒光圖片,采用的工具叫做GFP/mRFP-LC3,是一種質(zhì)?;蛘呗《具^(guò)表達(dá)帶兩個(gè)融合蛋白的LC3,因?yàn)長(zhǎng)C3是自噬體膜形成的關(guān)鍵。 所以,過(guò)表達(dá)GFP/mRFP-LC3后,這個(gè)融合兩個(gè)熒光蛋白的LC3會(huì)包在自噬體表面。 當(dāng)自噬體和溶酶體結(jié)合,開(kāi)始自噬的時(shí)候,對(duì)酸性敏感的GFP,熒光會(huì)被淬滅掉,也就是綠色熒光會(huì)變?nèi)?,但是紅色的不變。 于是就會(huì)有這樣的效果,就是自噬增強(qiáng)后,Merge的Fig.里,綠色會(huì)變少。 我們回到剛才的Fig.里,可以看到,加入這個(gè)miRNA后,Merge圖里的綠色熒光變?nèi)?。那為啥GFP的圖里好像沒(méi)變?估計(jì)是他貼圖的曝光時(shí)間不一致吧,太短可能單一熒光會(huì)看不清。所以需要通過(guò)Merge圖來(lái)分析自噬變化。 還有一種技術(shù)是自噬研究中最常見(jiàn)的,就是LC3的兩種形態(tài)。LC3-I在Atg3/Atg7的作用下,會(huì)變成LC3-II。而LC3-II是形成自噬體膜的關(guān)鍵,當(dāng)自噬體降解后,LC3-II會(huì)在Atg4B的作用下,還原成LC3-I。是不是有點(diǎn)繞? 你只需要記住,LC3-II增多代表自噬形成增加,LC3-I增多代表自噬減弱就可以了。 于是我們返回頭看那張F(tuán)ig.,這里的Baf A1(巴弗洛霉素A1)是自噬抑制劑,它的功能是抑制自噬體和溶酶體結(jié)合,所以加了BafA1后LC3-II不會(huì)被降解還原成LC3-I,而是累積在那里。不加BafA1的情況下,可以看出,加入這個(gè)miRNA后,LC3-II增多,自噬增強(qiáng)。 李莫愁博士:好了,這樣,你應(yīng)該也能快速了解自噬的文獻(xiàn)中最常見(jiàn)的這種Fig.是怎么回事了吧?這種Fig.是自噬研究中最為常見(jiàn)的,這個(gè)Fig.所在的文獻(xiàn)是: |
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