凱基BCA蛋白含量檢測試劑盒（KGPBCA）

釹51 2018-09-17

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貨號	規(guī) 格	價格
E162-01	100 ml	332元

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凱基BCA蛋白含量檢測試劑盒

一、 試劑盒說明

BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上最常用蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成，實現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。檢測濃度下限達到25微克/毫升，最小檢測蛋白量達到0.5微克，待測樣品體積為1～20微升。

二、 試劑盒組份

組份	Cat: KGPBCA試（100 assay酶標板/20assay 1mL比色杯）	Cat: KGPBCA （250 assay酶標板/50assay 1mL比色杯）
蛋白標準溶液（0. 5 μg/μL ）	2 mL	5 mL
BCA試劑A	20 mL	25 mL×2
BCA試劑B	0.4mL	1mL

三、 操作步驟

A．酶標板操作

1. 標準曲線的繪制：取一塊酶標板，按照下表加入試劑

孔號	0	1	2	3	4	5	6	7
蛋白標準溶液（μL）	0	1	2	4	8	12	16	20
去離子水（μL）	20	19	18	16	12	8	4	0
對應蛋白含量（μg）	0	0.5	1.0	2.0	4.0	6.0	8.0	10.0

2. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻；

3. 各孔加入200μL BCA工作液；

4. 把酶標板放在振蕩器上振蕩30sec，37℃放置30分鐘，然后在562nm下比色測定。以蛋白含量（μg）為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線；

5. 稀釋待測樣品至合適濃度，使樣品稀釋液總體積為20μL，加入BCA工作液200μL，充分混勻，37℃放置30分鐘后，以標準曲線0號管做參比，在562nm波長下比色，記錄吸光值；

6. 根據(jù)所測樣品的吸光值，在標準曲線上即可查得相應的蛋白含量（μg），除以樣品稀釋液總體積（20μL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實際濃度（單位：μg/μL）。

B．分光光度計測定

1. 標準曲線的繪制：各管按照下表加入試劑

孔號	0	1	2	3	4	5	6	7
蛋白標準溶液（μL）	0	5	10	20	40	60	80	100
去離子水（μL）	100	95	90	80	60	40	20	0
對應蛋白含量（μg）	0	2.5	5.0	10.0	20.0	30.0	40.0	50.0

2. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻；

3. 各管加入1000μL BCA工作液；

4. 各管充分混勻，37℃放置30分鐘，然后在562nm下比色測定。以蛋白含量（μg）為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線；

5. 稀釋待測樣品至合適濃度，樣品稀釋液總體積為100μL，加入BCA工作液1000μL，充分混勻，37℃放置30分鐘后，以標準曲線0號管做參比，在562nm波長下比色，記錄吸光值；

6. 根據(jù)所測樣品的吸光值，在標準曲線上即可查得相應的蛋白含量（μg），除以樣品稀釋液總體積（100μL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實際濃度（單位：μg/μL）。

四、 注意事項

1. 配制好的混合BCA工作液室溫24小時內穩(wěn)定。

2. 加入BCA工作液后，也可以在室溫放置2小時，或60℃放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長孵育時間。

3. 待測樣品濃度在50～2000微克/毫升濃度范圍內有較好的線性關系。

4. BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于1mM.不適用BCA法時建議使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

5. 操作時要帶手套。