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      得到完美的色譜圖要跳過(guò)哪些坑?HPLC譜圖常見(jiàn)故障及解決方法!

       llilang 2017-07-06
      液相色譜中的許多問(wèn)題都能在譜圖上反映出來(lái),其中有一些問(wèn)題可以通過(guò)改變設(shè)備參數(shù)得到解決;而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。

      得到完美的色譜圖要跳過(guò)哪些坑?HPLC譜圖常見(jiàn)故障及解決方法!

      一、拖尾峰

      1.  篩板阻塞,柱子兩頭的過(guò)濾篩板如果堵塞,樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲,使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過(guò)反沖色譜柱,或者更換篩板。

      2.  色譜柱塌陷,是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失,不能對(duì)物質(zhì)形成保留,使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出,但是又還有一點(diǎn)柱效,因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。

      3.  有污染,即樣品不在同一起跑線起跑,從后面開(kāi)始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚,表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上,以沖洗柱子。

      4.  流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤,如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡,離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離,改善拖尾,對(duì)于堿性化合物,相對(duì)較低的PH值更有利于得到對(duì)稱峰。

      二、前沿峰

      1.  樣品過(guò)載,被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來(lái),形成前沿峰。降低樣品含量。

      2.  樣品溶劑選擇不恰當(dāng),當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰,例如,在反相色譜中用已腈做樣品溶劑,而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。

      3.  色譜柱損壞,色譜柱柱效損失,不能對(duì)物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。

      4.  在大峰前有小峰出現(xiàn),假象前沿峰,即大峰前包埋了沒(méi)有分開(kāi)的小峰。調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。

      三、基線漂移

      1.  柱溫波動(dòng),即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng),通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。使用柱溫箱,控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測(cè)器之前使用熱交換器。

      2.  流動(dòng)相不均勻,流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。使用HPLC級(jí)的溶劑,流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。

      3.  流通池被污染或有氣體。用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

      4.  流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化。更改配比或流速,為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。

      5.  樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì),以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

      四、出現(xiàn)寬峰

      1.  色譜柱污染或失效,造成塔板數(shù)降低。更換同樣類型的色譜柱,如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。

      2.  柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大。更換內(nèi)徑較小的短管路。

      3.  檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過(guò)大。減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池。

      五、基線噪音

      1.  在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣(尖銳峰)。流動(dòng)相脫氣,沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。

      2. 漏液。檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。

      3. 流動(dòng)相混合不完全。用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

      4. 溫度影響(柱溫過(guò)高,檢測(cè)器未加熱)。使用柱溫箱,減少溫度差異或加上熱交換器。

      5. 在同一條線上有其他電子設(shè)備(偶然噪聲)。斷開(kāi)LC、檢測(cè)器和記錄儀,檢查干擾是否來(lái)自于外部,加以更正。 采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。

      六、分離度不夠

      1.流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理。優(yōu)化梯度洗脫程序。

      2.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化)。重新配置流動(dòng)相。

      3. 保護(hù)柱或分析柱阻塞。去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析,如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱;如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖;如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?;如果?wèn)題仍然存在,進(jìn)口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。

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